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编号:10228672
EB病毒IgG-EA抗体测定在鼻咽癌筛查中的意义*
http://www.100md.com 《癌症》 1999年第2期
     作者:肖锡宾 张昌卿 李经略 黄宝珍 冯凯涛 叶永照 孙韵 黄腾波

    单位:肖锡宾 张昌卿 李经略 冯凯涛 叶永照 孙韵 中山医科大学肿瘤防治中心,中心实验室;黄腾波 中山医科大学肿瘤防治中心,鼻咽癌科;黄宝珍 中山医科大学肿瘤防治中心,肿瘤研究所(广州510060)

    关键词:鼻咽癌;EB病毒;早期抗原/抗体;筛查

    癌症/990224

    【摘要】目的:探讨EB病毒早期抗原(EA)IgG抗体测定在鼻咽癌筛查中的价值。材料和方法:依序列测定方法,用免疫酶染色法对从6257份血清筛查后获得的,IgA/VCA滴度≥1∶80的158例血清再进行EBVIgG/EA酶联免疫吸附法(ELISA)测定和IgA/EA抗体免疫酶染色法测定。同时对上述158例血清阳性者进行鼻咽光纤镜和病理检查。根据检查结果比较单项阳性与双项检查阳性血清间鼻咽癌的检出率(阳性预示值)。结果:在这158例阳性血清者中检出鼻咽癌12例。三组阳性血清诊断鼻咽癌的预示值分别是,第一组(IgA/VCA≥1∶80)为7.6%(12/158),第2组(IgA/VCA≥1∶80+IgA/EA≥1∶5)为18.2%(8/44),第3组(IgA/VCA≥1∶8和IgG/EAOD值≥0.18)为15.9%(11/69)。第一组的阳性预示值最低(P<0.05),其余两组间无差异(P>0.05)。第3组检出的11例鼻咽癌包括了第2组中所有的8例鼻咽癌和另外3例IgA/EA阴性鼻咽癌。结论:从序列测定获得的双项阳性血清中筛查到的鼻咽癌比率高于单项IgA/VCA阳性血清。用IgG/EA与IgA/VCA组合测定的双项阳性血清比用IgA/EA与IgA/VCA组合测定的双项阳性血清能查出更多的鼻咽癌,因此该组合更适合于鼻咽癌筛查。
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    中图号:R739.63,R730.45 文献标识码:A 文章编号:1000-467X(1999)02-0190-03

    The significance of detection for EBV IgG/EA antibody in

    screening program for nasopharyngeal carcinoma(NPC)

    XIAO Xi-bin,ZHANG Chang-qing,LI Jign-lue, et al.

    Cancer Centre Sun Yat-sen University of Medical Sciences,Guangzhou, 510060,China

    【Abstract】 Purpose: To study the value of detection for EBV IgG/EA antibody in screening program for NPC. Material and methods: With the ordinal test mode, the sera of 158 cases (EBV IgA/VCA≥ 1∶80) from 6257 cases screening population were tested again for EBV IgG/EA and EBV IgA/EA antibody by enzyme linked imumosorbent assay (ELISA) and immu-enzymatic method. The 158 seropositive subjects were examined by nasopharyngofibroscope/ pathology for NPC. The comparison of the positive predictive value of diagnosis to NPC (NPC-PV) was completed during the three serum groups. Results: 12 NPC were diagnosed in the 158 subjects. The NPC-PV(number of NPC/number of positive sera) in 3 serum groups was: 7.6% (12/158) in group(1) (IgA/VCA only ≥ 1∶80),18.2% (8/44) in group(2)(IgA/VCA≥ 1∶80+ IgA/EA≥ 1∶5),15.9% (11/69) in group(3) (IgA/VCA≥ 1∶80+ IgG/EA OD≥ 0.18) respectively. The NPC-PV in group(1) was lower than other 2 groups (P<0.05). There was no significant difference of NPC-PV (P>0.05)between group(2) and group(3). But, the eleven NPC in group(3) included all NPC in group(2) (8 cases) and other 3 NPC with IgA/EA(一 ). Conclusion: The sera with dual positiveness had higher NPC-PV than the sera with only IgA/VCA≥ 1∶80. The more NPC would be diagnosed in the sera with IgA/VCA≥ 1∶80 and IgG/EA OD≥ 0.18 than in the sera with IgA/VCA ≥ 1∶80 and IgA/EA≥ 1∶5.It is suggested that the ordinal test mode for IgG/EA and IgA/VCA antibody should be taken in screening program for NPC.
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    Key word: Nasopharyngeal carcinoma; Population Screening; EB virus; Early antigen

    在自然人群中筛查鼻咽癌用得最广泛的血清学方法依次为,检测血清EB病毒壳抗原(VCA),早期抗原(EA)的免疫酶方法(IgA/VCA,IgA/EA)和检测血清EBV特异性DNA酶抗体(EDAb)的酶中和率法(AER)。由于AER方法涉及同位素操作,步骤复杂,难以在基层推广。用单项IgA/VCA测定自然人群血清筛查鼻咽癌的阳性预示值低[1]。而IgA/EA单项检测鼻咽癌的敏感性只有50%故不宜单独应用[2]。因此寻求一种适合于基层应用,诊断敏感性和特异性比较合理的鼻咽癌血清学筛查方式,仍然是当前具有现实意义的课题。根据文献分类,在联合检测方法中,将双项以上阳性才列为阳性者的测定称为序列测定,将凡具一项阳性就定为阳性者的测定称为平行测定。要提高在自然人群中检测某种疾病的阳性预示值和特异性,最好是联合应用两种以上独立的检测方法对群体作序列测定。即在第一次测得的阳性者中再进行一次以上的其它项目测定。据此,本室将新近建立的,测定EBVEAIgG抗体的ELISA方法(IgG/EA)作为参与序列测定的项目,对筛查鼻咽癌时所获得的IgA/VCA阳性血清进行测定。获得了较满意的效果,报道如下。
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    1 材料和方法

    1.1 鼻咽癌筛查及统计

    根据黄腾波报导的鼻咽癌优化筛查方案[4]。收集鼻咽癌高发区四会县随访血清6257份,进行IgA/VCA抗体测定。IgA/VCA抗体水平达到高危界限者作鼻咽光纤镜/病理活检检查。同时对检出的IgA/VCA高危血清分别进行IgA/EA,IgG/EA测定(序列测定)。记录两种序列测定方式获得的双阳性血清号,与光纤镜和病理检查结果核对癌检出情况。由于筛查对象达数千人,对非高危者未能作光纤镜和病理检查,无法获得假阴性数据进行阴性预示值计算。因此本文只对各项检查的阳性预示值进行χ2检验比较。

    1.2 血清IgA/VCA,IgA/EA抗体的免疫酶染色测定

    根据刘育希等报道的方法,采用中山生物工程公司生产的EB病毒IgA/VCA,IgA/EA测定试剂盒。按操作说明,以阳性血清的最高稀释度为血清抗体滴度。
, 百拇医药
    1.3 血清EBV-EAIgG抗体的ELISA测定

    用来自Raji细胞的粗提EA抗原包被酶标反应软板(天津有机玻璃制品厂)依ELISA测定血清抗体的常规操作。用辣根过氧化物酶标记的羊抗人IgG(购自DAKO公司,1∶1000稀释)为二抗,H2O2-邻苯二胺(Sigma)为显色剂,0.2mol/L硫酸终止反应。将反应板移入酶标仪在490/630mm波长下进行检测。以每个孔的OD值作为被检血清IgG/EA的相对水平。根据现有资料统计,本法诊断鼻咽癌的敏感性为89%(405/454),特异性为97%(9/300)(另文发表)。

    1.4 鼻咽光纤镜检查和癌的诊断

    只在血清IgA/VCA测定达到高危界限的人群中进行,由本院鼻咽癌科和病理科完成。

    2 结果

, 百拇医药     2.1 血清IgG/EAOD值,IgA/VCA和IgA/EA滴度阳性水平的界定

    根据正常人单侧界限95%特异度K值定出的OD≥0.18为IgG/EA阳性值(另文发表)。按黄腾波等报道的鼻咽癌血清高危界限,分别以IgA/VCA滴度≥1∶80,IgA/EA滴度≥1∶5作为阳性标准。

    2.2 血清筛查结果

    6257份血清中IgA/VCA≥1∶80者158份。从这158例阳性者中经鼻咽光纤镜和病理诊断发现鼻咽癌12例。阳性预示值为7.6%,在三组测定结果中最低(P<0.05)。含IgA/EA组合的双项阳性血清44份,检出鼻咽癌8例。比单项IgA/VCA测定少4例,阳性预示值为18.2%。含IgG/EA组合的双项阳性血清共69份,检出鼻咽癌11例,比单项IgA/VCA少1例,阳性预示值为15.9%。两种序列组合之间的阳性预示值无显著差异(P>0.05)都高于单项IgA/VCA2倍多(见表1)。
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    表1 血清学序列检测筛查鼻咽癌的阳性预示值比较 项目

    血清(例)

    阳性预示值

    NPC/阳性例数

    χ2

    P值

    阳性Δ

    NPC

    IgA/VCA(免疫酶法)

    (titer≥1∶80)

    158

, 百拇医药     12

    7.6%

    6.26*

    <0.05

    IgA/VCA(免疫酶法)

    (titer≥1∶80)

    +

    44

    8

    18.2%

    IgA/EA(免疫酶法)

    (titer≥1∶5)
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    1.13

    >0.05

    IgA/VCA(免疫酶法)

    (titer≥1∶80)

    +

    69

    11

    15.9%

    IgG/EA(免疫酶法)

    OD≥0.18

    Δ阳性血清来自6257例鼻咽癌高危地区人群

    *三项之比 NPC=鼻咽癌
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    2.3 12例鼻咽癌的血清学检测结果

    12例鼻咽癌中新检出者9例,旧患者3例。IgA/EA阳性8例,IgG/EA阳性11例。在这11例中包括了所有8例IgA/EA阳性患者。IgA/EA和IgG/EA均阴性患者1例(见表2)。

    表2 12例鼻咽癌血清学检查结果 血清号

    IgA/VCA

    titer≥1∶80

    IgA/EA

    titer≥1∶5

    IgG/EA

    OD≥0.18

, http://www.100md.com     病理诊断

    26356

    1∶80

    (一)

    0.217

    低分化鳞癌

    48533

    1∶80

    (一)

    0.244

    NPC(旧病人)

    854

    1∶160
, 百拇医药
    1∶5

    0.265

    非角化性癌

    49788

    1∶160

    1∶10

    0.294

    分化型非角化癌

    42053

    1∶160

    1∶10

    0.266

    NPC(旧病人)
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    16015

    1∶160

    1∶5

    0.222

    未分化癌

    20229

    1∶320

    1∶40

    0.244

    NPC(旧病人)

    25358

    1∶320

    1∶40
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    0.189

    未分化癌

    37592

    1∶320

    (一)

    0.078

    低分化鳞癌

    19375

    1∶640

    1∶320

    0.344

    未分化癌

    20714
, 百拇医药
    1∶640

    (一)

    0.361

    分化型非角化癌

    23461

    1∶640

    1∶80

    0.306

    未分化癌

    合计(例)

    12

    8

    11
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    新病例9例

    旧病例3例

    3 讨论

    作为序列检测结果,从表1见,IgA/VCA+IgG/EA组合与IgA/VCA+IgA/EA组合的阳性预示值分别为15.9%和18.2%,两者间无显著差异(P>0.05),高于单项IgA/VCA测定的7.6%(P<0.05),该结果与文献报道的,序列测定具有提高阳性预示值的作用相符。上述两种序列测定方式,就提高阳性预示值方面在鼻咽癌筛查中都有应用价值。两者区别在于,前者只有1例鼻咽癌未被检出而后者却有4例鼻咽癌未能检出(见表1)。由此可见,IgG/EA组合明显优于IgA/EA组合。从所检出的鼻咽癌血清学结果分析(见表2)在158例IgA/VCA≥1∶80的阳性者中检出12例鼻咽癌,其中IgA/EA阳性8例,IgG/EA阳性11例。值得注意的是,IgG/EA阳性的11例包含了所有8例IgG/EA阳性患者和3例IgA/EA阴性者。而IgG/EA阴性的1例IgA/EA也是阴性。IgG/EA测定不仅能检测到全部IgA/EA阳性的鼻咽癌,也能检到部分IgA/EA阴性鼻咽癌的现象说明,含IgG/EA组合所测定的双阳性血清会比含IgA/EA组合的双阳性血清能检出更多的鼻咽癌,因此,IgG/EA组合更适宜选择作为参与序列测定的项目。闵华庆等观察到,在血清IgA/VCA和IgA/EA抗体双阳性者中能检出比自然人群比例更高的癌患者,因此文章将此双阳性者列入鼻咽癌高危人群。据此考虑,由于IgA/VCA与IgG/EA抗体双阳性者罹患鼻咽癌的人数(11人)高于IgA/VCA与IgA/EA双阳性者(8人)。因此含IgG/EA组合所测定的双阳性者也应列入高危人群中进行随访。
, 百拇医药
    ELISA方法除了可以用较少的人力快速处理大批量血清样本外,还具有既可直接用肉眼判断结果,也可借助酶标仪精确读数,数据重复性好,判断客观等优点。在大规模的血清筛查工作中应用序列测定法,是先用ELISA检测IgG/EA还是先用IgA/VCA检测,其结果是相同的。人们可以选择用最经济的方式汇集阳性血清后,再做第二次测定,最后进入临床甄别的人数将比单项IgA/VCA筛查法更为减少。根据统计,以ELISA检测IgG/EAOD值≥0.18和IgA/VCA滴度≥1∶80双项阳性为标准,临床鼻咽癌患者的检出率(敏感性)为75.4%(101/134)(待发表资料)。因此本文报道的,将ELISA检测IgG/EA与IgA/VCA测定相结合的鼻咽癌筛查方式能将大部份(约75%)的癌患者集中在最小的人群内。可以设想,如果将IgA/VCA标准从≥1∶80降到≥1∶5,上述双阳性筛查的敏感性还会有所提高。本文所述的鼻咽癌序列检测方法不仅在提高阳性预示值的效果上,而且在快速检测样品方面所具有的特点是以往的单项IgA/VCA筛查方法所不具备的,该法尤适宜于基层单位选用。
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    基金项目:广东省卫生厅科研基金(A1997196)资助课题

    参考文献

    1 曾毅,刘育希,韦继能,等.鼻咽癌血清学普查〔J〕.中国医学科学院学报,1979,1:123~125.

    2 中国医学科学院肿瘤病毒室等.鼻咽癌病人的EB病毒免疫球蛋白G和A抗体的测定〔J〕.微生物学报,1978,18:253~255.

    3 苏学良,罗盖伦主编.临床生物化学实验数据处理〔M〕.第一版,天津:天津科学技术出版社,1988:195~196.

    4 黄腾波,李景廉,陈德林等.EB病毒抗体检测在鼻咽癌早诊应用中的评价〔J〕.中山医科大学学报,1995,16(增刊):55~57.

    5 刘育希,曾毅,董温平,等.应用免疫酶法检测鼻咽病人免疫球蛋白A抗体〔J〕.中华肿瘤杂志,1979,1:8~10.

    6 黄腾波,汪慧民,李景廉等.鼻咽癌优化筛查方案一鼻咽癌的早期检出〔J〕.癌症,1997,16(4):245~247.

    7 闵华庆,黄腾波.EB病毒与鼻咽癌相关的前瞻性观察〔J〕.癌症,1991,10(5):367~369.

    收稿日期:1997-09-08;修回日期:1997-10-15, 百拇医药