克癌临对荷肝癌(H22)小鼠肿瘤红细胞免疫功能的影响
作者：张天娥 骆永珍 闫智勇 陈晓玲 王宇 周从全
单位：成都中医药大学(成都 610075)
关键词：克癌临；荷实体型肝癌(H22)小鼠；肿瘤红细胞免疫
华西医学WEST CHINA MEDICAL JOURNAL1999年 第14卷 第2期 Vol 摘要：观察了中药复方克癌临对荷实体型肝癌(H22)小鼠肿瘤红细胞免疫功能的影响。结果表明，克癌临组三个肿瘤红细胞花环率(DTER、ATER、ETER)皆极显著高于模型组和5-Fu组(P<0.001)，其中DTER已接受正常组，ETER，ATER已明显高于正常组(P<0.01、P<0.001)，说明克癌临能显著提高荷瘤小鼠肿瘤红细胞免疫功能。
[中图分类号]R285.5；R392.12；R735.7 [文献标识码]A
, 百拇医药
[文章编号]1002-0179(1999)02-0155-03
Effect of Keailin Decoction on Tumor Erythroyte Immune in Hepatocarcinoma 22-bearing Mice
ZHANG Tian-e，LUO Yong-zhen，YAN Zhi-yong，et al.
Chengdu University of TCM，Chengdu，610075
Abstract：objective：Observed the effect of Keailin Decoction(KALD)on tumor erythryte immune in hepatocarcinoma 22 solid tumor-bearing mice.Results：The result indicated that the ETER ATER and DTER of KALD group were
, 百拇医药
significantly different in comparing with model group and 5-FU group (p<0.001)，and the level of DTER had approached normal group，the level of ETER and ATER had exceeded normal group(p<0.01，p<0.001).Conclusion: The KALD could obviously enhanced the ability of red blood cell immunoadhesion and attacking tumor cell.
Key words：Keailin Decoction(KALD)；Hepatocarcinoma 22 solid
tumor-bearing mice；Tumor erythrocyte immune.
, http://www.100md.com
(Received date：1999-01-14)
克癌临是骆永珍教授应用20余年的治疗消化系统肿瘤的有效方药。为探讨该药的抗癌机理，我们进行了一系列其抗肝癌作用的实验研究，关于其对荷瘤小鼠抑瘤率，以及对TNF活性和肿瘤细胞周期、凋亡的影响已在另文做了报告，现仅对肿瘤红细胞免疫的实验结果报告如下。
1 实验材料
1.1动物：昆明种封闭群一级小白鼠，雌雄各半，体重22±2g，由四川省抗菌素工业研究所提供(合格证：川动管第95-85号)，用标准颗粒饲料驯养。
1.2瘤株：小鼠移植性肝癌(H22)瘤株，由华西医科大学肿瘤研究所提供。
1.3药物
, 百拇医药
1.3.1克癌临水煎液：方中半枝莲、仙鹤草等药材由成都市中药材公司提供。第一煎1小时，第二煎30分钟，两煎混合并浓缩至100%(即1ml药液中含原生药1克)的浓度，冷却装入灭菌药瓶，置4℃冰箱保存备用。
1.3.2 5-氟脲嘧啶(5-Fu)：天津市氨基酸公司人民制药厂产品，批号：951102，用灭菌生理盐水配成3mg/ml的工作用液，密封置4℃冰箱备用。
1.4主要试剂与仪器
豚鼠血清、0.25%戊二醛、瑞氏染色：本校微生物教研室提供，可调微量加样器：Gilson公司产品。
2 实验方法
无菌抽取荷肝癌(H22)小鼠腹水，用灭菌生理盐水稀释至含瘤细胞1×107/ml的浓度，每鼠右腋皮下接种0.2ml，次日将小鼠随机分为荷瘤模型组、阳性对照组(5-Fu组)、克癌临用药组(克癌组)，另设未接种瘤细胞的正常组共4组，每组均12只小鼠，雌雄各半。接种24小时后开始给药，正常组及模型组每天灌服冷白开水0.4ml/只；5-Fu组腹腔注射5-Fu0.2ml/只，隔日1次。克癌组每日灌服克癌临水煎液0.5ml/只，连续给药10天。停药次日，采用摘眼球取血法处死小鼠。
, 百拇医药
3 指标检测
肿瘤红细胞免疫功能测定，方法按郭峰〔1〕法稍加改进。
4 实验结果
4.1 各组小鼠一般情况：接种瘤细胞后的小鼠，前三天外观与正常鼠无明显区别，饮食正常，运动活泼，被毛光泽。接种后4天开始，模型组运动迟缓，右腋皮下可摸到扁平包块，5-Fu组包块摸之较小，而中药组摸不到包块，且精神较前2组为佳；一周后，模型组饮食减少，形体渐消，包块增大，运动缓慢，被毛光泽，竖毛现象明显，反应迟钝，常拥挤在一起，第9天出现死亡1只；5-Fu组上述情况与模型组相似，但形体更消瘦，也于第9天出现死亡，共死亡2只；克癌组一般情况与正常组相似，被毛光泽，无竖毛现象，仍喜活动，但食量有所减少，且随癌体增大，爬行较缓慢，于第8天因灌胃意外死亡1只。
4.2克癌临对荷瘤小鼠肿瘤红细胞免疫功能的影响：见表1所示。
, http://www.100md.com
表1.各组小鼠肿瘤红细胞免疫功能比较(
±S) 组别
动物数
DTER
ETER
ATER
正常组
12
31.67±4.53
32.00±5.57
35.22±5.49
模型组
, http://www.100md.com
11
19.64±4.18**
24.17±4.38**
17.73±3.95***
5-Fu组
10
18.00±4.16**
19.86±3.63△***
14.86±2.41***
克癌组
, http://www.100md.com
11
29.27±2.69△△△▲▲▲
41.82±7.80**△△△▲▲▲
44.36±3.23***△△△▲▲▲
注：与正常组比较**P<0.01，***P<0.001；与模型组比较△P<0.05，△△△P<0.001；与5-Fu组比较▲▲▲P<0.001。
5 讨论
克癌临是根据祖国医学对肝癌病因病机的认识，集清热解毒，活血化瘀，扶正固本为一体而组方。此前研究已发现其对荷瘤小鼠的肿瘤生长有显著抑制作用，能阻断肿瘤细胞DNA的合成和复制，诱导其发生凋亡，并且还可抑制荷瘤机体TNF活性的异常升高，使其维持在一定水平而发挥抗肿瘤、调节机体免疲力的作用〔2〕。本次实验，我们观察了克癌临对荷瘤小鼠肿瘤红细胞免疫功能的影响。红细胞免疫系统的概念，最早于1981年由Siegel〔3〕提出，后大量研究发现，红细胞免疫是机体免疫系统的重要组成部分，并在抗肿瘤免疫中占有重要地位。红细胞可直接粘附肿瘤细胞〔4〕，使之易与吞噬细胞表面的涎腺粘液蛋白结合而被吞噬〔5〕，更重要的是还可表现出效应细胞样作用〔6〕。其抗肿瘤作用还表现在可以使膜SOD酶等过氧化物酶活力增强，直接杀伤靶细胞〔3〕，及将肿瘤细胞上的补体裂解为C3d、C3dg，使之更易被粒细胞补体受体粘附，而促使粒细胞对其的粘附围歼〔7〕。此外，红细胞尚有释放NK细胞激活因子、激发T细胞免疫功能、促进B细胞产生抗体、增强L-2受体表达等免疫调节作用〔8，9〕。研究表明，红细胞识别粘附肿瘤细胞的机理，是肿瘤细胞可旁路激活补体，补体裂解片段C3b与红细胞膜上具有免疫粘附活性的C3b受体(CR1)结合所致〔4〕。人们发现，在荷瘤机体，红细胞免疫功能显著下降〔10〕，可能是肿瘤释放的可溶性抗原进入血流形成循环免疫复合物粘附到红细胞CR1上的缘故。红细胞免疫粘附肿瘤细胞能力的下降必然会影响其对肿瘤细胞的调理吞噬作用，对膜SOD酶的增强作用以及对淋巴细胞免疫正调节作用，进行破坏宿主的抗肿瘤免疫力，使癌细胞得以生长繁殖和扩散转移。
, http://www.100md.com
本实验结果表明，模型组的DTER、ETER和ATER均显著低于正常组(P<0.001或P<0.01)，说明荷瘤小鼠红细胞免疫粘附肿瘤细胞能力明显处于低下状态；5-Fu组三者更低于模型组，可能与其对血液系统的毒副作用有关；而克癌组三者均显著高于模型组和5-Fu组(P<0.001)，且有的已明显接近或超过正常组，说明克癌临可增强荷瘤机体红细胞CR1及血清补体的活性，从而增强红细胞对肿瘤细胞的免疫粘附作用。
作者简介：周从全，成都市天立肿瘤研究所 610075
6 参考文献
1 郭峰，刘小平，徐瑛：带瘤小鼠的多种红细胞免疫功能观察。上海免疫学杂志，1989；9(2)∶122。
2 张天娥，骆永珍，闫智勇：克癌临治疗移植性肝癌(H22)的实验研究。华西医学 1998；13(4)∶451。
, 百拇医药
3 Siegel I，Liu TL，Gleicher N∶The red-cell immune system.Lancet，1981；2(8246)∶556
4 郭峰：红细胞对肿瘤细胞有亲和性的发现。第二军医大学学报，1986；7(6)∶426。
5 Crocker R，Freeman S，Gordon S，et al∶Saloadhesin binds preferentially to cells of the granulocytic lineage.J Clin Invest.1995；95(2)∶635.
6 黄盛东，郭峰，沙继宏：红细胞免疫粘附肿瘤细胞电镜观察。第二军医大学学报，1992；13(2)∶200。
7 郭峰，郭建主编：肿瘤红细胞免疫学研究。第1版，济南：济南出版社，1997∶23。
, http://www.100md.com
8 Shan H，Gupta PK，Golub SH∶Identification of a natural.Killer enhancing factor (NKEF) from human erythroid cell.Cell Immunol.1993；147(1)∶1.
9 郭峰，曹漪明，杨虎天，等：SLE患者红细胞免疫与T淋巴细胞免疫功能变化的初步观察。中国免疫学杂志，1998；4(1)∶35。
10 章岳山，李树铭，匡希文，等：荷瘤小鼠红细胞免疫功能观察。中华微生物学和免疫学杂志，1997；17(1)∶60。
(收稿日期：1999-01-14), 百拇医药
单位：成都中医药大学(成都 610075)
关键词：克癌临；荷实体型肝癌(H22)小鼠；肿瘤红细胞免疫
华西医学WEST CHINA MEDICAL JOURNAL1999年 第14卷 第2期 Vol 摘要：观察了中药复方克癌临对荷实体型肝癌(H22)小鼠肿瘤红细胞免疫功能的影响。结果表明，克癌临组三个肿瘤红细胞花环率(DTER、ATER、ETER)皆极显著高于模型组和5-Fu组(P<0.001)，其中DTER已接受正常组，ETER，ATER已明显高于正常组(P<0.01、P<0.001)，说明克癌临能显著提高荷瘤小鼠肿瘤红细胞免疫功能。
[中图分类号]R285.5；R392.12；R735.7 [文献标识码]A
, 百拇医药
[文章编号]1002-0179(1999)02-0155-03
Effect of Keailin Decoction on Tumor Erythroyte Immune in Hepatocarcinoma 22-bearing Mice
ZHANG Tian-e，LUO Yong-zhen，YAN Zhi-yong，et al.
Chengdu University of TCM，Chengdu，610075
Abstract：objective：Observed the effect of Keailin Decoction(KALD)on tumor erythryte immune in hepatocarcinoma 22 solid tumor-bearing mice.Results：The result indicated that the ETER ATER and DTER of KALD group were
, 百拇医药
significantly different in comparing with model group and 5-FU group (p<0.001)，and the level of DTER had approached normal group，the level of ETER and ATER had exceeded normal group(p<0.01，p<0.001).Conclusion: The KALD could obviously enhanced the ability of red blood cell immunoadhesion and attacking tumor cell.
Key words：Keailin Decoction(KALD)；Hepatocarcinoma 22 solid
tumor-bearing mice；Tumor erythrocyte immune.
, http://www.100md.com
(Received date：1999-01-14)
克癌临是骆永珍教授应用20余年的治疗消化系统肿瘤的有效方药。为探讨该药的抗癌机理，我们进行了一系列其抗肝癌作用的实验研究，关于其对荷瘤小鼠抑瘤率，以及对TNF活性和肿瘤细胞周期、凋亡的影响已在另文做了报告，现仅对肿瘤红细胞免疫的实验结果报告如下。
1 实验材料
1.1动物：昆明种封闭群一级小白鼠，雌雄各半，体重22±2g，由四川省抗菌素工业研究所提供(合格证：川动管第95-85号)，用标准颗粒饲料驯养。
1.2瘤株：小鼠移植性肝癌(H22)瘤株，由华西医科大学肿瘤研究所提供。
1.3药物
, 百拇医药
1.3.1克癌临水煎液：方中半枝莲、仙鹤草等药材由成都市中药材公司提供。第一煎1小时，第二煎30分钟，两煎混合并浓缩至100%(即1ml药液中含原生药1克)的浓度，冷却装入灭菌药瓶，置4℃冰箱保存备用。
1.3.2 5-氟脲嘧啶(5-Fu)：天津市氨基酸公司人民制药厂产品，批号：951102，用灭菌生理盐水配成3mg/ml的工作用液，密封置4℃冰箱备用。
1.4主要试剂与仪器
豚鼠血清、0.25%戊二醛、瑞氏染色：本校微生物教研室提供，可调微量加样器：Gilson公司产品。
2 实验方法
无菌抽取荷肝癌(H22)小鼠腹水，用灭菌生理盐水稀释至含瘤细胞1×107/ml的浓度，每鼠右腋皮下接种0.2ml，次日将小鼠随机分为荷瘤模型组、阳性对照组(5-Fu组)、克癌临用药组(克癌组)，另设未接种瘤细胞的正常组共4组，每组均12只小鼠，雌雄各半。接种24小时后开始给药，正常组及模型组每天灌服冷白开水0.4ml/只；5-Fu组腹腔注射5-Fu0.2ml/只，隔日1次。克癌组每日灌服克癌临水煎液0.5ml/只，连续给药10天。停药次日，采用摘眼球取血法处死小鼠。
, 百拇医药
3 指标检测
肿瘤红细胞免疫功能测定，方法按郭峰〔1〕法稍加改进。
4 实验结果
4.1 各组小鼠一般情况：接种瘤细胞后的小鼠，前三天外观与正常鼠无明显区别，饮食正常，运动活泼，被毛光泽。接种后4天开始，模型组运动迟缓，右腋皮下可摸到扁平包块，5-Fu组包块摸之较小，而中药组摸不到包块，且精神较前2组为佳；一周后，模型组饮食减少，形体渐消，包块增大，运动缓慢，被毛光泽，竖毛现象明显，反应迟钝，常拥挤在一起，第9天出现死亡1只；5-Fu组上述情况与模型组相似，但形体更消瘦，也于第9天出现死亡，共死亡2只；克癌组一般情况与正常组相似，被毛光泽，无竖毛现象，仍喜活动，但食量有所减少，且随癌体增大，爬行较缓慢，于第8天因灌胃意外死亡1只。
4.2克癌临对荷瘤小鼠肿瘤红细胞免疫功能的影响：见表1所示。
, http://www.100md.com
表1.各组小鼠肿瘤红细胞免疫功能比较(
±S) 组别动物数
DTER
ETER
ATER
正常组
12
31.67±4.53
32.00±5.57
35.22±5.49
模型组
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11
19.64±4.18**
24.17±4.38**
17.73±3.95***
5-Fu组
10
18.00±4.16**
19.86±3.63△***
14.86±2.41***
克癌组
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11
29.27±2.69△△△▲▲▲
41.82±7.80**△△△▲▲▲
44.36±3.23***△△△▲▲▲
注：与正常组比较**P<0.01，***P<0.001；与模型组比较△P<0.05，△△△P<0.001；与5-Fu组比较▲▲▲P<0.001。
5 讨论
克癌临是根据祖国医学对肝癌病因病机的认识，集清热解毒，活血化瘀，扶正固本为一体而组方。此前研究已发现其对荷瘤小鼠的肿瘤生长有显著抑制作用，能阻断肿瘤细胞DNA的合成和复制，诱导其发生凋亡，并且还可抑制荷瘤机体TNF活性的异常升高，使其维持在一定水平而发挥抗肿瘤、调节机体免疲力的作用〔2〕。本次实验，我们观察了克癌临对荷瘤小鼠肿瘤红细胞免疫功能的影响。红细胞免疫系统的概念，最早于1981年由Siegel〔3〕提出，后大量研究发现，红细胞免疫是机体免疫系统的重要组成部分，并在抗肿瘤免疫中占有重要地位。红细胞可直接粘附肿瘤细胞〔4〕，使之易与吞噬细胞表面的涎腺粘液蛋白结合而被吞噬〔5〕，更重要的是还可表现出效应细胞样作用〔6〕。其抗肿瘤作用还表现在可以使膜SOD酶等过氧化物酶活力增强，直接杀伤靶细胞〔3〕，及将肿瘤细胞上的补体裂解为C3d、C3dg，使之更易被粒细胞补体受体粘附，而促使粒细胞对其的粘附围歼〔7〕。此外，红细胞尚有释放NK细胞激活因子、激发T细胞免疫功能、促进B细胞产生抗体、增强L-2受体表达等免疫调节作用〔8，9〕。研究表明，红细胞识别粘附肿瘤细胞的机理，是肿瘤细胞可旁路激活补体，补体裂解片段C3b与红细胞膜上具有免疫粘附活性的C3b受体(CR1)结合所致〔4〕。人们发现，在荷瘤机体，红细胞免疫功能显著下降〔10〕，可能是肿瘤释放的可溶性抗原进入血流形成循环免疫复合物粘附到红细胞CR1上的缘故。红细胞免疫粘附肿瘤细胞能力的下降必然会影响其对肿瘤细胞的调理吞噬作用，对膜SOD酶的增强作用以及对淋巴细胞免疫正调节作用，进行破坏宿主的抗肿瘤免疫力，使癌细胞得以生长繁殖和扩散转移。
, http://www.100md.com
本实验结果表明，模型组的DTER、ETER和ATER均显著低于正常组(P<0.001或P<0.01)，说明荷瘤小鼠红细胞免疫粘附肿瘤细胞能力明显处于低下状态；5-Fu组三者更低于模型组，可能与其对血液系统的毒副作用有关；而克癌组三者均显著高于模型组和5-Fu组(P<0.001)，且有的已明显接近或超过正常组，说明克癌临可增强荷瘤机体红细胞CR1及血清补体的活性，从而增强红细胞对肿瘤细胞的免疫粘附作用。
作者简介：周从全，成都市天立肿瘤研究所 610075
6 参考文献
1 郭峰，刘小平，徐瑛：带瘤小鼠的多种红细胞免疫功能观察。上海免疫学杂志，1989；9(2)∶122。
2 张天娥，骆永珍，闫智勇：克癌临治疗移植性肝癌(H22)的实验研究。华西医学 1998；13(4)∶451。
, 百拇医药
3 Siegel I，Liu TL，Gleicher N∶The red-cell immune system.Lancet，1981；2(8246)∶556
4 郭峰：红细胞对肿瘤细胞有亲和性的发现。第二军医大学学报，1986；7(6)∶426。
5 Crocker R，Freeman S，Gordon S，et al∶Saloadhesin binds preferentially to cells of the granulocytic lineage.J Clin Invest.1995；95(2)∶635.
6 黄盛东，郭峰，沙继宏：红细胞免疫粘附肿瘤细胞电镜观察。第二军医大学学报，1992；13(2)∶200。
7 郭峰，郭建主编：肿瘤红细胞免疫学研究。第1版，济南：济南出版社，1997∶23。
, http://www.100md.com
8 Shan H，Gupta PK，Golub SH∶Identification of a natural.Killer enhancing factor (NKEF) from human erythroid cell.Cell Immunol.1993；147(1)∶1.
9 郭峰，曹漪明，杨虎天，等：SLE患者红细胞免疫与T淋巴细胞免疫功能变化的初步观察。中国免疫学杂志，1998；4(1)∶35。
10 章岳山，李树铭，匡希文，等：荷瘤小鼠红细胞免疫功能观察。中华微生物学和免疫学杂志，1997；17(1)∶60。
(收稿日期：1999-01-14), 百拇医药