血管内皮生长因子在非小细胞肺癌中的表达及其意义
作者：杨国利 张力建 谢玉泉
单位：100036 北京医科大学临床肿瘤学院
关键词：内皮生长因子；新生血管化；癌，非小细胞
中华医学杂志990207 【摘要】 目的 探讨血管内皮生长因子(VEGF)在肺癌中的表达及与肿瘤生长转移、预后和新生血管形成的关系。方法 对53例周围型非小细胞肺癌患者，采用免疫组织化学法，进行VEGF抗体标记和肿瘤组织VEGF表达；用F8因子抗体标记瘤组织的血管生成。结果 53例根治手术的周围型非小细胞肺癌VEGF高表达和低表达的微血管密度间差异有显著性意义，(P<0.001)。高表达VEGF，有淋巴结转移的占76%(29/38)；无淋巴结转移的占26%(4/15)(P<0.001)。COX分析表明，VEGF可作为独立的判断预后指标。结论 VEGF的表达与肿瘤的血管生成、生长和淋巴结转移密切相关；高表达预后更差；因此可作为判断预后的独立指标。
, 百拇医药
Vascular endothelial growth factor in non-small cell lung carcinoma expression and its significance YANG Guoli，ZHANG Lijian, XIE Yuquan. The School of Oncology, Beijing Medical University, Beijing 100036
【Abstract】 Objective To clarify the relationship between the expression of vascular endothelial growth factor (VEGF) and the angiogenesis, invasion, prognostic value in non-small cell lung cancer. Methods Immunohistochemistry. Results 53 patients with NSCLC after radical resection were evaluated . A significantly higher microvessel density (MVD) was observed in the tumors with high expression of VEGF compared with that of the low expression (P<0.001). 29 patients (80%,29/33) with the high expression of VEGF showed lymphonode metastasis and 4 patients (27%,4/15) unlymphonode metastasis (P<0.001). By Cox’s proportional hazard model analysis, the expression of VEGF was considered an independent predictor for the prognosis of NSCLC. Conclusions The expression of VEGF has a significant correlation among MVD, growth, invasion, and lymphonode metastasis. The patient with the tumor of the higher expression of VEGF and MVD may have poor prognosis. VEGF may be an independent predictor of prognosis.
, 百拇医药
【Key word】 Endothelial growth factors Neovascularization Carcinoma, non-small cell
(Natl Med J China, 1999, 79:104-105)
肿瘤生长依赖于血管的形成[1]。在众多诱导血管生成的因子中，血管内皮生长因子(VEGF)被认为是最重要的血管生成因子[2]。为此，本研究以53例周围型非小细胞肺癌患者为对象，探讨VEGF在肺癌中的表达及其与肺癌血管生成、局部浸润和患者预后的关系。
对象与方法
1.对象：北京市肿瘤防治研究所5年间收治的周围型非小细胞肺癌患者53例(术前经骨扫描、头颅CT、腹部CT或B型超声等分期检查，证明无远处转移，经外科根治性切除、纵隔淋巴结探查手术治疗，并经术后随访)。男37例，女16例，男女之比为2.3：1。其中鳞癌21例，腺癌24例，腺鳞癌、肺泡细胞癌8例。年龄：29～75岁。平均57岁。
, 百拇医药
2.方法：用免疫组织化学染色法进行VEGF抗体标记和瘤组织的VEGF 表达；用F8因子抗体标记瘤组织的血管生成。
3.抗体来源：VEGF抗体：兔抗人VEGF多克隆抗体(北京市肿瘤防治研究所免疫室惠赠)。抗F8因子抗体：兔抗人多克隆抗体；Ⅱ抗生物素标记的羊抗兔抗体；Ⅲ抗辣根酶标记的链霉素卵白素(购自北京中山生物技术有限公司)。
4.分析标准：VEGF表达：用双盲法2人阅片，首先100×视野筛选VEGF表达最强区，然后200×视野连续记数400个癌细胞，阳性表达的细胞占30%以上为高表达，小于30%者为低表达。
5.血管生成：以抗F8因子的抗体标记血管数为依据。用双盲法，同样的2人在100×视野下筛选血管生成最活跃的区域，200×视野记微血管数，再据此计算微血管密度，即计算每平方毫米的微血管数(MVD)。
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6.统计学处理：VEGF的表达与MVD相关性用等级秩和检验及时序检验；VEGF与淋巴结转移和肿瘤大小的相关性，进行四格表卡方检验 。用SPSS统计学软件进行Cox回归分析(后退法)，探讨VEGF表达与病人预后的关系。
结 果
1.VEGF的表达与MVD：VEGF阳性着色为棕黄色颗粒，分布在细胞质内。其中低表达者20例，占38%(20/53)；高表达33例，占62%(33/53)。F8因子标记的微血管，内皮细胞染为棕黄色，记数从0～19/mm2。
2.VEGF表达与MVD的关系：在53例患者中，VEGF高表达33例，其相应的MVD为(12.2±2.6)根/mm2，范围6.2～19.1根/mm2；低表达20例，其MVD为(6.0±1.2)根/mm2。经样本等级秩和检验，μ≥2.58 ，P≤0.01。差异有非常显著性意义。表明VEGF表达与MVD两者间密切相关。伴随VEGF的表达增强，MVD明显增加。
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3.VEGF表达与肿瘤T分期和淋巴结转移的关系：在53例患者中，淋巴结转移的38例，其中VEGF高表达29例，占76%(29/38)，无淋巴结转移的15例，其中高表达的4例,占27%(4/15)。卡方检验：χ2=11.2831，P<0.001。差异有非常显著性意义。T1+T2共20例，其中VEGF高表达7例，占35%(7/20)；T3 33例，高表达26例，占79%(26/33)，经卡方检验，χ2=10.162 ，P≤0.01，差异有非常显著性意义。结果表明：VEGF与淋巴结转移和肿瘤的体积密切相关。随肿瘤VEGF表达增加，肺癌瘤体的体积明显增大，淋巴结转移明显增多。
4.VEGF表达与肺癌患者的生存率关系：本组53例患者总的5年生存率为15.8%， VEGF高表达的33例中，5年生存率为(3±3)%；VEGF低表达的20例，其5年生存率为(36±13)%。VEGF高表达的患者生存率比低表达的明显降低。经时序检验(Log rank test)，P=0.0001。差异有非常显著性意义。伴随VEGF表达的增强，患者的生存率明显降低。
, 百拇医药
5.MVD与患者生存率的关系：将MVD分为4组。MVD<5的7人，5年生存率42.9%；MVD 6～10的20人，5年生存率40%；MVD 11～15的17人，5年生存率0%；MVD>16的9人，5年生存率0%。经时序检验，P<0.001。差异有非常显著性意义。伴随MVD的增加，患者的生存率明显减低。
6.Cox回归分析：经对患者的性别、年龄、瘤体的大小(≤3cm，>3cm)、淋巴结转移(N0，N1，N2)、TNM分期(1989年UICC的分期法)、MVD和 VEGF表达的Cox比例风险模型分析，结果证明，MVD、VEGF可作为独立的判断患者预后的指标。
讨 论
由于VEGF是多功能的细胞因子[2]，一方面，它可高度特异性的诱导血管内皮细胞有丝分裂，直接刺激血管生成；另一方面，可诱导血管通透性增加，导致血管内大分子物质的漏出，有利于血管外基质的形成，为血管内皮细胞的增殖、血管的形成提供支架，辅助血管形成；再一方面，VEGF对巨噬细胞的趋化作用，诱导趋化来的巨噬细胞释放其本身的血管生成因子，间接促进血管生成。本研究进一步支持VEGF是重要的血管生成因子的观点。
, 百拇医药
Claffey 等[3]通过对脑膜瘤细胞系的研究发现，转染VEGF的肿瘤细胞，VEGF表达越强，新生血管越丰富，其营养和氧的供应越充分，肿瘤的生长越快，瘤体相对较大，肺转移更多。抑制VEGF的表达和新生毛细血管的形成可抑制实验鼠的肺和肝转移。而本研究结果亦支持VEGF与肿瘤的生长转移的密切关系。
肿瘤的生长依赖于新生血管形成。肿瘤的新生血管不仅决定着肿瘤从增生向恶性的转化，而且与肿瘤的远处转移密切相关。在临床回顾性研究[4]，如胃癌等的分析表明：VEGF表达和MVD及患者的预后密切相关，可作为独立的判断患者预后的指标。本研究进一步揭示VEGF可作为独立的判断肺癌患者预后的指标。
参考文献 1 Folkman J.What is the evidence that tumors are angiogenesis dependent？ J Natl cancer Inst, 1990 ，82：4-6.
, 百拇医药
2 Donala K , Senger D, Livingston V ,et al. Vascular permeability factor (VEGF,VPF) in tumor biology. Cancer Metastasis Rev，1993 ，12:303-324.
3 Claffey KP,Brown LF，Del Aguila LT，et al. Expression of vasculare permeability factor /vascular endothelial growth factor by melanoma cells increases tumor growth,angiogenesis, and experimental metastasis.Cancer Res ,1996,56:172-181.
4 Maeda K，Chung YS， Takatsuka S ，et al. Tumour angiogenesis and tumour cell proliferation as prognostic indictors in gastric carcinoma . Br J Cancer,1995 ,72:319-323.
(收稿：1998-08-06 修回：1998-11-25), http://www.100md.com
单位：100036 北京医科大学临床肿瘤学院
关键词：内皮生长因子；新生血管化；癌，非小细胞
中华医学杂志990207 【摘要】 目的 探讨血管内皮生长因子(VEGF)在肺癌中的表达及与肿瘤生长转移、预后和新生血管形成的关系。方法 对53例周围型非小细胞肺癌患者，采用免疫组织化学法，进行VEGF抗体标记和肿瘤组织VEGF表达；用F8因子抗体标记瘤组织的血管生成。结果 53例根治手术的周围型非小细胞肺癌VEGF高表达和低表达的微血管密度间差异有显著性意义，(P<0.001)。高表达VEGF，有淋巴结转移的占76%(29/38)；无淋巴结转移的占26%(4/15)(P<0.001)。COX分析表明，VEGF可作为独立的判断预后指标。结论 VEGF的表达与肿瘤的血管生成、生长和淋巴结转移密切相关；高表达预后更差；因此可作为判断预后的独立指标。
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Vascular endothelial growth factor in non-small cell lung carcinoma expression and its significance YANG Guoli，ZHANG Lijian, XIE Yuquan. The School of Oncology, Beijing Medical University, Beijing 100036
【Abstract】 Objective To clarify the relationship between the expression of vascular endothelial growth factor (VEGF) and the angiogenesis, invasion, prognostic value in non-small cell lung cancer. Methods Immunohistochemistry. Results 53 patients with NSCLC after radical resection were evaluated . A significantly higher microvessel density (MVD) was observed in the tumors with high expression of VEGF compared with that of the low expression (P<0.001). 29 patients (80%,29/33) with the high expression of VEGF showed lymphonode metastasis and 4 patients (27%,4/15) unlymphonode metastasis (P<0.001). By Cox’s proportional hazard model analysis, the expression of VEGF was considered an independent predictor for the prognosis of NSCLC. Conclusions The expression of VEGF has a significant correlation among MVD, growth, invasion, and lymphonode metastasis. The patient with the tumor of the higher expression of VEGF and MVD may have poor prognosis. VEGF may be an independent predictor of prognosis.
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【Key word】 Endothelial growth factors Neovascularization Carcinoma, non-small cell
(Natl Med J China, 1999, 79:104-105)
肿瘤生长依赖于血管的形成[1]。在众多诱导血管生成的因子中，血管内皮生长因子(VEGF)被认为是最重要的血管生成因子[2]。为此，本研究以53例周围型非小细胞肺癌患者为对象，探讨VEGF在肺癌中的表达及其与肺癌血管生成、局部浸润和患者预后的关系。
对象与方法
1.对象：北京市肿瘤防治研究所5年间收治的周围型非小细胞肺癌患者53例(术前经骨扫描、头颅CT、腹部CT或B型超声等分期检查，证明无远处转移，经外科根治性切除、纵隔淋巴结探查手术治疗，并经术后随访)。男37例，女16例，男女之比为2.3：1。其中鳞癌21例，腺癌24例，腺鳞癌、肺泡细胞癌8例。年龄：29～75岁。平均57岁。
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2.方法：用免疫组织化学染色法进行VEGF抗体标记和瘤组织的VEGF 表达；用F8因子抗体标记瘤组织的血管生成。
3.抗体来源：VEGF抗体：兔抗人VEGF多克隆抗体(北京市肿瘤防治研究所免疫室惠赠)。抗F8因子抗体：兔抗人多克隆抗体；Ⅱ抗生物素标记的羊抗兔抗体；Ⅲ抗辣根酶标记的链霉素卵白素(购自北京中山生物技术有限公司)。
4.分析标准：VEGF表达：用双盲法2人阅片，首先100×视野筛选VEGF表达最强区，然后200×视野连续记数400个癌细胞，阳性表达的细胞占30%以上为高表达，小于30%者为低表达。
5.血管生成：以抗F8因子的抗体标记血管数为依据。用双盲法，同样的2人在100×视野下筛选血管生成最活跃的区域，200×视野记微血管数，再据此计算微血管密度，即计算每平方毫米的微血管数(MVD)。
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6.统计学处理：VEGF的表达与MVD相关性用等级秩和检验及时序检验；VEGF与淋巴结转移和肿瘤大小的相关性，进行四格表卡方检验 。用SPSS统计学软件进行Cox回归分析(后退法)，探讨VEGF表达与病人预后的关系。
结 果
1.VEGF的表达与MVD：VEGF阳性着色为棕黄色颗粒，分布在细胞质内。其中低表达者20例，占38%(20/53)；高表达33例，占62%(33/53)。F8因子标记的微血管，内皮细胞染为棕黄色，记数从0～19/mm2。
2.VEGF表达与MVD的关系：在53例患者中，VEGF高表达33例，其相应的MVD为(12.2±2.6)根/mm2，范围6.2～19.1根/mm2；低表达20例，其MVD为(6.0±1.2)根/mm2。经样本等级秩和检验，μ≥2.58 ，P≤0.01。差异有非常显著性意义。表明VEGF表达与MVD两者间密切相关。伴随VEGF的表达增强，MVD明显增加。
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3.VEGF表达与肿瘤T分期和淋巴结转移的关系：在53例患者中，淋巴结转移的38例，其中VEGF高表达29例，占76%(29/38)，无淋巴结转移的15例，其中高表达的4例,占27%(4/15)。卡方检验：χ2=11.2831，P<0.001。差异有非常显著性意义。T1+T2共20例，其中VEGF高表达7例，占35%(7/20)；T3 33例，高表达26例，占79%(26/33)，经卡方检验，χ2=10.162 ，P≤0.01，差异有非常显著性意义。结果表明：VEGF与淋巴结转移和肿瘤的体积密切相关。随肿瘤VEGF表达增加，肺癌瘤体的体积明显增大，淋巴结转移明显增多。
4.VEGF表达与肺癌患者的生存率关系：本组53例患者总的5年生存率为15.8%， VEGF高表达的33例中，5年生存率为(3±3)%；VEGF低表达的20例，其5年生存率为(36±13)%。VEGF高表达的患者生存率比低表达的明显降低。经时序检验(Log rank test)，P=0.0001。差异有非常显著性意义。伴随VEGF表达的增强，患者的生存率明显降低。
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5.MVD与患者生存率的关系：将MVD分为4组。MVD<5的7人，5年生存率42.9%；MVD 6～10的20人，5年生存率40%；MVD 11～15的17人，5年生存率0%；MVD>16的9人，5年生存率0%。经时序检验，P<0.001。差异有非常显著性意义。伴随MVD的增加，患者的生存率明显减低。
6.Cox回归分析：经对患者的性别、年龄、瘤体的大小(≤3cm，>3cm)、淋巴结转移(N0，N1，N2)、TNM分期(1989年UICC的分期法)、MVD和 VEGF表达的Cox比例风险模型分析，结果证明，MVD、VEGF可作为独立的判断患者预后的指标。
讨 论
由于VEGF是多功能的细胞因子[2]，一方面，它可高度特异性的诱导血管内皮细胞有丝分裂，直接刺激血管生成；另一方面，可诱导血管通透性增加，导致血管内大分子物质的漏出，有利于血管外基质的形成，为血管内皮细胞的增殖、血管的形成提供支架，辅助血管形成；再一方面，VEGF对巨噬细胞的趋化作用，诱导趋化来的巨噬细胞释放其本身的血管生成因子，间接促进血管生成。本研究进一步支持VEGF是重要的血管生成因子的观点。
, 百拇医药
Claffey 等[3]通过对脑膜瘤细胞系的研究发现，转染VEGF的肿瘤细胞，VEGF表达越强，新生血管越丰富，其营养和氧的供应越充分，肿瘤的生长越快，瘤体相对较大，肺转移更多。抑制VEGF的表达和新生毛细血管的形成可抑制实验鼠的肺和肝转移。而本研究结果亦支持VEGF与肿瘤的生长转移的密切关系。
肿瘤的生长依赖于新生血管形成。肿瘤的新生血管不仅决定着肿瘤从增生向恶性的转化，而且与肿瘤的远处转移密切相关。在临床回顾性研究[4]，如胃癌等的分析表明：VEGF表达和MVD及患者的预后密切相关，可作为独立的判断患者预后的指标。本研究进一步揭示VEGF可作为独立的判断肺癌患者预后的指标。
参考文献 1 Folkman J.What is the evidence that tumors are angiogenesis dependent？ J Natl cancer Inst, 1990 ，82：4-6.
, 百拇医药
2 Donala K , Senger D, Livingston V ,et al. Vascular permeability factor (VEGF,VPF) in tumor biology. Cancer Metastasis Rev，1993 ，12:303-324.
3 Claffey KP,Brown LF，Del Aguila LT，et al. Expression of vasculare permeability factor /vascular endothelial growth factor by melanoma cells increases tumor growth,angiogenesis, and experimental metastasis.Cancer Res ,1996,56:172-181.
4 Maeda K，Chung YS， Takatsuka S ，et al. Tumour angiogenesis and tumour cell proliferation as prognostic indictors in gastric carcinoma . Br J Cancer,1995 ,72:319-323.
(收稿：1998-08-06 修回：1998-11-25), http://www.100md.com