过氧亚硝基阴离子致肺内微血管壁通透性增高的实验研究
作者：谷振勇 凌亦凌 刘满英 刘伟娜 朱铁年 黄善生
单位：河北医科大学基础医学院病理生理学教研室(石家庄050017)
关键词：肺动脉；代谢；内皮，血管；代谢；超氧化物；药物作用；大鼠
河北医科大学学报990218 中图号 R563.8;R363.21
过氧亚硝基阴离子(Peroxynitrite anion, ONOO-)是一氧化氮(NO)和超氧阴离子(O2
)的快速反应产物。 与NO和O2相比，ONOO-具有明显的氧化性，并能衍生多种其它的氧化剂。在急性肺损伤(ALI)发病过程中，肺内的NO与O2生成明显增多，肺内血管壁通透性增加。推测ONOO-在肺脏产生后可能参与介导ALI的发生。本实验采用气管内推入ONOO-的方法，观察肺内微血管壁通透性的变化，探讨ONOO-对肺血管内皮屏障功能的影响和在ALI发生中的意义。
, 百拇医药
1 材料与方法
1.1 动物:SD大鼠43只，雌雄不拘，体质量172±9 g，由河北医科大学实验动物中心提供。
1.2 ONOO-的制备:采用Beckman等报道的方法合成。ONOO-储备液于-20 ℃保存备用。采用紫外分析方法进行鉴定和浓度定量。把ONOO-溶液置于100 ℃水中10分钟， 制备分解的(dec)ONOO-，降至室温后备用。
1.3 实验程序:实验分为Ⅰ:ONOO- 0.2 mmol/L组(n=8)、Ⅱ: ONOO- 1.0 mmol/L组(n=8)、Ⅲ:ONOO- 2.5 mmol/L 组(n=8)、Ⅳ:dec ONOO-组(n=7)和Ⅴ:溶剂对照组(n=9)，溶剂为与Ⅲ组pH值的碱化生理盐水。大鼠麻醉后，于颈部分离暴露气管。舌下静脉注入伊文思蓝(EB)30 mg/kg。5分钟后，不同组动物在直视下往气管内分别推入ONOO-、dec ONOO-或溶剂200 μl。2小时后，两侧颈动脉放血处死,剪开右心室充分放出肺血管内的残血。
, 百拇医药
1.4 检测指标:①反映微血管壁通透性变化的指标：肺系数，肺湿干比； 肺含水量(%)，用经典方法检测；肺组织EB含量，用甲酰胺法检测。②肺组织病理学改变：常规制备石蜡切片，HE染色，光镜观察。
1.5 统计学分析:数据为均值±标准差(
±s)，用PSI统计软件包进行差异性检验。
2 结果
2.1 ONOO-对肺微血管壁通透性变化的影响,见表1。
表1 ONOO-气管内推入后肺系数、肺湿干比、肺含水量和伊文思蓝含量的变化
(±s) 分组
, http://www.100md.com
例数
肺系数
肺湿干比
水体积分数(%)
EB质量分数
(ng/mg)
Ⅰ
8
6.18±0.43*△*△*
4.82±0.33*△*
, 百拇医药
79.16±1.43
344.43± 51.16*
Ⅱ
8
7.44±0.87
5.24±0.84*△*
, http://www.100md.com
80.56±2.57*△*△*
390.98±109.02
Ⅲ
8
7.48±0.77
5.20±0.07*△*△*
, http://www.100md.com
80.77±0.38*△*△*
413.80±81.79*△*
Ⅳ
7
5.12±0.30
4.35±0.24
76.96±1.29
301.77±15.95
Ⅴ
9
, 百拇医药
4.94±0.26
4.30±0.27
76.69±1.51
280.26±61.42
与Ⅴ组比较,* P<0.05, ** P<0.01,*** P<0.001
与Ⅳ组比较,△ P<0.05,△△ P<0.01,△△△ P<0.001
2.2 肺组织病理学变化:Ⅰ组肺泡腔变小，肺泡壁增厚，呈轻度萎陷征象。 间质血管明显淤血，有局灶性出血。血管内皮细胞肿胀、核深染。Ⅱ和Ⅲ组,肺组织弥漫性萎陷，肺泡腔明显窄小，有处甚至实变。肺内血管高度淤血伴出血，内皮细胞脱落。细支气管粘膜上皮变性脱落。上述改变以Ⅲ组为著。Ⅳ组肺泡轻度萎陷。Ⅴ组肺泡腔大，肺泡壁薄，有处略增厚，毛细血管轻度扩张充血。
3 讨论
实验首次观察到气管内一次推入ONOO-可引起肺内微血管壁通透性显著增高； 肺组织出现弥漫性肺泡萎陷和间质血管明显扩张充血， 并随ONOO-剂量增加而加重。而溶剂无明显致伤作用。说明ONOO-在肺内生成增加时参与介导ALI的发生。
注：国家自然科学基金资助课题(No. 39870317, No. 39570304)
(1998-12-21 收稿), 百拇医药
单位：河北医科大学基础医学院病理生理学教研室(石家庄050017)
关键词：肺动脉；代谢；内皮，血管；代谢；超氧化物；药物作用；大鼠
河北医科大学学报990218 中图号 R563.8;R363.21
过氧亚硝基阴离子(Peroxynitrite anion, ONOO-)是一氧化氮(NO)和超氧阴离子(O2
)的快速反应产物。 与NO和O2相比，ONOO-具有明显的氧化性，并能衍生多种其它的氧化剂。在急性肺损伤(ALI)发病过程中，肺内的NO与O2生成明显增多，肺内血管壁通透性增加。推测ONOO-在肺脏产生后可能参与介导ALI的发生。本实验采用气管内推入ONOO-的方法，观察肺内微血管壁通透性的变化，探讨ONOO-对肺血管内皮屏障功能的影响和在ALI发生中的意义。, 百拇医药
1 材料与方法
1.1 动物:SD大鼠43只，雌雄不拘，体质量172±9 g，由河北医科大学实验动物中心提供。
1.2 ONOO-的制备:采用Beckman等报道的方法合成。ONOO-储备液于-20 ℃保存备用。采用紫外分析方法进行鉴定和浓度定量。把ONOO-溶液置于100 ℃水中10分钟， 制备分解的(dec)ONOO-，降至室温后备用。
1.3 实验程序:实验分为Ⅰ:ONOO- 0.2 mmol/L组(n=8)、Ⅱ: ONOO- 1.0 mmol/L组(n=8)、Ⅲ:ONOO- 2.5 mmol/L 组(n=8)、Ⅳ:dec ONOO-组(n=7)和Ⅴ:溶剂对照组(n=9)，溶剂为与Ⅲ组pH值的碱化生理盐水。大鼠麻醉后，于颈部分离暴露气管。舌下静脉注入伊文思蓝(EB)30 mg/kg。5分钟后，不同组动物在直视下往气管内分别推入ONOO-、dec ONOO-或溶剂200 μl。2小时后，两侧颈动脉放血处死,剪开右心室充分放出肺血管内的残血。
, 百拇医药
1.4 检测指标:①反映微血管壁通透性变化的指标：肺系数，肺湿干比； 肺含水量(%)，用经典方法检测；肺组织EB含量，用甲酰胺法检测。②肺组织病理学改变：常规制备石蜡切片，HE染色，光镜观察。
1.5 统计学分析:数据为均值±标准差(
±s)，用PSI统计软件包进行差异性检验。2 结果
2.1 ONOO-对肺微血管壁通透性变化的影响,见表1。
表1 ONOO-气管内推入后肺系数、肺湿干比、肺含水量和伊文思蓝含量的变化
(
±s) 分组, http://www.100md.com
例数
肺系数
肺湿干比
水体积分数(%)
EB质量分数
(ng/mg)
Ⅰ
8
6.18±0.43*△*△*
4.82±0.33*△*
, 百拇医药
79.16±1.43
344.43± 51.16*
Ⅱ
8
7.44±0.87
5.24±0.84*△*
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80.56±2.57*△*△*
390.98±109.02
Ⅲ
8
7.48±0.77
5.20±0.07*△*△*
, http://www.100md.com
80.77±0.38*△*△*
413.80±81.79*△*
Ⅳ
7
5.12±0.30
4.35±0.24
76.96±1.29
301.77±15.95
Ⅴ
9
, 百拇医药
4.94±0.26
4.30±0.27
76.69±1.51
280.26±61.42
与Ⅴ组比较,* P<0.05, ** P<0.01,*** P<0.001
与Ⅳ组比较,△ P<0.05,△△ P<0.01,△△△ P<0.001
2.2 肺组织病理学变化:Ⅰ组肺泡腔变小，肺泡壁增厚，呈轻度萎陷征象。 间质血管明显淤血，有局灶性出血。血管内皮细胞肿胀、核深染。Ⅱ和Ⅲ组,肺组织弥漫性萎陷，肺泡腔明显窄小，有处甚至实变。肺内血管高度淤血伴出血，内皮细胞脱落。细支气管粘膜上皮变性脱落。上述改变以Ⅲ组为著。Ⅳ组肺泡轻度萎陷。Ⅴ组肺泡腔大，肺泡壁薄，有处略增厚，毛细血管轻度扩张充血。
3 讨论
实验首次观察到气管内一次推入ONOO-可引起肺内微血管壁通透性显著增高； 肺组织出现弥漫性肺泡萎陷和间质血管明显扩张充血， 并随ONOO-剂量增加而加重。而溶剂无明显致伤作用。说明ONOO-在肺内生成增加时参与介导ALI的发生。
注：国家自然科学基金资助课题(No. 39870317, No. 39570304)
(1998-12-21 收稿), 百拇医药