PCR技术和镜检法同时检测淋球菌的结果分析
作者：黄明锋
单位：广西邕宁县人民医院(邕宁 530200)
关键词：淋球菌；聚合酶链反应；双链去氧核糖核酸酶；镜检法
右江民族医学院学报/9902106 摘要 用PCR技术和涂片革兰氏染色镜检法同时对80例疑为性病患者进行淋球菌检测。结果PCR法男女阳性率分别为76.09%和73.53%，而涂片镜检法男女阳性率分别为71.74%和41.18%。并对镜检法检测的影响因素进行了讨论。
迄今国内外已有不少应用聚合酶链反应(PCR)技术检测性病的报道。在我国PCR技术是近10年来才快速发展起来的新科技项目，过去10年中，PCR技术的进展使实验室能直接从样品中以高敏感度检测淋球菌[1]。美国1996年9月修订的淋病实验室诊断标准是：①从临床标本中分离到典型革兰氏阴性、氧化酶阳性双球菌；②临床标本中检测到淋病奈瑟菌抗原或核酸；③从男性尿道涂片中的粒细胞内观察到革兰氏染色阴性双球菌[2]。本组对80例尿道或阴道分泌物标本，选用PCR法检测双链去氧核糖核酸酶(NG-DNA)，并同时涂片用革兰氏染色镜检淋球菌。现报道如下。
, 百拇医药
1 材料和方法
1.1 标本来源 选自1996～1997年到我院门诊外科和妇科检查疑为性病的部分患者。男性采用尿道拭子，女性全部用阴道拭子。采用阴道拭子样品既简便，又可避免交叉感染的危险，对控制淋病很有意义[3]。
1.2 仪器 PCR扩增仪是美国产的PTC 150型，紫外线分析仪、电泳仪均为上海复星高科技(集团)有限公司产品；高速台式离心机为上海医用分析仪器厂生产的LG-16型；显微镜为国产光学显微镜。
1.3 试剂 PCR淋球菌试剂盒为中美合资上海华泰生物工程实业有限公司生产。革兰氏染液按《全国临床检验操作规程》的要求配制。
1.4 检验方法 PCR淋球菌检测按试剂说明书进行操作，淋球菌涂片镜检按《全国临床检验操作规程》进行检查。
, 百拇医药
1.5 结果判断 PCR法若在390bp处出现橙黄色条带(与阳性对照处于同一位置)，则为淋球菌感染阳性。涂片法以在中性粒细胞内发现革兰氏阴性双球菌为阳性。
2 结果
80份标本分别用PCR法和涂片镜检法同时检测淋球菌，结果见表1。
表1 淋球菌PCR法与镜检法比较
PCR法
镜检法
男
女
男
女
, http://www.100md.com 标本数
46
34
46
34
阳性数
35
25
33
14
阳性率(%)
76.09
73.53
, 百拇医药 71.74
41.18
由表1可知PCR法总阳性率为75%，而涂片镜检法仅为58.75%，两者差异有高度显著性(P<
0.01)，PCR法男女阳性率分别为76.09%和73.53%，基本相等(P>0.05)，而涂片法男女阳性率分别为65.22%和41.18%，差异有高度显著性(P<0.01)。
3 讨论
PCR技术的先进性可检测到fg水平，但在我国仍未提到是否纳入淋病的诊断标准，在我国此病的实验室诊断标准目前仍然是：①直接涂片镜检在中性粒细胞内见到革兰氏阴性双球菌。②淋菌培养阳性。虽然培养法的特异性和准确性都非常高，但所用的时间较长，一般都要超过24h才得结果，不易作出早期诊断，临床医生不欢迎使用该法，仅当临床治疗效果不佳时，才考虑做细菌培养和药敏试验[4]。
, 百拇医药
PCR法检测淋球菌只要3h即得出结果，由表1可知该技术无论对男性还是女性，其阳性率都比涂片法高。本组试验发现PCR法有1例假阴性结果，经调查发现这例患者在来本院化验前曾去过私人诊所治疗过，引起假阴性可能与这原因有关。有报道说[5]PCR在实际工作中一个较难解决的问题是假阳性较高，主要原因是污染，使它至今不能成为一个常规方法。笔者认为只要试剂质量能保证达到国际水平，而且标本的离心处理、扩增、电泳及观察结果能分开房间进行操作，便能控制这些污染。
由表1可知，淋球菌涂片镜检法的阳性率不如PCR法，但该法具有设备简单、操作简便、快速等优点。若取材、涂片、染色得当、判断准确，直接涂片的阳性率可达50%～99%。本组试验男性为65.22%，跟曾泳而等的报道基本相符[6]，而女性仅为41.18%。本组试验涂片法有4例(男性1例，女性3例)为假阳性，假阴性2例(男女各1例)。造成女性检出率低以及假阴性结果高的原因，可能与女性的生理特征有关，因女性的阴道分泌物呈酸性，而淋菌遇酸可自溶，取材时棉拭子若碰到阴道壁，势必降低检出率。另外女性无论是阴道还是宫颈杂菌都很多，有的在形态上很象淋菌，镜检时给判断造成困难，这也会成为假阳性高的原因。总之，对于淋病的实验室检查，PCR法不愧为一种快速、准确的新方法。而涂片镜检法适于男性检查，不大适宜于女性的检查。 参考文献
, http://www.100md.com
[1] 叶元康，陆震宇，吴茵茹，等.PCR测定淋病奈瑟菌的实验室研究和临床应用.中华微生物学和免疫学杂志，1996；16(增刊2)：36
[2] 邵长庚，王千秋，编译.徐文严审核.美国最近修订的性病诊断标准.国外医学(皮肤性病学分册)，1998；24(1)：41
[3] Edward WH Ⅲ. Shanfun Ching, Stephens J, et al. Diagnosis of Neisseria gonorrhoeae infection in women by using the ligase chain reaction on patient-obtained vaginal swabs. J Chin Microbiol，1997；35：2129
[4] 李朝阳.性传播性尿道炎的诊治现况.广西医学论文选编，1994；(12)：839
[5] 吕绳凯，储迅涛，等.淋病的实验室诊断.中华医学检验杂志，1998；21(3)：187
[6] 曾泳而，陈万山，等.192例性病患者衣原体支原体及淋病奈瑟菌检测结果分析.广西医科大学学报，1995；12(1)：49
(1998-08-27收稿), 百拇医药
单位：广西邕宁县人民医院(邕宁 530200)
关键词：淋球菌；聚合酶链反应；双链去氧核糖核酸酶；镜检法
右江民族医学院学报/9902106 摘要 用PCR技术和涂片革兰氏染色镜检法同时对80例疑为性病患者进行淋球菌检测。结果PCR法男女阳性率分别为76.09%和73.53%，而涂片镜检法男女阳性率分别为71.74%和41.18%。并对镜检法检测的影响因素进行了讨论。
迄今国内外已有不少应用聚合酶链反应(PCR)技术检测性病的报道。在我国PCR技术是近10年来才快速发展起来的新科技项目，过去10年中，PCR技术的进展使实验室能直接从样品中以高敏感度检测淋球菌[1]。美国1996年9月修订的淋病实验室诊断标准是：①从临床标本中分离到典型革兰氏阴性、氧化酶阳性双球菌；②临床标本中检测到淋病奈瑟菌抗原或核酸；③从男性尿道涂片中的粒细胞内观察到革兰氏染色阴性双球菌[2]。本组对80例尿道或阴道分泌物标本，选用PCR法检测双链去氧核糖核酸酶(NG-DNA)，并同时涂片用革兰氏染色镜检淋球菌。现报道如下。
, 百拇医药
1 材料和方法
1.1 标本来源 选自1996～1997年到我院门诊外科和妇科检查疑为性病的部分患者。男性采用尿道拭子，女性全部用阴道拭子。采用阴道拭子样品既简便，又可避免交叉感染的危险，对控制淋病很有意义[3]。
1.2 仪器 PCR扩增仪是美国产的PTC 150型，紫外线分析仪、电泳仪均为上海复星高科技(集团)有限公司产品；高速台式离心机为上海医用分析仪器厂生产的LG-16型；显微镜为国产光学显微镜。
1.3 试剂 PCR淋球菌试剂盒为中美合资上海华泰生物工程实业有限公司生产。革兰氏染液按《全国临床检验操作规程》的要求配制。
1.4 检验方法 PCR淋球菌检测按试剂说明书进行操作，淋球菌涂片镜检按《全国临床检验操作规程》进行检查。
, 百拇医药
1.5 结果判断 PCR法若在390bp处出现橙黄色条带(与阳性对照处于同一位置)，则为淋球菌感染阳性。涂片法以在中性粒细胞内发现革兰氏阴性双球菌为阳性。
2 结果
80份标本分别用PCR法和涂片镜检法同时检测淋球菌，结果见表1。
表1 淋球菌PCR法与镜检法比较
PCR法
镜检法
男
女
男
女
, http://www.100md.com 标本数
46
34
46
34
阳性数
35
25
33
14
阳性率(%)
76.09
73.53
, 百拇医药 71.74
41.18
由表1可知PCR法总阳性率为75%，而涂片镜检法仅为58.75%，两者差异有高度显著性(P<
0.01)，PCR法男女阳性率分别为76.09%和73.53%，基本相等(P>0.05)，而涂片法男女阳性率分别为65.22%和41.18%，差异有高度显著性(P<0.01)。
3 讨论
PCR技术的先进性可检测到fg水平，但在我国仍未提到是否纳入淋病的诊断标准，在我国此病的实验室诊断标准目前仍然是：①直接涂片镜检在中性粒细胞内见到革兰氏阴性双球菌。②淋菌培养阳性。虽然培养法的特异性和准确性都非常高，但所用的时间较长，一般都要超过24h才得结果，不易作出早期诊断，临床医生不欢迎使用该法，仅当临床治疗效果不佳时，才考虑做细菌培养和药敏试验[4]。
, 百拇医药
PCR法检测淋球菌只要3h即得出结果，由表1可知该技术无论对男性还是女性，其阳性率都比涂片法高。本组试验发现PCR法有1例假阴性结果，经调查发现这例患者在来本院化验前曾去过私人诊所治疗过，引起假阴性可能与这原因有关。有报道说[5]PCR在实际工作中一个较难解决的问题是假阳性较高，主要原因是污染，使它至今不能成为一个常规方法。笔者认为只要试剂质量能保证达到国际水平，而且标本的离心处理、扩增、电泳及观察结果能分开房间进行操作，便能控制这些污染。
由表1可知，淋球菌涂片镜检法的阳性率不如PCR法，但该法具有设备简单、操作简便、快速等优点。若取材、涂片、染色得当、判断准确，直接涂片的阳性率可达50%～99%。本组试验男性为65.22%，跟曾泳而等的报道基本相符[6]，而女性仅为41.18%。本组试验涂片法有4例(男性1例，女性3例)为假阳性，假阴性2例(男女各1例)。造成女性检出率低以及假阴性结果高的原因，可能与女性的生理特征有关，因女性的阴道分泌物呈酸性，而淋菌遇酸可自溶，取材时棉拭子若碰到阴道壁，势必降低检出率。另外女性无论是阴道还是宫颈杂菌都很多，有的在形态上很象淋菌，镜检时给判断造成困难，这也会成为假阳性高的原因。总之，对于淋病的实验室检查，PCR法不愧为一种快速、准确的新方法。而涂片镜检法适于男性检查，不大适宜于女性的检查。 参考文献
, http://www.100md.com
[1] 叶元康，陆震宇，吴茵茹，等.PCR测定淋病奈瑟菌的实验室研究和临床应用.中华微生物学和免疫学杂志，1996；16(增刊2)：36
[2] 邵长庚，王千秋，编译.徐文严审核.美国最近修订的性病诊断标准.国外医学(皮肤性病学分册)，1998；24(1)：41
[3] Edward WH Ⅲ. Shanfun Ching, Stephens J, et al. Diagnosis of Neisseria gonorrhoeae infection in women by using the ligase chain reaction on patient-obtained vaginal swabs. J Chin Microbiol，1997；35：2129
[4] 李朝阳.性传播性尿道炎的诊治现况.广西医学论文选编，1994；(12)：839
[5] 吕绳凯，储迅涛，等.淋病的实验室诊断.中华医学检验杂志，1998；21(3)：187
[6] 曾泳而，陈万山，等.192例性病患者衣原体支原体及淋病奈瑟菌检测结果分析.广西医科大学学报，1995；12(1)：49
(1998-08-27收稿), 百拇医药