前列腺癌的实验室检测进展
作者：唐书强 黄玉霞 彭黎明
单位：华西医科大学附属第一医院检验科(成都 610041)
关键词：
华西医学WEST CHINA MEDICAL JOURNAL1999年 第14卷 第2期 Vol 综述 审校
[中图分类号]R737.25 [文献标识码]D
[文章编号]1002-0179(1999)02-0256-01
实验室早期发现前列腺癌日益重要，现将近年前列腺癌检测进展综述如下。
1 前列腺特异性抗原(PSA)
1979年Wang等从前列腺组织中提取到前列腺特异性抗原，属大分子糖蛋白，只存在于前列腺内质网和前列腺上皮细胞及分泌物中，具有极高的组织特异性。早期实验室检测PSA应用免疫扩散法、火箭免疫电泳法等，但由于灵敏度原因已不再应用。目前实验室常用放射免疫法(例如Tandem-R法、Pros-check法等)、酶联免疫法(例如Tandem-E法)、化学发光法、时间分辨免疫荧光法、多聚酶链反应法(如RT-PCR法)等。虽然这几种方法灵敏度高、重现性好已被广泛应用，但放射免疫法有放射性，化学发光法需高纯度试剂，时间分辨免疫荧光法和多聚酶链反应法操作复杂，需专门设备。因此大多数实验室广泛使用酶联免疫法(Tandem-E)，该法简便、重复性好，又无放射性，不需要特殊设备，并能在免疫自动分析仪上进行自动检测，正常参考值为0～4μg/L。当前列腺受到损害时，血循环中PSA浓度可升高，特别是前列腺癌可明显升高，并且随病情进展升高越明显。但是良性前列腺炎和前列腺增生也可使血清中PSA浓度升高，故不能单独用于前列腺癌诊断和分期。最近在PSA检测方面的研究还有以下进展。
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1.1 PSA速率 即连续观察血清中PSA浓度变化。资料表明PSA速率可以提高PSA检测早期前列腺癌和区别前列腺增生的能力.
1.2 PSA密度(PSAD) 1989年Benson提出前列腺特异性抗原密度，即血清中PSA浓度与前列腺体积之比(PSAD＝PSA/V)。研究结果显示，当PSA轻度升高，前列腺体积较小时即PSAD>0.15，前列腺癌的可能性大，反之PSAD≤0.15，前列腺癌的可能性小。说明PSAD的诊断价值优于单独的PSA测定。
1.3 游离前列腺特异性抗原(f-PSA)与总前列腺特异性抗原(t-PSA)比值 近几年发现，正常男性血清中以结合形式存在的PSA占总PSA(t-PSA)的80%，另约20%以未结合的形式存在称游离PSA(f-PSA)。Kataja Mitruner等用一步法双标记免疫荧光实验同时测得f-PSA和t-PSA。当t-PSA异常，f-PSA/t-PSA比值发生变化时，对前列腺增生和前列腺癌的鉴别诊断有很重要的意义，前列腺癌的结合PSA比例比前列腺增生的比例高，而f-PSA的比例比前列腺增生的比例低，单独使用f-PSA或t-PSA对前列腺癌诊断时，特异性为50%左右，用f-PSA/t-PSA比值则可提高到80%。因此为区别前列腺增生和前列腺癌提供了帮助，并为早期诊断前列腺癌填补了空白，但无法判断前列腺癌是否有转移。
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1.4 PSAmRNA检测 Barbara Galvan等用时间分辨免疫荧光法检测RT-PCR扩增的PSAmRNA，探针固定在微孔板孔中，在PCR过程中用地高辛半抗原标记扩增的靶DNA，再用地高辛抗体连接碱性磷酸酶来测定杂交物，以磷酸荧光水杨酸作底物测定酶的活性。这种方法灵敏度高，重复性好，对诊断前列腺癌及其是否转移可提供很大的帮助。
2 前列腺特异性膜抗原(PSM)
前列腺特异性膜抗原是前列腺上皮细胞另一种抗原，与分泌型PSA不同，它是一种分子量为1万的膜糖蛋白，具有极高的组织特异性。由于前列腺癌早期就有癌细胞进入血液循环系统，PSA在激素去除状态下比PSM检出率低，利用PSM高度组织特异性，用RT-PCR法检测血液循环中前列腺癌细胞更有助于提高前列腺癌早期诊断。
Isratli等用nested RT-PCR法检测PSMmRNA和PSAmRNA发现：77例前列腺癌中，PSMmRNA阳性48例(62%)，PSAmRNA阳性7例(9%)；24例经治疗的D期病人中，PSMmRNA阳性16例(67%)，PSAmRNA阳性6例(25%)；31例前列腺癌术后PSA结果正常的病人中，PSMmRNA阳性21例(67%)，PSAmRNA阳性1例(3%)；40例正常人及非前列腺癌的前列腺疾病，仅4例PSMmRNA阳性，并且有2例(前列腺增生)后来也发展为前列腺癌。随后loric等用不同的引物做检测(引物可能与内含子和外显子的接点相交叉而不易因DNA污染出现假阳性)，肯定和发展了Israeli等的方法。他们的nested RT-PCR法实验结果表明：53例对照(35例健康男女，18例PSA<4ng/L的前列腺增生老年男性)均未检测出PSMmRNA；110例前列腺癌病人阳性率为67%。结果显示前列腺细胞血行播散仅限于前列腺癌，而且可以发生在前列腺癌早期。因此，nested RT-PCRPSM法的出现将有助于前列腺癌早期发现，提高前列腺切除术的治愈率。
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3 胰岛素样生长因子Ⅰ(IGF-1)
IGF-1是许多肿瘤细胞赖以生存的细胞因子，肿瘤细胞通过自身分泌方式过度产生IGF-1激性受体(IGF-1R)而使自身不断生长。IGF-1是由70个氨基酸、3个二硫键构成的多肽，分子量约7650。前列腺上皮细胞具有IGF-1的受体，IGF-1可刺激上皮细胞增生，参与前列腺肿瘤的生长，是一种新的前列腺癌标志物，可用免疫放射法(IRMA)测定。
Chan等研究表明，IGF-1可参与大鼠肿瘤发生，促进体外癌细胞生长，在男性人群中，高水平的IGF-1发生前列腺癌的可能性是低水平的4倍多，而且较高的IGF-1水平可以预测某些PSA结果正常的男性以后发生前列腺癌的可能。Chan等对152例健康男性和152例平均7年后诊断为前列腺癌的男性用IRMA法进行了IGF-1检测，结果显示前列腺癌组的IGF-1水平高于健康组，并与前列腺癌的分期相关。由于前列腺癌早期临床症状不明显，约60%以上病人首次确诊时已有转移，应用IRMA-IGF-1检测更有助于前列腺癌早期诊断。
, 百拇医药
4 酶类
在前列腺癌实验诊断方面，由于免疫技术不断发展，如放射免疫法、酶联免疫吸附法以及羊克隆免疫技术等的应用，使得前列腺癌酶类检测的灵敏度和特异性大大提高。目前常用的检测项目有：前列腺特异性酸性磷酸酶(PAP)、血清肌酸激酶(CK-BB)、乳酸脱氢同工酶(LDH)等。PAP产生于前列腺上皮细胞溶酶体，器官特异性 酸性磷酸酶(ACP)，是ACP的同功酶。PAP是高度前列腺特异性标志物，早期前列腺癌阳性率为6%～25%，前列腺癌侵润、转移时阳性率为50%～70%，并随病情进展而升高，但进行筛选检查前列腺癌时，无症状人群的PAP特异性、敏感性较低，因此常用于前列腺癌的治疗监测。CK-BB是肌酸激酶在胚胎肌肉和其他组织中的原始形式，正常血清中几乎不含有CK-BB。当患前列腺增生、前列腺癌时，前列腺上皮组织中可检测到CK-BB，并由细胞释放到血液循环中。前列腺增生的CK-BB阳性率为8%，而未经治疗的前列腺癌阳性率可达89%，比PAP更敏感。LDH在正常前列腺中以LDH1为主，前列腺癌病人则以CDH5占优。研究表明前列腺癌约CDH5/LDH1比值大于2占93%，而前列腺增生时仅占11%，因此当LDH5/LDH1比值大于3时认为有诊断价值。
(参考文献1～14略)
(收稿日期：1998-10-27), 百拇医药
单位：华西医科大学附属第一医院检验科(成都 610041)
关键词：
华西医学WEST CHINA MEDICAL JOURNAL1999年 第14卷 第2期 Vol 综述 审校
[中图分类号]R737.25 [文献标识码]D
[文章编号]1002-0179(1999)02-0256-01
实验室早期发现前列腺癌日益重要，现将近年前列腺癌检测进展综述如下。
1 前列腺特异性抗原(PSA)
1979年Wang等从前列腺组织中提取到前列腺特异性抗原，属大分子糖蛋白，只存在于前列腺内质网和前列腺上皮细胞及分泌物中，具有极高的组织特异性。早期实验室检测PSA应用免疫扩散法、火箭免疫电泳法等，但由于灵敏度原因已不再应用。目前实验室常用放射免疫法(例如Tandem-R法、Pros-check法等)、酶联免疫法(例如Tandem-E法)、化学发光法、时间分辨免疫荧光法、多聚酶链反应法(如RT-PCR法)等。虽然这几种方法灵敏度高、重现性好已被广泛应用，但放射免疫法有放射性，化学发光法需高纯度试剂，时间分辨免疫荧光法和多聚酶链反应法操作复杂，需专门设备。因此大多数实验室广泛使用酶联免疫法(Tandem-E)，该法简便、重复性好，又无放射性，不需要特殊设备，并能在免疫自动分析仪上进行自动检测，正常参考值为0～4μg/L。当前列腺受到损害时，血循环中PSA浓度可升高，特别是前列腺癌可明显升高，并且随病情进展升高越明显。但是良性前列腺炎和前列腺增生也可使血清中PSA浓度升高，故不能单独用于前列腺癌诊断和分期。最近在PSA检测方面的研究还有以下进展。
, http://www.100md.com
1.1 PSA速率 即连续观察血清中PSA浓度变化。资料表明PSA速率可以提高PSA检测早期前列腺癌和区别前列腺增生的能力.
1.2 PSA密度(PSAD) 1989年Benson提出前列腺特异性抗原密度，即血清中PSA浓度与前列腺体积之比(PSAD＝PSA/V)。研究结果显示，当PSA轻度升高，前列腺体积较小时即PSAD>0.15，前列腺癌的可能性大，反之PSAD≤0.15，前列腺癌的可能性小。说明PSAD的诊断价值优于单独的PSA测定。
1.3 游离前列腺特异性抗原(f-PSA)与总前列腺特异性抗原(t-PSA)比值 近几年发现，正常男性血清中以结合形式存在的PSA占总PSA(t-PSA)的80%，另约20%以未结合的形式存在称游离PSA(f-PSA)。Kataja Mitruner等用一步法双标记免疫荧光实验同时测得f-PSA和t-PSA。当t-PSA异常，f-PSA/t-PSA比值发生变化时，对前列腺增生和前列腺癌的鉴别诊断有很重要的意义，前列腺癌的结合PSA比例比前列腺增生的比例高，而f-PSA的比例比前列腺增生的比例低，单独使用f-PSA或t-PSA对前列腺癌诊断时，特异性为50%左右，用f-PSA/t-PSA比值则可提高到80%。因此为区别前列腺增生和前列腺癌提供了帮助，并为早期诊断前列腺癌填补了空白，但无法判断前列腺癌是否有转移。
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1.4 PSAmRNA检测 Barbara Galvan等用时间分辨免疫荧光法检测RT-PCR扩增的PSAmRNA，探针固定在微孔板孔中，在PCR过程中用地高辛半抗原标记扩增的靶DNA，再用地高辛抗体连接碱性磷酸酶来测定杂交物，以磷酸荧光水杨酸作底物测定酶的活性。这种方法灵敏度高，重复性好，对诊断前列腺癌及其是否转移可提供很大的帮助。
2 前列腺特异性膜抗原(PSM)
前列腺特异性膜抗原是前列腺上皮细胞另一种抗原，与分泌型PSA不同，它是一种分子量为1万的膜糖蛋白，具有极高的组织特异性。由于前列腺癌早期就有癌细胞进入血液循环系统，PSA在激素去除状态下比PSM检出率低，利用PSM高度组织特异性，用RT-PCR法检测血液循环中前列腺癌细胞更有助于提高前列腺癌早期诊断。
Isratli等用nested RT-PCR法检测PSMmRNA和PSAmRNA发现：77例前列腺癌中，PSMmRNA阳性48例(62%)，PSAmRNA阳性7例(9%)；24例经治疗的D期病人中，PSMmRNA阳性16例(67%)，PSAmRNA阳性6例(25%)；31例前列腺癌术后PSA结果正常的病人中，PSMmRNA阳性21例(67%)，PSAmRNA阳性1例(3%)；40例正常人及非前列腺癌的前列腺疾病，仅4例PSMmRNA阳性，并且有2例(前列腺增生)后来也发展为前列腺癌。随后loric等用不同的引物做检测(引物可能与内含子和外显子的接点相交叉而不易因DNA污染出现假阳性)，肯定和发展了Israeli等的方法。他们的nested RT-PCR法实验结果表明：53例对照(35例健康男女，18例PSA<4ng/L的前列腺增生老年男性)均未检测出PSMmRNA；110例前列腺癌病人阳性率为67%。结果显示前列腺细胞血行播散仅限于前列腺癌，而且可以发生在前列腺癌早期。因此，nested RT-PCRPSM法的出现将有助于前列腺癌早期发现，提高前列腺切除术的治愈率。
, http://www.100md.com
3 胰岛素样生长因子Ⅰ(IGF-1)
IGF-1是许多肿瘤细胞赖以生存的细胞因子，肿瘤细胞通过自身分泌方式过度产生IGF-1激性受体(IGF-1R)而使自身不断生长。IGF-1是由70个氨基酸、3个二硫键构成的多肽，分子量约7650。前列腺上皮细胞具有IGF-1的受体，IGF-1可刺激上皮细胞增生，参与前列腺肿瘤的生长，是一种新的前列腺癌标志物，可用免疫放射法(IRMA)测定。
Chan等研究表明，IGF-1可参与大鼠肿瘤发生，促进体外癌细胞生长，在男性人群中，高水平的IGF-1发生前列腺癌的可能性是低水平的4倍多，而且较高的IGF-1水平可以预测某些PSA结果正常的男性以后发生前列腺癌的可能。Chan等对152例健康男性和152例平均7年后诊断为前列腺癌的男性用IRMA法进行了IGF-1检测，结果显示前列腺癌组的IGF-1水平高于健康组，并与前列腺癌的分期相关。由于前列腺癌早期临床症状不明显，约60%以上病人首次确诊时已有转移，应用IRMA-IGF-1检测更有助于前列腺癌早期诊断。
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4 酶类
在前列腺癌实验诊断方面，由于免疫技术不断发展，如放射免疫法、酶联免疫吸附法以及羊克隆免疫技术等的应用，使得前列腺癌酶类检测的灵敏度和特异性大大提高。目前常用的检测项目有：前列腺特异性酸性磷酸酶(PAP)、血清肌酸激酶(CK-BB)、乳酸脱氢同工酶(LDH)等。PAP产生于前列腺上皮细胞溶酶体，器官特异性 酸性磷酸酶(ACP)，是ACP的同功酶。PAP是高度前列腺特异性标志物，早期前列腺癌阳性率为6%～25%，前列腺癌侵润、转移时阳性率为50%～70%，并随病情进展而升高，但进行筛选检查前列腺癌时，无症状人群的PAP特异性、敏感性较低，因此常用于前列腺癌的治疗监测。CK-BB是肌酸激酶在胚胎肌肉和其他组织中的原始形式，正常血清中几乎不含有CK-BB。当患前列腺增生、前列腺癌时，前列腺上皮组织中可检测到CK-BB，并由细胞释放到血液循环中。前列腺增生的CK-BB阳性率为8%，而未经治疗的前列腺癌阳性率可达89%，比PAP更敏感。LDH在正常前列腺中以LDH1为主，前列腺癌病人则以CDH5占优。研究表明前列腺癌约CDH5/LDH1比值大于2占93%，而前列腺增生时仅占11%，因此当LDH5/LDH1比值大于3时认为有诊断价值。
(参考文献1～14略)
(收稿日期：1998-10-27), 百拇医药