间变性大细胞性T细胞性淋巴瘤中EB病毒检测及CD56的表达
作者：江庆萍 林汉良 饶慧兰
单位：江庆萍(第一军医大学附属珠江医院病理科，广州 510282)；林汉良 饶慧兰(中山医科大学病理教研室，广州 510089)
关键词：淋巴瘤；T细胞；疱疹病毒4型；人；免疫组织化学；原位杂交；抗原；CD56
临床与实验病理学杂志990213摘要 目的：研究间变性大细胞性T细胞性淋巴瘤(anaplastic large T cell lymphoma, ALTCL)EB病毒表达情况及其与CD56阳性表达间的关系。方法：采用免疫组织化学LSAB法检测15例ALTCL中Ki-1及CD56的表达，并用原位杂交法检测其EBERs。结果：15例ALTCL中Ki-1均阳性(100%)，5例CD56阳性(33.3%)，9例EBERs阳性。其中，3例ALTCL中EBERs和CD56共同阳性。结论：ALTCL的发生同EB病毒感染有一定关系；部分ALTCL中有CD56阳性表达，EB病毒是否感染ALTCL同CD56表达无关。
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中国图书分类号 R733；R392.31 文献标识码 A 文章编号 1001-7399(1999)02-0130-02
Expression of Epstein-Barr virus and CD56 in anaplastic large T cell lymphomas
Jiang Qingping
(Dept of Pathol, Zhujiang Hospital, First Military Medical University, Guangzhou 510282)
Lin Hanliang
(Dept of Pathol, Sun Yat-Sen University of Medical Sciences, Guangzhou 510089)
, 百拇医药
Rao Huilan
(Dept of Pathol, Tumor Hospital of Sun Yat-Sen University of Medical Sciences, Guangzhou 510089)
ABSTRACT Purpose To research the expression of EBERs and the relationship between EBV infection and CD56-positive expression in anaplastic large T-cell lymphomas(ALTCL). Methods Fifteen cases of ALTCL were detected Ki-1 and CD56 by immunhistochemistry (LSAB method) and EBERs by in situ hybridization. Results Of the 15 ALTCLs, all expressed Ki-1, and 5 cases CD56 positive (33.3%). Whereas, 9 cases of 15 ALTCLs showed EBERs-positive (60%). Of 9 cases of EBERs-positive ALTCLs, 3 cases also showed expression of CD56. Conclusion The findings suggest that EBV infection may be invoved in the neoplastic transformation for ALTCL; and some ALTCLs express CD56, EBV infection is not surely related with CD56-positive ALTCL.
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KEY WORDS lymphoma, T-cell; herpesvirus 4, human; immunohistochemistry; in situ hybridization; antigens, CD56
间变性大细胞性T细胞性淋巴瘤(ALTCL)因其特殊的病理学特征及免疫表型而越来越引起人们重视。其发生同EB病毒的关系各研究者意见不一。近年来，国外有学者认为T细胞性淋巴瘤中EB病毒感染和CD56阳性表达有密切关系。作为T细胞性淋巴瘤的一个特殊类型，ALTCL是否表达CD56及EB病毒感染和CD56表达的关系尚未具体研究。我们将采用免疫组织化学法检测ALTCL表面抗原和原位杂交法检测EBERs，探讨ALTCL中EB病毒感染和CD56的表达情况及它们之间关系。
1 材料和方法
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1.1 标本来源 收集中山医科大学病理教研室及中山医科大学附属肿瘤医院病理科1990～1997年存档ALTCL活检蜡块15例。
1.2 试剂方法
1.2.1 免疫组织化学法 采用链菌素抗生物素蛋白-辣根过氧化物酶(LSAB)法检测Ki-1(Dako, M723)、CD56(Monosan, MON1006)，经微波预处理13 min和一抗4℃过夜。
1.2.2 原位杂交法 探针为异硫氰酸荧光素(FITC)标记的脱氧寡核糖核酸(Dako， Y017)。主要步骤为：0.1 g*L-1蛋白酶K于37℃消化30 min，95%乙醇脱水，滴加EBERs探针5～10 μl于37℃杂交2 h，50 μl碱性磷酸酶耦联的抗FITC(Dako，K0046)37℃孵育30 min，BCIP/NPT显色，甲基氯复染。阳性对照为B95-8细胞株。
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2 结果
15例ALTCL均Ki-1阳性(图1)。它们有共同病理学特点：瘤细胞个体大，呈多型性，圆或椭圆形，胞浆中等量，嗜双色。核异型多样，染色质粗，且凝聚于核膜，核仁大，分裂象易见。瘤细胞沿窦和滤泡间浸润，除散在分布外，有形成团块状倾向(图2)。
图1 Ki-1阳性，阳性信号为细胞膜示棕黄色颗粒。LSAB×200
图2 间变性大细胞性T细胞性淋巴瘤。HE×200
15例ALTCL中5例CD56阳性(33.3%)。阳性信号为细胞膜显示棕黄或棕褐色颗粒(图3)。
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图3 CD56阳性，阳性信号为细胞膜示综黄色颗粒。LSAB×200
15例ALTCL中9例EBERs阳性(60%)。阳性信号为细胞核内呈紫蓝色颗粒着色(图4)。其中3例EBERs和CD56共同阳性。
图4 EBERs阳性，阳性信号为细胞核内呈紫蓝色颗粒。原位杂交×200
3 讨论
人们研究发现部分间变性大细胞性淋巴瘤继发于霍奇金淋巴瘤、多形T细胞性淋巴瘤等〔1〕。国内外报道均证明霍奇金淋巴瘤、T细胞性淋巴瘤的发生均和EB病毒感染有一定关系〔2，3〕。那么，EB病毒感染和ALTCL是否有关呢?1995年，Lopategui等〔4〕报道14例香港间变性大细胞性淋巴瘤(anaplastic large cell lymphoma, ALCL)病例中3例阳性和20例美国病例中1例阳性，他认为EB病毒感染同ALCL无关。1997年，Shimakage等〔5〕报道7例ALCL均检出EB病毒，证明EB病毒在ALCL细胞转化过程中起着重要作用。大部分ALCL为T细胞型，具体关于其和EB病毒的关系很少见报道。我们的研究中15例ALTCL中9例阳性(60%)，证明EB病毒感染和ALTCL的发生有一定关系。
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CD56是神经细胞粘附分子(neural cell adhesion molecule, NCAM)的一个异构体，是一种能被抗Leu-19、NKH-1单克隆抗体识别的糖蛋白，N端连有丰富唾液酸，主要表达于人类NK细胞上及少数介导人类主要组织相容性抗原非限制性细胞作用的T淋巴细胞上〔6〕。序列免疫沉淀法证明CD56同表达于神经母细胞瘤上的NCAM分子有类似的结构，提示CD56可能同神经细胞上的NCAM有类似功能，即介导细胞粘附作用〔7〕。近年来，有国外学者研究表明部分T细胞性淋巴瘤表达CD56，并且CD56的表达同EB病毒感染有100%密切关系，认为CD56阳性TCL均感染EBV。CD56在其中可能起着中介作用〔8〕。
作为TCL的一个特殊类型，Akamatsu等〔9〕检测了12例ALTCL中无1例CD56阳性。我们的研究中，15例ALTCL中5例CD56阳性(33.3%)，9例EBERs阳性，其中3例共同阳性。说明ALTCL也有一部分表达CD56，但EB病毒是否感染ALTCL同CD56表达并无明显关系。
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作者简介：江庆萍，女，27岁，硕士，助教
林汉良，男，55岁，教授，主任医师
参考文献
1 Herbst H, Dallenbach F, Hummel G et al. Epstein-Barr virus DNA and latent gene products in Ki-1 (CD30)-positive anaplastic large cell lymphomas. Blood, 1991;78(10):2666～2673
2 Weiss LM, Chen YY, Shibata D. Epstein-Barr virus and Hodgkins disease. Am J Pathol, 1991;139:1259～1265
, 百拇医药
3 Stein H, Dienemann D, Dallennbach F et al. Peripheral T-cell lymphomas. Ann Oncol, 1991;2:163
4 Lopategui JR, Gaffey MJ, Chan JK et al. lnfrequent association of Epstein-Barr virus with CD30-positive anaplastic large cell lymphomas from American and Asian patients. Am J Surg Pathol, 1995;19(11):42～49
5 Nakamura S, Shiota M, Nakagawa A et al. Anaplastic large cell lymphoma: a distinct molecular pathologic entity: a reappraisal with special reference to p80 (NPM/ALK) expression. Am J Surg Pathol, 1997;21(12):1402～1432
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6 Nitta T, Yagita H, Sato K et al. Involvement of CD56 (NKH-1/Leu-19 antigen) as an adhesion molecule in natural killer target cell interaction. J Exp Med, 1989;170:1757
7 Lewis L, Roberto T, Joseph H et al. Identifity of leu-19(CD56) leukocyte differentiation antigen and neural cell adhesion molecule. J Exp Med, 1989;169:2233～2239
8 Tsang WY, Clain JK. EBV and T-cell lymphoma. Histopathology, 1994;25(5):501
9 Akamatsu M, Takeshita M, Ohshima K et al. Analysis of adhesion molecules in Ki-1 anaplastic large cell lymphoma. Virchows Arch, 1994;425(1):33～39
收稿日期：1998-12-11, 百拇医药
单位：江庆萍(第一军医大学附属珠江医院病理科，广州 510282)；林汉良 饶慧兰(中山医科大学病理教研室，广州 510089)
关键词：淋巴瘤；T细胞；疱疹病毒4型；人；免疫组织化学；原位杂交；抗原；CD56
临床与实验病理学杂志990213摘要 目的：研究间变性大细胞性T细胞性淋巴瘤(anaplastic large T cell lymphoma, ALTCL)EB病毒表达情况及其与CD56阳性表达间的关系。方法：采用免疫组织化学LSAB法检测15例ALTCL中Ki-1及CD56的表达，并用原位杂交法检测其EBERs。结果：15例ALTCL中Ki-1均阳性(100%)，5例CD56阳性(33.3%)，9例EBERs阳性。其中，3例ALTCL中EBERs和CD56共同阳性。结论：ALTCL的发生同EB病毒感染有一定关系；部分ALTCL中有CD56阳性表达，EB病毒是否感染ALTCL同CD56表达无关。
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中国图书分类号 R733；R392.31 文献标识码 A 文章编号 1001-7399(1999)02-0130-02
Expression of Epstein-Barr virus and CD56 in anaplastic large T cell lymphomas
Jiang Qingping
(Dept of Pathol, Zhujiang Hospital, First Military Medical University, Guangzhou 510282)
Lin Hanliang
(Dept of Pathol, Sun Yat-Sen University of Medical Sciences, Guangzhou 510089)
, 百拇医药
Rao Huilan
(Dept of Pathol, Tumor Hospital of Sun Yat-Sen University of Medical Sciences, Guangzhou 510089)
ABSTRACT Purpose To research the expression of EBERs and the relationship between EBV infection and CD56-positive expression in anaplastic large T-cell lymphomas(ALTCL). Methods Fifteen cases of ALTCL were detected Ki-1 and CD56 by immunhistochemistry (LSAB method) and EBERs by in situ hybridization. Results Of the 15 ALTCLs, all expressed Ki-1, and 5 cases CD56 positive (33.3%). Whereas, 9 cases of 15 ALTCLs showed EBERs-positive (60%). Of 9 cases of EBERs-positive ALTCLs, 3 cases also showed expression of CD56. Conclusion The findings suggest that EBV infection may be invoved in the neoplastic transformation for ALTCL; and some ALTCLs express CD56, EBV infection is not surely related with CD56-positive ALTCL.
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KEY WORDS lymphoma, T-cell; herpesvirus 4, human; immunohistochemistry; in situ hybridization; antigens, CD56
间变性大细胞性T细胞性淋巴瘤(ALTCL)因其特殊的病理学特征及免疫表型而越来越引起人们重视。其发生同EB病毒的关系各研究者意见不一。近年来，国外有学者认为T细胞性淋巴瘤中EB病毒感染和CD56阳性表达有密切关系。作为T细胞性淋巴瘤的一个特殊类型，ALTCL是否表达CD56及EB病毒感染和CD56表达的关系尚未具体研究。我们将采用免疫组织化学法检测ALTCL表面抗原和原位杂交法检测EBERs，探讨ALTCL中EB病毒感染和CD56的表达情况及它们之间关系。
1 材料和方法
, http://www.100md.com
1.1 标本来源 收集中山医科大学病理教研室及中山医科大学附属肿瘤医院病理科1990～1997年存档ALTCL活检蜡块15例。
1.2 试剂方法
1.2.1 免疫组织化学法 采用链菌素抗生物素蛋白-辣根过氧化物酶(LSAB)法检测Ki-1(Dako, M723)、CD56(Monosan, MON1006)，经微波预处理13 min和一抗4℃过夜。
1.2.2 原位杂交法 探针为异硫氰酸荧光素(FITC)标记的脱氧寡核糖核酸(Dako， Y017)。主要步骤为：0.1 g*L-1蛋白酶K于37℃消化30 min，95%乙醇脱水，滴加EBERs探针5～10 μl于37℃杂交2 h，50 μl碱性磷酸酶耦联的抗FITC(Dako，K0046)37℃孵育30 min，BCIP/NPT显色，甲基氯复染。阳性对照为B95-8细胞株。
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2 结果
15例ALTCL均Ki-1阳性(图1)。它们有共同病理学特点：瘤细胞个体大，呈多型性，圆或椭圆形，胞浆中等量，嗜双色。核异型多样，染色质粗，且凝聚于核膜，核仁大，分裂象易见。瘤细胞沿窦和滤泡间浸润，除散在分布外，有形成团块状倾向(图2)。
图1 Ki-1阳性，阳性信号为细胞膜示棕黄色颗粒。LSAB×200
图2 间变性大细胞性T细胞性淋巴瘤。HE×200
15例ALTCL中5例CD56阳性(33.3%)。阳性信号为细胞膜显示棕黄或棕褐色颗粒(图3)。
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图3 CD56阳性，阳性信号为细胞膜示综黄色颗粒。LSAB×200
15例ALTCL中9例EBERs阳性(60%)。阳性信号为细胞核内呈紫蓝色颗粒着色(图4)。其中3例EBERs和CD56共同阳性。
图4 EBERs阳性，阳性信号为细胞核内呈紫蓝色颗粒。原位杂交×200
3 讨论
人们研究发现部分间变性大细胞性淋巴瘤继发于霍奇金淋巴瘤、多形T细胞性淋巴瘤等〔1〕。国内外报道均证明霍奇金淋巴瘤、T细胞性淋巴瘤的发生均和EB病毒感染有一定关系〔2，3〕。那么，EB病毒感染和ALTCL是否有关呢?1995年，Lopategui等〔4〕报道14例香港间变性大细胞性淋巴瘤(anaplastic large cell lymphoma, ALCL)病例中3例阳性和20例美国病例中1例阳性，他认为EB病毒感染同ALCL无关。1997年，Shimakage等〔5〕报道7例ALCL均检出EB病毒，证明EB病毒在ALCL细胞转化过程中起着重要作用。大部分ALCL为T细胞型，具体关于其和EB病毒的关系很少见报道。我们的研究中15例ALTCL中9例阳性(60%)，证明EB病毒感染和ALTCL的发生有一定关系。
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CD56是神经细胞粘附分子(neural cell adhesion molecule, NCAM)的一个异构体，是一种能被抗Leu-19、NKH-1单克隆抗体识别的糖蛋白，N端连有丰富唾液酸，主要表达于人类NK细胞上及少数介导人类主要组织相容性抗原非限制性细胞作用的T淋巴细胞上〔6〕。序列免疫沉淀法证明CD56同表达于神经母细胞瘤上的NCAM分子有类似的结构，提示CD56可能同神经细胞上的NCAM有类似功能，即介导细胞粘附作用〔7〕。近年来，有国外学者研究表明部分T细胞性淋巴瘤表达CD56，并且CD56的表达同EB病毒感染有100%密切关系，认为CD56阳性TCL均感染EBV。CD56在其中可能起着中介作用〔8〕。
作为TCL的一个特殊类型，Akamatsu等〔9〕检测了12例ALTCL中无1例CD56阳性。我们的研究中，15例ALTCL中5例CD56阳性(33.3%)，9例EBERs阳性，其中3例共同阳性。说明ALTCL也有一部分表达CD56，但EB病毒是否感染ALTCL同CD56表达并无明显关系。
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作者简介：江庆萍，女，27岁，硕士，助教
林汉良，男，55岁，教授，主任医师
参考文献
1 Herbst H, Dallenbach F, Hummel G et al. Epstein-Barr virus DNA and latent gene products in Ki-1 (CD30)-positive anaplastic large cell lymphomas. Blood, 1991;78(10):2666～2673
2 Weiss LM, Chen YY, Shibata D. Epstein-Barr virus and Hodgkins disease. Am J Pathol, 1991;139:1259～1265
, 百拇医药
3 Stein H, Dienemann D, Dallennbach F et al. Peripheral T-cell lymphomas. Ann Oncol, 1991;2:163
4 Lopategui JR, Gaffey MJ, Chan JK et al. lnfrequent association of Epstein-Barr virus with CD30-positive anaplastic large cell lymphomas from American and Asian patients. Am J Surg Pathol, 1995;19(11):42～49
5 Nakamura S, Shiota M, Nakagawa A et al. Anaplastic large cell lymphoma: a distinct molecular pathologic entity: a reappraisal with special reference to p80 (NPM/ALK) expression. Am J Surg Pathol, 1997;21(12):1402～1432
, http://www.100md.com
6 Nitta T, Yagita H, Sato K et al. Involvement of CD56 (NKH-1/Leu-19 antigen) as an adhesion molecule in natural killer target cell interaction. J Exp Med, 1989;170:1757
7 Lewis L, Roberto T, Joseph H et al. Identifity of leu-19(CD56) leukocyte differentiation antigen and neural cell adhesion molecule. J Exp Med, 1989;169:2233～2239
8 Tsang WY, Clain JK. EBV and T-cell lymphoma. Histopathology, 1994;25(5):501
9 Akamatsu M, Takeshita M, Ohshima K et al. Analysis of adhesion molecules in Ki-1 anaplastic large cell lymphoma. Virchows Arch, 1994;425(1):33～39
收稿日期：1998-12-11, 百拇医药