重组人蛋白激酶CK2α和β亚基的原核表达、纯化及鉴定
作者：刘新光 梁念慈 马涧泉 刘 文
单位：(刘新光 梁念慈 刘文)广东医学院医用生化研究所，湛江 524023 (马涧泉)中山医科大学生化教研室，广州 510089
关键词：
广东医学院学报990225 蛋白激酶CK2是一种信使非依赖性丝/苏氨酸蛋白激酶，是由两个催化亚基(α或α′)和两个调节亚基(β)组成的四聚体。目前该酶有近200种蛋白底物，底物涉及到细胞功能的许多方面，但其确切功能仍不清楚。由于该酶在细胞中的含量较少，提取纯化得到研究所需的量较困难。因此克隆并表达重组蛋白激酶CK 2对于深入研究该酶具有十分重要的意义。
将作者等克隆并经DNA测序确证的编码人蛋白激酶CK2 α和β亚基cDNA的重组质粒，分别转化表达菌BL21(DE3)。加IPTG诱导表达，收获细菌超声破碎，加DNase Ⅰ 水解 DNA。将CK2 α表达菌匀浆液的高速离心上清再进行超离心所得的上清，用于α 亚基的纯化。而CK2 β的纯化则取高速离心的β表达菌沉淀加缓冲液搅拌过夜后取再次离心的上清。α亚基的纯化则依次进行DE-52、P11磷酸纤维素和肝素-Sepharose 4 B 层析，得到一电泳纯的CK2 α蛋白(42 KD)。β亚基的纯化只需通过P 11磷酸纤维素层析分离，也可得到电泳纯的CK2 β亚基(26 KD)。
将纯化的CK2 α和β亚基按等摩尔分子混合即可构成有完全生物活性的全酶，其生化特性与该酶的已知性质一致，如既可以ATP也可以GTP作为磷酸供体，受肝素显著性抑制和精胺的激活，不受cAMP和Ca2+ 等第二信使的影响等。Western-blot的结果显示：纯化的CK2 α和CK2 β亚基蛋白均分别与小鼠抗人CK2 α和β亚基的McAb发生特异性反应，且无交叉免疫反应。
这些结果证明作者等克隆表达与纯化的两种重组蛋白分别是人蛋白激酶CK2 α和CK2 β亚基。大量重组CK2蛋白的获得为进一步直接研究该酶的作用打下了坚实的物质基础。
注释：广东省自然科学基金(940586)和广东省高教厅重点学科经费(9306)资助项目
收稿日期：1998-10-12, 百拇医药
单位：(刘新光 梁念慈 刘文)广东医学院医用生化研究所，湛江 524023 (马涧泉)中山医科大学生化教研室，广州 510089
关键词：
广东医学院学报990225 蛋白激酶CK2是一种信使非依赖性丝/苏氨酸蛋白激酶，是由两个催化亚基(α或α′)和两个调节亚基(β)组成的四聚体。目前该酶有近200种蛋白底物，底物涉及到细胞功能的许多方面，但其确切功能仍不清楚。由于该酶在细胞中的含量较少，提取纯化得到研究所需的量较困难。因此克隆并表达重组蛋白激酶CK 2对于深入研究该酶具有十分重要的意义。
将作者等克隆并经DNA测序确证的编码人蛋白激酶CK2 α和β亚基cDNA的重组质粒，分别转化表达菌BL21(DE3)。加IPTG诱导表达，收获细菌超声破碎，加DNase Ⅰ 水解 DNA。将CK2 α表达菌匀浆液的高速离心上清再进行超离心所得的上清，用于α 亚基的纯化。而CK2 β的纯化则取高速离心的β表达菌沉淀加缓冲液搅拌过夜后取再次离心的上清。α亚基的纯化则依次进行DE-52、P11磷酸纤维素和肝素-Sepharose 4 B 层析，得到一电泳纯的CK2 α蛋白(42 KD)。β亚基的纯化只需通过P 11磷酸纤维素层析分离，也可得到电泳纯的CK2 β亚基(26 KD)。
将纯化的CK2 α和β亚基按等摩尔分子混合即可构成有完全生物活性的全酶，其生化特性与该酶的已知性质一致，如既可以ATP也可以GTP作为磷酸供体，受肝素显著性抑制和精胺的激活，不受cAMP和Ca2+ 等第二信使的影响等。Western-blot的结果显示：纯化的CK2 α和CK2 β亚基蛋白均分别与小鼠抗人CK2 α和β亚基的McAb发生特异性反应，且无交叉免疫反应。
这些结果证明作者等克隆表达与纯化的两种重组蛋白分别是人蛋白激酶CK2 α和CK2 β亚基。大量重组CK2蛋白的获得为进一步直接研究该酶的作用打下了坚实的物质基础。
注释：广东省自然科学基金(940586)和广东省高教厅重点学科经费(9306)资助项目
收稿日期：1998-10-12, 百拇医药