CD44表达与乳腺癌淋巴结转移及预后相关因素的关系
作者：何彦丽 张雅洁 顾莹莹 张惠球 陈国勤
单位：何彦丽(广州医学院病理学教研室)；张雅洁(广州医学院病理学教研室)；顾莹莹(第一附属医院病理科 510182)；张惠球(广州医学院病理学教研室)；陈国勤(第一附属医院病理科 510182)
关键词：乳腺肿瘤；抗原；CD44；淋巴转移
临床与实验病理学杂志990205摘要 目的：探讨CD44表达与乳腺癌淋巴结转移与预后的关系。方法：采用LSAB法对76例乳腺癌伴淋巴结转移和无转移组CD44表达进行了免疫组化检测，并结合临床资料、增殖细胞核抗原(PCNA)、雌激素受体(ER)表达情况进行综合分析。结果：CD44阳性率在乳腺癌伴淋巴结转移组为70.6%，无转移组为45.2%，两组间存在显著性差异(P<0.05)，随着组织学分级的增高CD44表达呈递增趋势，Ⅰ级与Ⅱ、Ⅲ级间阳性率差异存在显著性(P<0.05)；CD44与PCNA表达存在平行关系，与ER表达呈负相关趋势。结论：CD44表达与乳腺癌淋巴结转移及预后有关，是乳腺癌患者预后判定有价值的生物学指标。
, http://www.100md.com
中国图书分类号 R737.9； R392.31 文献标识码 A 文章编号 1001-7399(1999)02-0107-03
Relationship of CD44 expression to lymphnode metastasis and prognosis in breast carcinoma
He Yanli Zhang Yajie Gu Yingying et al
(Dept of Pathol, Gangzhou Medical College, Guangzhou 510182)
ABSTRACT Purpose To study the relationship between the expression of CD44 and the lymphnode metastasis and prognosis of breast cancer. Methods Seventy-six of breast cancer with or without lymphnode metastasis were examined by LSAB method. Results The positivity rate of CD44 expression in node-positive and in node-negative groups were 70.6% and 45.2% respectively (P<0.05) . With the increase of histological grade, the positivity rate of CD44 expression increased (P<0.05). There was a tendency to over-expression of the CD44 which was accompanied by PCNA over-expression and ER low-expression. Conclusion The expression of CD44 is closely linked to lymphnode metastasis and prognosis of breast cancinoma and should be considered to a certain extent as an index of malignant degree and prognosis.
, 百拇医药
KEY WORDS breast neoplasms; antigens, CD44;lymphatic metastasis
CD44是分布极为广泛的细胞表面跨膜糖蛋白，属白细胞粘附分子，又称透明质酸受体或特异性淋巴细胞归巢受体，介导细胞与细胞、细胞与基质间的粘连和解离。近年来研究表明，CD44表达与恶性淋巴瘤、胃肠道肿瘤转移关系密切〔2〕，但CD44表达与乳腺癌转移的关系尚存争议。国内报道较少，我们应用LSAB法检测乳腺癌组织中CD44的表达情况，并首次结合乳腺癌预后指标PCNA、ER联合分析，旨在探讨CD44表达与乳腺癌淋巴结转移及预后的关系。
1 材料和方法
1.1 材料 均选自广州医学院第一附属医院1995～1997年间乳腺癌手术切除标本，标本经10%福尔马林固定，石蜡包埋，制成5 μm厚切片，进行常规HE及免疫组化染色。患者全为女性，年龄最大81岁，最小26岁，平均53.5岁。
, 百拇医药
1.2 方法
1.2.1 免疫组化方法 采用LSAB法，切片常规脱蜡至水后用1%胰蛋白酶消化20 min，蒸馏水洗后再置于枸椽酸缓冲液中微波抗原修复10 min，室温冷却至40℃，余步骤按试剂盒说明书进行，DAB显色，苏木素衬染，树胶封片。所用一抗CD44、PCNA、ER鼠抗人单克隆抗体、K681鼠、免疫组化试剂盒均购自Dako公司。每批实验均设阳性对照和阴性对照(PBS代替一抗)，CD44抗体稀释度为1∶40。
1.2.2 阳性结果判定 阳性反应 肿瘤细胞膜表面出现棕黄色颗粒，阳性细胞数>5%判为阳性〔5〕。
1.2.3 统计学处理 采用χ2检验。
2 结果
, 百拇医药 76例乳腺癌标本中CD44阳性表达者43例，总阳性率为56.6%(43/76)。
2.1 CD44表达与患者年龄的关系 按≤50岁、>50岁两个年龄段进行分组，比较两组间CD44阳性表达率，P>0.05，差异无显著性。
2.2 CD44表达与肿瘤大小的关系 按肿瘤最大径≤2.0 cm,>2.0 cm但≤5.0 cm及>5.0 cm分为3组，3组间阳性率比较差别无统计学意义。
2.3 CD44表达与乳腺癌腋窝淋巴结转移的关系 76例乳腺癌中伴腋窝淋巴结转移组34例，CD44阳性24例(70.6%)，而无淋巴结转移组42例中仅19例(45.2%)呈阳性表达，两组间差异有显著性(P<0.05，图1，2)。淋巴结转移组又按转移数目多少分为<4个、≥4个2组，CD44表达阳性率分别为73.91%(17/23)、63.63%(7/11)，两组间比较差别无统计学意义，P>0.05。
, 百拇医药
图1 乳腺髓样癌伴淋巴结转移组原发灶CD44阳性。LSAB×100
图2 乳腺髓样癌伴淋巴结转移灶CD44阳性。LSAB×400
2.4 CD44表达与乳腺癌组织学分级的关系 除去不能进行组织学分级的10例外(包括4例典型髓样癌，1例原位癌，3例早浸癌，2例特殊类型癌)，余66例乳腺癌按改良Bloom-R标准〔1〕即根据核异型性、腺管形成情况、核分裂象多少进行评价，按总分划分为3级，Ⅰ级(3～5分)；Ⅱ级(6～7分)；Ⅲ级(8～9分)。其中Ⅰ级14例，Ⅱ级38例，Ⅲ级14例，由于Ⅲ级中CD44阴性表达例数少，故将其与Ⅱ级归于一类，Ⅰ级与Ⅱ、Ⅲ级间CD44阳性率差异存在显著性，P<0.05(表1)。
, 百拇医药
表1 CD44表达与乳腺癌组织学分级的关系 组织学分级
n
CD44
+
-
Ⅰ级
14
5(35.7%)
9(64.3%)
Ⅱ+Ⅲ级
52
36(69.2%)
, http://www.100md.com
16(30.8%)
合计
66
41(62.1%)
25(37.9%)
χ2=5.27，P<0.05
2.5 CD44与PCNA表达间的关系 在CD44阳性表达的43例乳腺癌组织中PCNA阳性42例(95.3%)，且70%为强阳性表达(阳性细胞数>50%)，而CD44阴性的33例乳腺癌组织中PCNA阳性22例(66.7%)，强阳性表达43.3%，揭示CD44与PCNA表达存在一定的平行关系。
2.6 CD44与ER表达的关系 随机取33例行ER免疫组化染色，其中伴淋巴结转移组13例，CD44、ER阳性表达率分别为76.9%(10/13)、38.5%(5/13)，无淋巴结转移组20例，CD44、ER阳性率分别为35%(7/20)、75%(15/20)，两组间差异均存在显著性。在CD44阳性的17例乳腺癌组织中ER阳性35.3%(6/17例)，阴性64.7%(11/17)；而阴性的16例中ER阳性68.7%(11/16)，阴性31.3%(5/16例)，两者间有负相关趋势。
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3 讨论
人 CD44基因位于染色体11P，由20个外显子构成，根据编码CD44分子外显子组成的不同将CD44分为CD44S和CD44V两型，CD44分子广泛存在于正常淋巴细胞，成纤维细胞，上皮细胞表面。其主要功能之一是介导淋巴细胞与毛细血管后微静脉内皮细胞结合，使淋巴细胞易于穿过血管壁回到淋巴组织，即介导淋巴细胞特异性归巢。Matsumura等在1992年首次应用Southernblot杂交法证实乳腺癌组织中CD44呈过表达，并发现在已转移乳腺癌原发灶及转移灶中均能检测到9条以上信号反应很强的杂交带，而正常组织中仅能检测到1～2条低水平表达的杂交带，认为CD44表达与乳腺癌发生淋巴结转移有关〔3〕。Kaufmann采用免疫组化法亦发现CD44在乳腺癌组织中的表达升高，且在伴淋巴结转移组表现尤为明显〔4〕。但也有一些学者的研究结果与此相左，如Friedrichs K采用RT-PCR及免疫组化法研究发现CD44高表达与乳腺癌细胞较高的分化有关，而与淋巴结转移及预后无关〔5〕。我们采用LSAB免疫组化法对76例乳腺癌组织进行CD44表达的检测，发现CD44表达在淋巴结转移组与无转移组阳性率差别显著，分别为70.6%及45.2%，与最近国内的一篇报道结果相近(转移组阳性率为73.3%，无转移组为40%)〔6〕。并发现CD44表达与乳腺癌组织学分级关系密切，Ⅰ级与Ⅱ、Ⅲ级间存在显著性差异，现已证实乳腺癌组织学分级较单纯分型对判定预后更有意义〔1〕，故认为CD44过表达与乳腺癌淋巴结转移及预后有关。
, 百拇医药
PCNA代表细胞增殖活性，一般认为增殖活性高的细胞由于细胞间张力增大，粘附性降低，更易于脱离原发灶向远处扩散、转移。PCNA对于判定乳腺癌及多种实体肿瘤的组织分化程度及临床预后具有可靠价值。ER水平是乳腺癌患者比较明确的预后指标，多数ER呈高水平表达的乳腺癌患者对激素治疗敏感，预后良好。我们首次将CD44、PCNA、ER联合进行检测，发现CD44表达与PCNA呈平行关系，与ER表达呈负相关趋势，进一步提示CD44可作为乳腺癌患者预后判定的指标，CD44、PCNA、ER联合检测对于指导乳腺癌患者术后治疗、高危病人筛选、预防复发具有重要意义。
作者简介：何彦丽，女，28岁，硕士
张雅洁，女，38岁，副教授，硕士生导师。研究方向：肿瘤病理
参考文献
, http://www.100md.com
1 Dalton LW, Page DL, Dupont WD. Histologic grading of breast carcinoma：A reproducibiligy study. Cancer,1994;73(11):2765～2770
2 Gunthert U, Stauder R, Mayer B et al. Are CD44 variant isoforms involved in human tumor progression? Cancer Surv,1995;24:19～42
3 Matsumura Y, Tarin D. Significance of CD44 gene prodects for cancer diagnosis and disease evalution. Lancet,1992;340:1053～1058
, 百拇医药
4 Kaufmann M, Heider KH, Sinn HP et al. CD44 variant exon epitopes in primary breast cancer and length of survival. Lancet,1995;345(8950):615～619
5 Friedrichs K, Franke F, Lisboa BW et al. CD44 isoforms correlate with cellular differentiation but not with prognosis in human breast cancer. Cancer Res,1995;55(22):5424～5433
6 毛慧生，冯玉梅，刘 红. 乳腺癌淋巴结转移与nm 23、CD44基因表达产物定量分析. 中国肿瘤临床，1998；25(1)：19～22
收稿日期：1999-03-24, 百拇医药
单位：何彦丽(广州医学院病理学教研室)；张雅洁(广州医学院病理学教研室)；顾莹莹(第一附属医院病理科 510182)；张惠球(广州医学院病理学教研室)；陈国勤(第一附属医院病理科 510182)
关键词：乳腺肿瘤；抗原；CD44；淋巴转移
临床与实验病理学杂志990205摘要 目的：探讨CD44表达与乳腺癌淋巴结转移与预后的关系。方法：采用LSAB法对76例乳腺癌伴淋巴结转移和无转移组CD44表达进行了免疫组化检测，并结合临床资料、增殖细胞核抗原(PCNA)、雌激素受体(ER)表达情况进行综合分析。结果：CD44阳性率在乳腺癌伴淋巴结转移组为70.6%，无转移组为45.2%，两组间存在显著性差异(P<0.05)，随着组织学分级的增高CD44表达呈递增趋势，Ⅰ级与Ⅱ、Ⅲ级间阳性率差异存在显著性(P<0.05)；CD44与PCNA表达存在平行关系，与ER表达呈负相关趋势。结论：CD44表达与乳腺癌淋巴结转移及预后有关，是乳腺癌患者预后判定有价值的生物学指标。
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中国图书分类号 R737.9； R392.31 文献标识码 A 文章编号 1001-7399(1999)02-0107-03
Relationship of CD44 expression to lymphnode metastasis and prognosis in breast carcinoma
He Yanli Zhang Yajie Gu Yingying et al
(Dept of Pathol, Gangzhou Medical College, Guangzhou 510182)
ABSTRACT Purpose To study the relationship between the expression of CD44 and the lymphnode metastasis and prognosis of breast cancer. Methods Seventy-six of breast cancer with or without lymphnode metastasis were examined by LSAB method. Results The positivity rate of CD44 expression in node-positive and in node-negative groups were 70.6% and 45.2% respectively (P<0.05) . With the increase of histological grade, the positivity rate of CD44 expression increased (P<0.05). There was a tendency to over-expression of the CD44 which was accompanied by PCNA over-expression and ER low-expression. Conclusion The expression of CD44 is closely linked to lymphnode metastasis and prognosis of breast cancinoma and should be considered to a certain extent as an index of malignant degree and prognosis.
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KEY WORDS breast neoplasms; antigens, CD44;lymphatic metastasis
CD44是分布极为广泛的细胞表面跨膜糖蛋白，属白细胞粘附分子，又称透明质酸受体或特异性淋巴细胞归巢受体，介导细胞与细胞、细胞与基质间的粘连和解离。近年来研究表明，CD44表达与恶性淋巴瘤、胃肠道肿瘤转移关系密切〔2〕，但CD44表达与乳腺癌转移的关系尚存争议。国内报道较少，我们应用LSAB法检测乳腺癌组织中CD44的表达情况，并首次结合乳腺癌预后指标PCNA、ER联合分析，旨在探讨CD44表达与乳腺癌淋巴结转移及预后的关系。
1 材料和方法
1.1 材料 均选自广州医学院第一附属医院1995～1997年间乳腺癌手术切除标本，标本经10%福尔马林固定，石蜡包埋，制成5 μm厚切片，进行常规HE及免疫组化染色。患者全为女性，年龄最大81岁，最小26岁，平均53.5岁。
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1.2 方法
1.2.1 免疫组化方法 采用LSAB法，切片常规脱蜡至水后用1%胰蛋白酶消化20 min，蒸馏水洗后再置于枸椽酸缓冲液中微波抗原修复10 min，室温冷却至40℃，余步骤按试剂盒说明书进行，DAB显色，苏木素衬染，树胶封片。所用一抗CD44、PCNA、ER鼠抗人单克隆抗体、K681鼠、免疫组化试剂盒均购自Dako公司。每批实验均设阳性对照和阴性对照(PBS代替一抗)，CD44抗体稀释度为1∶40。
1.2.2 阳性结果判定 阳性反应 肿瘤细胞膜表面出现棕黄色颗粒，阳性细胞数>5%判为阳性〔5〕。
1.2.3 统计学处理 采用χ2检验。
2 结果
, 百拇医药 76例乳腺癌标本中CD44阳性表达者43例，总阳性率为56.6%(43/76)。
2.1 CD44表达与患者年龄的关系 按≤50岁、>50岁两个年龄段进行分组，比较两组间CD44阳性表达率，P>0.05，差异无显著性。
2.2 CD44表达与肿瘤大小的关系 按肿瘤最大径≤2.0 cm,>2.0 cm但≤5.0 cm及>5.0 cm分为3组，3组间阳性率比较差别无统计学意义。
2.3 CD44表达与乳腺癌腋窝淋巴结转移的关系 76例乳腺癌中伴腋窝淋巴结转移组34例，CD44阳性24例(70.6%)，而无淋巴结转移组42例中仅19例(45.2%)呈阳性表达，两组间差异有显著性(P<0.05，图1，2)。淋巴结转移组又按转移数目多少分为<4个、≥4个2组，CD44表达阳性率分别为73.91%(17/23)、63.63%(7/11)，两组间比较差别无统计学意义，P>0.05。
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图1 乳腺髓样癌伴淋巴结转移组原发灶CD44阳性。LSAB×100
图2 乳腺髓样癌伴淋巴结转移灶CD44阳性。LSAB×400
2.4 CD44表达与乳腺癌组织学分级的关系 除去不能进行组织学分级的10例外(包括4例典型髓样癌，1例原位癌，3例早浸癌，2例特殊类型癌)，余66例乳腺癌按改良Bloom-R标准〔1〕即根据核异型性、腺管形成情况、核分裂象多少进行评价，按总分划分为3级，Ⅰ级(3～5分)；Ⅱ级(6～7分)；Ⅲ级(8～9分)。其中Ⅰ级14例，Ⅱ级38例，Ⅲ级14例，由于Ⅲ级中CD44阴性表达例数少，故将其与Ⅱ级归于一类，Ⅰ级与Ⅱ、Ⅲ级间CD44阳性率差异存在显著性，P<0.05(表1)。
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表1 CD44表达与乳腺癌组织学分级的关系 组织学分级
n
CD44
+
-
Ⅰ级
14
5(35.7%)
9(64.3%)
Ⅱ+Ⅲ级
52
36(69.2%)
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16(30.8%)
合计
66
41(62.1%)
25(37.9%)
χ2=5.27，P<0.05
2.5 CD44与PCNA表达间的关系 在CD44阳性表达的43例乳腺癌组织中PCNA阳性42例(95.3%)，且70%为强阳性表达(阳性细胞数>50%)，而CD44阴性的33例乳腺癌组织中PCNA阳性22例(66.7%)，强阳性表达43.3%，揭示CD44与PCNA表达存在一定的平行关系。
2.6 CD44与ER表达的关系 随机取33例行ER免疫组化染色，其中伴淋巴结转移组13例，CD44、ER阳性表达率分别为76.9%(10/13)、38.5%(5/13)，无淋巴结转移组20例，CD44、ER阳性率分别为35%(7/20)、75%(15/20)，两组间差异均存在显著性。在CD44阳性的17例乳腺癌组织中ER阳性35.3%(6/17例)，阴性64.7%(11/17)；而阴性的16例中ER阳性68.7%(11/16)，阴性31.3%(5/16例)，两者间有负相关趋势。
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3 讨论
人 CD44基因位于染色体11P，由20个外显子构成，根据编码CD44分子外显子组成的不同将CD44分为CD44S和CD44V两型，CD44分子广泛存在于正常淋巴细胞，成纤维细胞，上皮细胞表面。其主要功能之一是介导淋巴细胞与毛细血管后微静脉内皮细胞结合，使淋巴细胞易于穿过血管壁回到淋巴组织，即介导淋巴细胞特异性归巢。Matsumura等在1992年首次应用Southernblot杂交法证实乳腺癌组织中CD44呈过表达，并发现在已转移乳腺癌原发灶及转移灶中均能检测到9条以上信号反应很强的杂交带，而正常组织中仅能检测到1～2条低水平表达的杂交带，认为CD44表达与乳腺癌发生淋巴结转移有关〔3〕。Kaufmann采用免疫组化法亦发现CD44在乳腺癌组织中的表达升高，且在伴淋巴结转移组表现尤为明显〔4〕。但也有一些学者的研究结果与此相左，如Friedrichs K采用RT-PCR及免疫组化法研究发现CD44高表达与乳腺癌细胞较高的分化有关，而与淋巴结转移及预后无关〔5〕。我们采用LSAB免疫组化法对76例乳腺癌组织进行CD44表达的检测，发现CD44表达在淋巴结转移组与无转移组阳性率差别显著，分别为70.6%及45.2%，与最近国内的一篇报道结果相近(转移组阳性率为73.3%，无转移组为40%)〔6〕。并发现CD44表达与乳腺癌组织学分级关系密切，Ⅰ级与Ⅱ、Ⅲ级间存在显著性差异，现已证实乳腺癌组织学分级较单纯分型对判定预后更有意义〔1〕，故认为CD44过表达与乳腺癌淋巴结转移及预后有关。
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PCNA代表细胞增殖活性，一般认为增殖活性高的细胞由于细胞间张力增大，粘附性降低，更易于脱离原发灶向远处扩散、转移。PCNA对于判定乳腺癌及多种实体肿瘤的组织分化程度及临床预后具有可靠价值。ER水平是乳腺癌患者比较明确的预后指标，多数ER呈高水平表达的乳腺癌患者对激素治疗敏感，预后良好。我们首次将CD44、PCNA、ER联合进行检测，发现CD44表达与PCNA呈平行关系，与ER表达呈负相关趋势，进一步提示CD44可作为乳腺癌患者预后判定的指标，CD44、PCNA、ER联合检测对于指导乳腺癌患者术后治疗、高危病人筛选、预防复发具有重要意义。
作者简介：何彦丽，女，28岁，硕士
张雅洁，女，38岁，副教授，硕士生导师。研究方向：肿瘤病理
参考文献
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1 Dalton LW, Page DL, Dupont WD. Histologic grading of breast carcinoma：A reproducibiligy study. Cancer,1994;73(11):2765～2770
2 Gunthert U, Stauder R, Mayer B et al. Are CD44 variant isoforms involved in human tumor progression? Cancer Surv,1995;24:19～42
3 Matsumura Y, Tarin D. Significance of CD44 gene prodects for cancer diagnosis and disease evalution. Lancet,1992;340:1053～1058
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4 Kaufmann M, Heider KH, Sinn HP et al. CD44 variant exon epitopes in primary breast cancer and length of survival. Lancet,1995;345(8950):615～619
5 Friedrichs K, Franke F, Lisboa BW et al. CD44 isoforms correlate with cellular differentiation but not with prognosis in human breast cancer. Cancer Res,1995;55(22):5424～5433
6 毛慧生，冯玉梅，刘 红. 乳腺癌淋巴结转移与nm 23、CD44基因表达产物定量分析. 中国肿瘤临床，1998；25(1)：19～22
收稿日期：1999-03-24, 百拇医药