原发性肝癌9号染色体等位基因杂合性丢失研究
作者：邵建永 Liew Choong Tsek 梁小曼 吴秋良 李晓明 候景辉
单位：邵建永 梁小曼 吴秋良 候景辉(广州中山医科大学肿瘤医院病理科(广州510060))；Liew Choong Tsek 李晓明(香港中文大学医学院病理解剖及细胞病理学系)
关键词：肝细胞癌；杂合性丢失；聚合酶链反应；肿瘤抑制基因
New Page 1
【摘要】目的：探讨食管鳞癌DNA含量与临床特点及预后之间关系。方法：应用流式细胞分析术(FCM)和图像细胞分析术(ICM)对41例食管鳞癌石蜡标本进行DNA含量测定，回顾性分析其预后指标。结果：FCM和ICM测定的DNA含量表明：DNA倍体与淋巴结转移、临床病理分期、组织分化程度有密切关系(P<0.05)；DNA倍体与预后有密切关系(P<0.01)。且两种方法测定的DNA含量组方图相似。两者测定均为二部的肿瘤患者7例，均生存年以上，符合率100%；均为异倍体者29例，符合率87.8%。结论：两者均可成为食管鳞癌患者预后的检测指标。
, 百拇医药
中图号：R735.1 文献标识码：A 文章编号：1000-467×(1999)02-0126-03
Prognostic Factors in patients with esophageal squamous cell
carcinoma after surgery alone
HE Jie ZHANG Ru-gang
Department of Thoracic Surgery,Cancer Institute,Chinese Academy of Medical
Sciences, Beijing 100021, China
【Abstract】 Purpose: To determine the Correlation of DNA content with clinicopathologic features and prognosis of esophageal squamous cell carcinoma. Methods: Using Flow Cytometry (FCM) and Image Cytometry (ICM), an retrospective study was performed on 41 paraffinembedded samples of esophageal squamous cell carcinoma. Results: The DNA content of esophageal cancer was measured by FCM and ICM. The results showed that 11 cases (26.8%) were diploidy and the other 30 cases were aneuploidy. A close correlation was observed among the DNA ploidy status, lymph node metastasis, TNM staging and degree of the cancer cell differentiation (P<0.05). DNA ploidy status was also found to be related with prognosis of patients (P<0.01). The five year survival rate of patients with diploidy tumors was significantly higher than that of patients with aneuploidy tumors. Seven cases of diploid and 29 cases of aneuploid were measured by both methods. The seven patients with diploidy tumors all survived for more than five years. Conclusions: DNA content measured by FCM and ICM were the prognostic factors for patients with esophageal squamous cell carcinoma.
, 百拇医药
Key words: Esophageal carcinoma; DNA content; Prognosis
1 资料与方法
1.1 临床资料
检测随机选择1979～1984年我院单一手术经10%甲醛固定、石蜡包埋的食管鳞癌标本41例。其中男29例，女12例，年龄35～72岁，平均51.8岁。生存5年以上者14例，占34.2%(14/41)。
1.2 方法
1.2.1 FCM：根据改良的Hedly氏方法[1]，把石蜡标本制成细胞核悬液，用碘化丙锭(PI)染色，上流式细胞仪测定。
1.2.2 ICM：取上述相同的41例石蜡包埋标本，切成4μm切片，Feulgen染色[2]，上图像细胞分析仪检测。
, 百拇医药
2 结果
2.1 FCM
组方图特点为单峰型和双峰型，单峰型为二倍体肿瘤11例(26.8%)，双峰型为异倍体肿瘤30例(73.2%)(图1)，经统计学处理，DNA倍体与肿瘤TNM分期，淋巴结转移，组织分化程度相关(P<0.05)；DNA倍体与预期有明显相关(P<0.01)。(表1)。二倍体肿瘤预后好，异倍体肿瘤预后好。
图1 FCMDNA组方图
, http://www.100md.com
表1 DNA倍体临床病理特点及预后关系
临床病理特点
二倍体
异倍体
P值
淋巴结
LN(-)
11
20
x2=3.842
TNM分期
LN(+)
, 百拇医药
0
10
P<0.05
Ⅰ
2
2
x2=6.564
Ⅱ
9
16
P<0.05
Ⅲ
0
, 百拇医药
12
分化程度
Ⅰ
2
2
x2=7.959
Ⅱ
9
11
P<0.05
Ⅲ
0
12
, 百拇医药
预后
<5年
1
26
x2=18.2
≥5年
10
4
P<0.01
2.2 ICM
测定结果按DNA均值分为3种峰型。Ⅰ型(均值1～2之间)8例，Ⅱ型(均值2～3之间)12例，Ⅲ型(均值>3)21例(图2)。3种类型与肿瘤的分化程度、淋巴结转移、TNM分期有关(P<0.05)，与顾后有明显关系(P<0.01)(表2)。
, 百拇医药
图2 ICM各峰型
表2 各峰型与临床病理特点及预后关系
临床病理特点
峰型
P值
Ⅰ
Ⅱ
Ⅲ
分化程度
Ⅰ级
4
2
2
, 百拇医药
Ⅰ级(Ⅰ型)→Ⅱ、Ⅲ级(Ⅱ、Ⅲ型)
Ⅱ级
3
7
13
x2=5.88
Ⅲ级
1
3
6
P<0.05
淋巴结
LN(一)
, 百拇医药
8
10
13
Ⅰ、Ⅱ→Ⅲ
x2=4.04
TNM分期
LN(+)
0
2
8
P<0.05
I期
2
, http://www.100md.com
1
1
x2=9.136
Ⅱ期
6
9
10
P<0.05
预后
Ⅲ期
0
2
10
, http://www.100md.com
<5年
1
7
19
x2=16.091
≥5年
7
5
2
P<0.01
2.3 FCM+ICM
两种方法检测的DNA含量相互间对判断预后有明显意义。二者测定均为二倍体者(7例)均生存5年以上。二者均为异倍体者(29例)，预后较差。两者测定的DNA含量组方图相似，两者有明显的相关性(r=0.4598)(见图3、图4)
, 百拇医药
图3 FCM和ICM组方图相似
R=0.4598 P<0.001 Y=1.00678+0.1707×
图4 FCM和ICM的相关回归
3 讨论
近年来很多人研究影响食管癌的预后因素[3～6]，但均未发现单一的、特异性的因素。因此，影响食管癌预后可能是多因素的，根据这一思路，我们从DNA含量着手，对食管癌的预后做了多方面的研究。通过FCM和ICM检测发现：FCM测定的二倍体肿瘤患者预后明显高于异倍体肿瘤患者。且二倍体肿瘤淋巴结转移率低于异倍体肿瘤，分化程度高于异倍体肿瘤，与文献报道相符[3～6]。ICM测定的肿瘤DNA含量与预后有关，单峰型肿瘤生长慢、复发晚、预后好；多峰型肿瘤生长快、复发早、预后差[7]。本组41例食管鳞癌图像分析结果与上述学者观点相似，各峰型与临床病理分期有关。Ⅰ型肿瘤淋巴结转移，其组织分化程度和TNM分期均优于Ⅱ、Ⅲ型肿瘤。各峰型5年生存率有显著差异，Ⅰ型最好，Ⅱ型其次，Ⅲ型最差。FCM和ICM同时检测本组标本显示：两者在DNA倍体分布上非常相近，符合率87.8%(36/41)，且二倍体肿瘤和异倍体肿瘤患者的5年生存率有明显差异(P<0.01)。虽然单一方法对食管鳞癌预后估计上有相当的准确性，但仍有一定的误差，值得注意的是两法结合可大大提高倍体与预后之间的符合率。两法测定均为二倍体肿瘤者全部生存5年以上，其符合率高达100%。说明FCM和ICM对食管鳞癌患者的预后估计方面，特别是对二倍体肿瘤患者的预后估计有互补作用，二者结合可以明显提高对食管鳞癌术后患者预后判断的准确性。二者均为食管鳞癌患者预后的检测指标。
, 百拇医药
*通讯作者
参考文献
1 Hedley.D.W. Method for analysis of cellular DNA content of paraffin embedded pathological material using flow cytometry 〔J〕. Cytometry, 1983,31:1333～ 1335.
2 夏晓玲、 沈铭昌. DNA含量测定在胃癌及癌前病变研究中应用〔J〕. 肿瘤，1990，10(2)：93～ 94
3 K. Sanekata Hattori T. The prognostic value of flow cytometric DNA analysis in Human esophageal carcinoma〔M〕. Disease of The Esophagus Spring Verlag Berli, 1988∶ 483.
, 百拇医药
4 Frankurl. O.S. Prognostic application of DNA flow cytometry for human solid tumors〔J〕. Ann of the N.Y. academy of sciences, 1986,468:276～ 278.
5 Merkel D.E, Dressler L. G, Mc Guire W.L. Flow cytometry, cellular DNA content and prognosis in human malignancy〔J〕 . J. clin Oncol, 1987,5(10):1690～ 1692.
6 Yu Jin Ming Yang Li-hua, Guo Qing, et al. Flow cytometric anlysis DNA content in esophageal carcinoma〔J〕. Cancer, 1989,64:80～ 82.
7 Hiroshi Matsuura, Horoyuki Kuwano, Masaru Morita. Predicting recur-rence time of esophageal carcinoma through assessment of histologic factors and DNA ploidy〔J〕 . Cancer, 1991,67:1406～ 1410.
收稿日期：1999-03-9, 百拇医药
单位：邵建永 梁小曼 吴秋良 候景辉(广州中山医科大学肿瘤医院病理科(广州510060))；Liew Choong Tsek 李晓明(香港中文大学医学院病理解剖及细胞病理学系)
关键词：肝细胞癌；杂合性丢失；聚合酶链反应；肿瘤抑制基因
New Page 1
【摘要】目的：探讨食管鳞癌DNA含量与临床特点及预后之间关系。方法：应用流式细胞分析术(FCM)和图像细胞分析术(ICM)对41例食管鳞癌石蜡标本进行DNA含量测定，回顾性分析其预后指标。结果：FCM和ICM测定的DNA含量表明：DNA倍体与淋巴结转移、临床病理分期、组织分化程度有密切关系(P<0.05)；DNA倍体与预后有密切关系(P<0.01)。且两种方法测定的DNA含量组方图相似。两者测定均为二部的肿瘤患者7例，均生存年以上，符合率100%；均为异倍体者29例，符合率87.8%。结论：两者均可成为食管鳞癌患者预后的检测指标。
, 百拇医药
中图号：R735.1 文献标识码：A 文章编号：1000-467×(1999)02-0126-03
Prognostic Factors in patients with esophageal squamous cell
carcinoma after surgery alone
HE Jie ZHANG Ru-gang
Department of Thoracic Surgery,Cancer Institute,Chinese Academy of Medical
Sciences, Beijing 100021, China
【Abstract】 Purpose: To determine the Correlation of DNA content with clinicopathologic features and prognosis of esophageal squamous cell carcinoma. Methods: Using Flow Cytometry (FCM) and Image Cytometry (ICM), an retrospective study was performed on 41 paraffinembedded samples of esophageal squamous cell carcinoma. Results: The DNA content of esophageal cancer was measured by FCM and ICM. The results showed that 11 cases (26.8%) were diploidy and the other 30 cases were aneuploidy. A close correlation was observed among the DNA ploidy status, lymph node metastasis, TNM staging and degree of the cancer cell differentiation (P<0.05). DNA ploidy status was also found to be related with prognosis of patients (P<0.01). The five year survival rate of patients with diploidy tumors was significantly higher than that of patients with aneuploidy tumors. Seven cases of diploid and 29 cases of aneuploid were measured by both methods. The seven patients with diploidy tumors all survived for more than five years. Conclusions: DNA content measured by FCM and ICM were the prognostic factors for patients with esophageal squamous cell carcinoma.
, 百拇医药
Key words: Esophageal carcinoma; DNA content; Prognosis
1 资料与方法
1.1 临床资料
检测随机选择1979～1984年我院单一手术经10%甲醛固定、石蜡包埋的食管鳞癌标本41例。其中男29例，女12例，年龄35～72岁，平均51.8岁。生存5年以上者14例，占34.2%(14/41)。
1.2 方法
1.2.1 FCM：根据改良的Hedly氏方法[1]，把石蜡标本制成细胞核悬液，用碘化丙锭(PI)染色，上流式细胞仪测定。
1.2.2 ICM：取上述相同的41例石蜡包埋标本，切成4μm切片，Feulgen染色[2]，上图像细胞分析仪检测。
, 百拇医药
2 结果
2.1 FCM
组方图特点为单峰型和双峰型，单峰型为二倍体肿瘤11例(26.8%)，双峰型为异倍体肿瘤30例(73.2%)(图1)，经统计学处理，DNA倍体与肿瘤TNM分期，淋巴结转移，组织分化程度相关(P<0.05)；DNA倍体与预期有明显相关(P<0.01)。(表1)。二倍体肿瘤预后好，异倍体肿瘤预后好。
图1 FCMDNA组方图
, http://www.100md.com
表1 DNA倍体临床病理特点及预后关系
临床病理特点
二倍体
异倍体
P值
淋巴结
LN(-)
11
20
x2=3.842
TNM分期
LN(+)
, 百拇医药
0
10
P<0.05
Ⅰ
2
2
x2=6.564
Ⅱ
9
16
P<0.05
Ⅲ
0
, 百拇医药
12
分化程度
Ⅰ
2
2
x2=7.959
Ⅱ
9
11
P<0.05
Ⅲ
0
12
, 百拇医药
预后
<5年
1
26
x2=18.2
≥5年
10
4
P<0.01
2.2 ICM
测定结果按DNA均值分为3种峰型。Ⅰ型(均值1～2之间)8例，Ⅱ型(均值2～3之间)12例，Ⅲ型(均值>3)21例(图2)。3种类型与肿瘤的分化程度、淋巴结转移、TNM分期有关(P<0.05)，与顾后有明显关系(P<0.01)(表2)。
, 百拇医药
图2 ICM各峰型
表2 各峰型与临床病理特点及预后关系
临床病理特点
峰型
P值
Ⅰ
Ⅱ
Ⅲ
分化程度
Ⅰ级
4
2
2
, 百拇医药
Ⅰ级(Ⅰ型)→Ⅱ、Ⅲ级(Ⅱ、Ⅲ型)
Ⅱ级
3
7
13
x2=5.88
Ⅲ级
1
3
6
P<0.05
淋巴结
LN(一)
, 百拇医药
8
10
13
Ⅰ、Ⅱ→Ⅲ
x2=4.04
TNM分期
LN(+)
0
2
8
P<0.05
I期
2
, http://www.100md.com
1
1
x2=9.136
Ⅱ期
6
9
10
P<0.05
预后
Ⅲ期
0
2
10
, http://www.100md.com
<5年
1
7
19
x2=16.091
≥5年
7
5
2
P<0.01
2.3 FCM+ICM
两种方法检测的DNA含量相互间对判断预后有明显意义。二者测定均为二倍体者(7例)均生存5年以上。二者均为异倍体者(29例)，预后较差。两者测定的DNA含量组方图相似，两者有明显的相关性(r=0.4598)(见图3、图4)
, 百拇医药
图3 FCM和ICM组方图相似
R=0.4598 P<0.001 Y=1.00678+0.1707×
图4 FCM和ICM的相关回归
3 讨论
近年来很多人研究影响食管癌的预后因素[3～6]，但均未发现单一的、特异性的因素。因此，影响食管癌预后可能是多因素的，根据这一思路，我们从DNA含量着手，对食管癌的预后做了多方面的研究。通过FCM和ICM检测发现：FCM测定的二倍体肿瘤患者预后明显高于异倍体肿瘤患者。且二倍体肿瘤淋巴结转移率低于异倍体肿瘤，分化程度高于异倍体肿瘤，与文献报道相符[3～6]。ICM测定的肿瘤DNA含量与预后有关，单峰型肿瘤生长慢、复发晚、预后好；多峰型肿瘤生长快、复发早、预后差[7]。本组41例食管鳞癌图像分析结果与上述学者观点相似，各峰型与临床病理分期有关。Ⅰ型肿瘤淋巴结转移，其组织分化程度和TNM分期均优于Ⅱ、Ⅲ型肿瘤。各峰型5年生存率有显著差异，Ⅰ型最好，Ⅱ型其次，Ⅲ型最差。FCM和ICM同时检测本组标本显示：两者在DNA倍体分布上非常相近，符合率87.8%(36/41)，且二倍体肿瘤和异倍体肿瘤患者的5年生存率有明显差异(P<0.01)。虽然单一方法对食管鳞癌预后估计上有相当的准确性，但仍有一定的误差，值得注意的是两法结合可大大提高倍体与预后之间的符合率。两法测定均为二倍体肿瘤者全部生存5年以上，其符合率高达100%。说明FCM和ICM对食管鳞癌患者的预后估计方面，特别是对二倍体肿瘤患者的预后估计有互补作用，二者结合可以明显提高对食管鳞癌术后患者预后判断的准确性。二者均为食管鳞癌患者预后的检测指标。
, 百拇医药
*通讯作者
参考文献
1 Hedley.D.W. Method for analysis of cellular DNA content of paraffin embedded pathological material using flow cytometry 〔J〕. Cytometry, 1983,31:1333～ 1335.
2 夏晓玲、 沈铭昌. DNA含量测定在胃癌及癌前病变研究中应用〔J〕. 肿瘤，1990，10(2)：93～ 94
3 K. Sanekata Hattori T. The prognostic value of flow cytometric DNA analysis in Human esophageal carcinoma〔M〕. Disease of The Esophagus Spring Verlag Berli, 1988∶ 483.
, 百拇医药
4 Frankurl. O.S. Prognostic application of DNA flow cytometry for human solid tumors〔J〕. Ann of the N.Y. academy of sciences, 1986,468:276～ 278.
5 Merkel D.E, Dressler L. G, Mc Guire W.L. Flow cytometry, cellular DNA content and prognosis in human malignancy〔J〕 . J. clin Oncol, 1987,5(10):1690～ 1692.
6 Yu Jin Ming Yang Li-hua, Guo Qing, et al. Flow cytometric anlysis DNA content in esophageal carcinoma〔J〕. Cancer, 1989,64:80～ 82.
7 Hiroshi Matsuura, Horoyuki Kuwano, Masaru Morita. Predicting recur-rence time of esophageal carcinoma through assessment of histologic factors and DNA ploidy〔J〕 . Cancer, 1991,67:1406～ 1410.
收稿日期：1999-03-9, 百拇医药