氟他胺胶囊(片)药代动力学及其生物等效性评价
作者：谢林 刘晓东 刘国卿
单位：中国药科大学药代研究中心 南京， 210009
关键词：药代动力学；氟他胺；羟基氟他胺；生物等效性
中国药师/990202 摘 要 用HPLC法研究10名健康男性受试者单剂量口服500 mg氟他胺胶囊和片后， 血浆中羟基氟他胺浓度及其药代动力学指标。并以片剂为参比制剂， 对胶囊的生物利用度及其生物等效性进行评价。结果显示受试者服药后， 血浆中原型药物浓度低， 且变异性大， 并快速转化为羟基代谢物。测得的胶囊Tmax2.7 h, Cmax2.22 μg.ml-1，片剂的Tmax3.3 h，Cmax2.00μg.ml-1。两制剂的t1/2约为5.7 h。AUC24分别为20.93±4.01和19.43±5.35 μg.ml-1。相对生物利用度为110.22±14.82%。经方差分析和双向单侧t检验显示两种剂型的AUC24和AUC生物等效。
, http://www.100md.com
氟他胺(flutamide, Flu)为非类固醇类治疗前列腺肥大和前列腺癌的药物， 动物和人体代谢试验显示Flu在体内吸收后快速代谢[1～4]， 在血浆中主要活性代谢物为羟基氟他胺(2-hydroxyflutamide, OHF)， 而Flu浓度很低， 变异性大， 往往难以测到， 通常用主要活性代谢产物OHF进行药代动力学研究[2～4]。有关Flu及其OHF在中国人体内的药物动力学研究， 报道较少。本文建立了人血浆中Flu及其活性代谢物OHF浓度测定法， 以OHF浓度为对象， 对口服氟他胺胶囊后的药代动力学进行研究， 并以其片剂为标准参比制剂， 进行生物等效性进行评价， 为临床用药提供参考。
1 材料与方法
1.1 仪器
Varian 5060高效液相色谱仪， UV-100检测器， HP 3390色谱数据处理仪， 7125型手动进样阀， 50μl定量管。
, 百拇医药
1.2 药品与试剂
氟他胺胶囊， 每颗含氟他胺125 mg， 批号950601， 氟他胺片， 每片含氟他胺250 mg， 批号950501， Flu和OHF标准品由江苏淮阴制药厂提供。其余试剂均为市售分析纯。
1.3 受试者选择
10名男性健康受试者， 体重53～70(62.4±5.6)kg， 年龄21～24(21.9±1.0)岁。体检心、肺、肝、肾功能正常， 并签约知情同意书。实验前两周及实验中未服其它药物。实验期间统一饮食。
1.4 试验方案
10名受试者， 按体重配对后随机分成为A、B两组后， 交叉口服氟他胺片或胶囊。即A组先口服氟他胺片， 后口服氟他胺胶囊， B组先口服氟他胺胶囊， 后口服氟他胺片。剂量均为500 mg。两种制剂间隔一周。于早上7∶00空腹服药500 mg， 用200 ml温开水送服。服药后3 h方可进食。于服药后0、0.5、1、1.5、2.0、 3、4、6、8、12和24 h于肘静脉取血3 ml置肝素化试管中， 离心， 分取血浆， 用HPLC法测定血浆中药物浓度。受试者于服药后至少在观察室中停留8 h， 观察受试者的耐受性和不良反应发生情况以及一般情况。一旦出现严重的不良反应， 应采取相应的急救措施和治疗。
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1.5 血浆中Flu及OHF测定
血浆中Flu及OHF测定参照文献建立的HPLC法[3]， 略加改进。色谱条件： 流动相由重蒸馏水和乙腈(1∶1 v/v)组成。色谱柱为Lichrosorb RP-18， 5 μm， 柱长150 mm×6.0 mm I.D.， 检测波长230 nm， 量程为0.01 AUFS， 流动相流速为1.0 ml.min-1。血清样品提取与分离： 取肝素化血浆1.00 ml， 加5 ml乙醚： 正己烷混合液， 振荡2 min， 3 500 r.min-1， 离心5 min。取上清液4 ml于另一试管中， 置50℃水浴上用氮气吹干， 再用150 μl流动相溶解残渣， 取50 μl进样， 用峰高作定量分析。
1.6 数据处理
, 百拇医药
受试者口服500 mg Flu后， 血浆中Flu的浓度很低， 变异性大， 只得以其活性代谢物OHF为对象， 进行Flu在人体内药代动力学和生物等效性研究。药物浓度-时间数据采用非房室模型法进行分析， 曲线下面积(AUC)和平均驻留时间(MRT)分别按下列各式估算：
AUC24=Σ(Ci+Ci～1)(ti-ti～1)/2
AUC∞=AUC24+C24/λz
AUMC24=Σ(Ci.ti+Ci～1.ti～1)(ti-ti～1)/2
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AUMC∞=AUMC24+C24(24//λz+1/λ2z)
MRT=AUMC∞/AUC∞
式中C24为服药后24 h的血药浓度， λz为末端相消除速率常数， λz由末端相4～5个时间数据ln(C)～t半对数回归求得， t1/2=0.693/λz， Tmax和Cmax为实测值。假定Flu按一级动力学转化为OHF， 则生物利用度的计算公式仍可用下式表示， 即：
1.7 统计学分析及生物等效性评价方法
, 百拇医药
所得参数用交叉实验设计的三因素方差分析， 其中AUC和Cmax等先进行对数(ln)转换后分析， 并用双向单侧t检验作生物等效性评价(α=0.05)。
即： H0： μT-μR≤θ1或μT-μR≥θ2
H1： θ1≤μT-μR≤θ2
统计量：
数据经对数转换后， 则：
t1和t2服从自由度λ(λ=n-2)的t分布， 临界值为t1-α(λ)， s为误差项的均方平方根。若t1≥t1-α(λ)和t2≥t1-α(λ)同时成立， 则接受两制剂生物等效的假设。
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2 结果与讨论
2.1 血浆中Flu和OHF的HPLC测定
我们参照文献[3]， 改用环己烷； 乙醚混合物提取， 使药物的提取回收率高，血浆中杂质不干扰Flu和OHF的测定， Flu和OHF的保留时间分别为3.8和 6.4 min(图1)。三种浓度的回收率： Flu： 20， 80和160.0 ng.ml-1， 105.5±10.5， 94.1±7.8和93.0±11.4%， OHF： 0.10， 1.00和4.00 μg.ml-1。110.0±10.0， 95.0±6.0和96.0±5.2%。日内日间变异系数小于10%。最低可定量浓度Flu为5.0 ng.ml-1， OHF： 50 ng.ml-1。线性范围： Flu： 5.0～500.0 ng.ml-1， OHF： 0.05～4.00 μg.ml-1。符合生物样品分析的要求。
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2.2 药代动力学
受试者单剂量口服Flu胶囊和片后， 血浆中Flu的浓度较低， 多数受试者在服药4 h以后， 血药浓度在最低可定量浓度以下， 变异性大， 而代谢物OHF有较高的浓度， 浓度的变异性小， 在2～4 h达到峰值， 与文献的结果一致[2～3]。图2给出了受试者服用两种制剂后的血浆中OHF平均浓度。用矩量法估算的药代动力学参数列于表1。
表1 10名受试者口服用500 mgFlu胶囊
和片OHF的药代动力学参数 参 数
胶 囊
片
Tmax， h
2.7±0.8
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3.3 ±1.2
Cmax, μg.ml-1
2.22±0.45
2.00±0.99
t1/2, h
5.60±1.73
5.79±0.89
MRT, h
9.98±2.26
10.44±1.73
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AUC24, μg.h-1/ml
20.93±4.01
19.43±5.35
AUC∞, μg.h-1/ml
22.92±5.44
21.52±5.94
F1, %
110.22±14.82
F2, %
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108.60±15.20
图1 血浆中氟他胺和羟基氟他胺HPLC图
A. 空白血浆 B. 标准品 C. 服药1 h后的血浆
1. 羟基氟他胺 2. 氟他胺
由表1可见， 口服用500 mgFlu胶囊和片剂后， 以代谢物OHF为对象， 计算的峰浓度分别为2.22和2.00 μg.ml-1， 峰时间为2.7和3.3 h，经方差分析显示两种制剂的药代动力学参数无显著性差异(P>0.05)， 以片剂为参比， 算得胶囊的相对生物利用度F1和F2分别为110.2±14.82和108.60±15.20%， 进一步经双向单侧t检验， 表明两制剂的AUC24和AUC∞生物等效。
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图2 10名受试者口服用500 mgFlu胶囊(●)和
片(○)后血浆中OHF平均浓度
±s
Radwanski[2]， 在12名健康老年人(66±1岁)中估算的老人口服 250 mgFlu胶囊后OHF的峰时间2.7 h与我们在青年人中的结果2.7 h一致， 峰浓度为0.89 μg.ml-1(剂量折算为0.356 μg.ml-1/100 mg)， 低于我们的结果2.22 μg.ml-1(0.444 μg.ml-1/100 mg)， t1/2 8.1 h大于我们的结果5.6 h， AUC24为3.64 μg.h-1/ml(1.456 μg.h-1/ml/100 mg)显著低于AUC24 20.93±4.01 μg.h-1/ml(4.186 μg.h-1/ml/100 mg)。Belamger A, et al[3]在25～35青年人中估算的口服250 mgFlu后OHF的峰时间在2～4 h， 峰浓度约为0.83 μg.ml-1(0.322 μg.ml-1/100 mg)， 也低于我们的值。以上结果提示Flu在体内转化为OHF程度方面可能存在年龄或种族差异性。
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参 考 文 献
[1] Katchen B, Buxbaum S. Disposition of a new, nonsteroid, antiandrogen, α,α,α-trilluoro-2-methyl-4'-nitro-m-propionotoluidide(flutamide), in men following a single oral 200 mg dose. J Clin Endocrinol. 1975, 41:373～379
[2] Radwanski E, Perentesis G, Symchowicz S, et al. Single and multiple dose pharmacokinetic evaluation of flutamide in normal geriatric volunteers. J Clin Pharmacol. 29:554～558
, 百拇医药
[3] Belanger A, Glasson M, Couture J, et al. Plasma levels of hydroxyflutamide in patients with prostastic cancer receiving the combined hormonal therapy: an LHRH agonist and flutamide. The Prostate. 1988, 12:79～84
[4] Asade DH, Prizont L, Muino JP, et al. Steady-state hydroxyflutamide plasma levels after the administration of two dosage forms of flutamide. Cancer Chemother Pharmacol. 1991, 27:401～405
(19981201收稿), 百拇医药
单位：中国药科大学药代研究中心 南京， 210009
关键词：药代动力学；氟他胺；羟基氟他胺；生物等效性
中国药师/990202 摘 要 用HPLC法研究10名健康男性受试者单剂量口服500 mg氟他胺胶囊和片后， 血浆中羟基氟他胺浓度及其药代动力学指标。并以片剂为参比制剂， 对胶囊的生物利用度及其生物等效性进行评价。结果显示受试者服药后， 血浆中原型药物浓度低， 且变异性大， 并快速转化为羟基代谢物。测得的胶囊Tmax2.7 h, Cmax2.22 μg.ml-1，片剂的Tmax3.3 h，Cmax2.00μg.ml-1。两制剂的t1/2约为5.7 h。AUC24分别为20.93±4.01和19.43±5.35 μg.ml-1。相对生物利用度为110.22±14.82%。经方差分析和双向单侧t检验显示两种剂型的AUC24和AUC生物等效。
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氟他胺(flutamide, Flu)为非类固醇类治疗前列腺肥大和前列腺癌的药物， 动物和人体代谢试验显示Flu在体内吸收后快速代谢[1～4]， 在血浆中主要活性代谢物为羟基氟他胺(2-hydroxyflutamide, OHF)， 而Flu浓度很低， 变异性大， 往往难以测到， 通常用主要活性代谢产物OHF进行药代动力学研究[2～4]。有关Flu及其OHF在中国人体内的药物动力学研究， 报道较少。本文建立了人血浆中Flu及其活性代谢物OHF浓度测定法， 以OHF浓度为对象， 对口服氟他胺胶囊后的药代动力学进行研究， 并以其片剂为标准参比制剂， 进行生物等效性进行评价， 为临床用药提供参考。
1 材料与方法
1.1 仪器
Varian 5060高效液相色谱仪， UV-100检测器， HP 3390色谱数据处理仪， 7125型手动进样阀， 50μl定量管。
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1.2 药品与试剂
氟他胺胶囊， 每颗含氟他胺125 mg， 批号950601， 氟他胺片， 每片含氟他胺250 mg， 批号950501， Flu和OHF标准品由江苏淮阴制药厂提供。其余试剂均为市售分析纯。
1.3 受试者选择
10名男性健康受试者， 体重53～70(62.4±5.6)kg， 年龄21～24(21.9±1.0)岁。体检心、肺、肝、肾功能正常， 并签约知情同意书。实验前两周及实验中未服其它药物。实验期间统一饮食。
1.4 试验方案
10名受试者， 按体重配对后随机分成为A、B两组后， 交叉口服氟他胺片或胶囊。即A组先口服氟他胺片， 后口服氟他胺胶囊， B组先口服氟他胺胶囊， 后口服氟他胺片。剂量均为500 mg。两种制剂间隔一周。于早上7∶00空腹服药500 mg， 用200 ml温开水送服。服药后3 h方可进食。于服药后0、0.5、1、1.5、2.0、 3、4、6、8、12和24 h于肘静脉取血3 ml置肝素化试管中， 离心， 分取血浆， 用HPLC法测定血浆中药物浓度。受试者于服药后至少在观察室中停留8 h， 观察受试者的耐受性和不良反应发生情况以及一般情况。一旦出现严重的不良反应， 应采取相应的急救措施和治疗。
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1.5 血浆中Flu及OHF测定
血浆中Flu及OHF测定参照文献建立的HPLC法[3]， 略加改进。色谱条件： 流动相由重蒸馏水和乙腈(1∶1 v/v)组成。色谱柱为Lichrosorb RP-18， 5 μm， 柱长150 mm×6.0 mm I.D.， 检测波长230 nm， 量程为0.01 AUFS， 流动相流速为1.0 ml.min-1。血清样品提取与分离： 取肝素化血浆1.00 ml， 加5 ml乙醚： 正己烷混合液， 振荡2 min， 3 500 r.min-1， 离心5 min。取上清液4 ml于另一试管中， 置50℃水浴上用氮气吹干， 再用150 μl流动相溶解残渣， 取50 μl进样， 用峰高作定量分析。
1.6 数据处理
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受试者口服500 mg Flu后， 血浆中Flu的浓度很低， 变异性大， 只得以其活性代谢物OHF为对象， 进行Flu在人体内药代动力学和生物等效性研究。药物浓度-时间数据采用非房室模型法进行分析， 曲线下面积(AUC)和平均驻留时间(MRT)分别按下列各式估算：
AUC24=Σ(Ci+Ci～1)(ti-ti～1)/2
AUC∞=AUC24+C24/λz
AUMC24=Σ(Ci.ti+Ci～1.ti～1)(ti-ti～1)/2
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AUMC∞=AUMC24+C24(24//λz+1/λ2z)
MRT=AUMC∞/AUC∞
式中C24为服药后24 h的血药浓度， λz为末端相消除速率常数， λz由末端相4～5个时间数据ln(C)～t半对数回归求得， t1/2=0.693/λz， Tmax和Cmax为实测值。假定Flu按一级动力学转化为OHF， 则生物利用度的计算公式仍可用下式表示， 即：
1.7 统计学分析及生物等效性评价方法
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所得参数用交叉实验设计的三因素方差分析， 其中AUC和Cmax等先进行对数(ln)转换后分析， 并用双向单侧t检验作生物等效性评价(α=0.05)。
即： H0： μT-μR≤θ1或μT-μR≥θ2
H1： θ1≤μT-μR≤θ2
统计量：
数据经对数转换后， 则：t1和t2服从自由度λ(λ=n-2)的t分布， 临界值为t1-α(λ)， s为误差项的均方平方根。若t1≥t1-α(λ)和t2≥t1-α(λ)同时成立， 则接受两制剂生物等效的假设。
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2 结果与讨论
2.1 血浆中Flu和OHF的HPLC测定
我们参照文献[3]， 改用环己烷； 乙醚混合物提取， 使药物的提取回收率高，血浆中杂质不干扰Flu和OHF的测定， Flu和OHF的保留时间分别为3.8和 6.4 min(图1)。三种浓度的回收率： Flu： 20， 80和160.0 ng.ml-1， 105.5±10.5， 94.1±7.8和93.0±11.4%， OHF： 0.10， 1.00和4.00 μg.ml-1。110.0±10.0， 95.0±6.0和96.0±5.2%。日内日间变异系数小于10%。最低可定量浓度Flu为5.0 ng.ml-1， OHF： 50 ng.ml-1。线性范围： Flu： 5.0～500.0 ng.ml-1， OHF： 0.05～4.00 μg.ml-1。符合生物样品分析的要求。
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2.2 药代动力学
受试者单剂量口服Flu胶囊和片后， 血浆中Flu的浓度较低， 多数受试者在服药4 h以后， 血药浓度在最低可定量浓度以下， 变异性大， 而代谢物OHF有较高的浓度， 浓度的变异性小， 在2～4 h达到峰值， 与文献的结果一致[2～3]。图2给出了受试者服用两种制剂后的血浆中OHF平均浓度。用矩量法估算的药代动力学参数列于表1。
表1 10名受试者口服用500 mgFlu胶囊
和片OHF的药代动力学参数 参 数
胶 囊
片
Tmax， h
2.7±0.8
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3.3 ±1.2
Cmax, μg.ml-1
2.22±0.45
2.00±0.99
t1/2, h
5.60±1.73
5.79±0.89
MRT, h
9.98±2.26
10.44±1.73
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AUC24, μg.h-1/ml
20.93±4.01
19.43±5.35
AUC∞, μg.h-1/ml
22.92±5.44
21.52±5.94
F1, %
110.22±14.82
F2, %
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图1 血浆中氟他胺和羟基氟他胺HPLC图
A. 空白血浆 B. 标准品 C. 服药1 h后的血浆
1. 羟基氟他胺 2. 氟他胺
由表1可见， 口服用500 mgFlu胶囊和片剂后， 以代谢物OHF为对象， 计算的峰浓度分别为2.22和2.00 μg.ml-1， 峰时间为2.7和3.3 h，经方差分析显示两种制剂的药代动力学参数无显著性差异(P>0.05)， 以片剂为参比， 算得胶囊的相对生物利用度F1和F2分别为110.2±14.82和108.60±15.20%， 进一步经双向单侧t检验， 表明两制剂的AUC24和AUC∞生物等效。
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图2 10名受试者口服用500 mgFlu胶囊(●)和
片(○)后血浆中OHF平均浓度
±sRadwanski[2]， 在12名健康老年人(66±1岁)中估算的老人口服 250 mgFlu胶囊后OHF的峰时间2.7 h与我们在青年人中的结果2.7 h一致， 峰浓度为0.89 μg.ml-1(剂量折算为0.356 μg.ml-1/100 mg)， 低于我们的结果2.22 μg.ml-1(0.444 μg.ml-1/100 mg)， t1/2 8.1 h大于我们的结果5.6 h， AUC24为3.64 μg.h-1/ml(1.456 μg.h-1/ml/100 mg)显著低于AUC24 20.93±4.01 μg.h-1/ml(4.186 μg.h-1/ml/100 mg)。Belamger A, et al[3]在25～35青年人中估算的口服250 mgFlu后OHF的峰时间在2～4 h， 峰浓度约为0.83 μg.ml-1(0.322 μg.ml-1/100 mg)， 也低于我们的值。以上结果提示Flu在体内转化为OHF程度方面可能存在年龄或种族差异性。
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参 考 文 献
[1] Katchen B, Buxbaum S. Disposition of a new, nonsteroid, antiandrogen, α,α,α-trilluoro-2-methyl-4'-nitro-m-propionotoluidide(flutamide), in men following a single oral 200 mg dose. J Clin Endocrinol. 1975, 41:373～379
[2] Radwanski E, Perentesis G, Symchowicz S, et al. Single and multiple dose pharmacokinetic evaluation of flutamide in normal geriatric volunteers. J Clin Pharmacol. 29:554～558
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[3] Belanger A, Glasson M, Couture J, et al. Plasma levels of hydroxyflutamide in patients with prostastic cancer receiving the combined hormonal therapy: an LHRH agonist and flutamide. The Prostate. 1988, 12:79～84
[4] Asade DH, Prizont L, Muino JP, et al. Steady-state hydroxyflutamide plasma levels after the administration of two dosage forms of flutamide. Cancer Chemother Pharmacol. 1991, 27:401～405
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