高粘血症大鼠心肌损伤时循环内皮细胞及功能变化高压液色谱用于肠通透性的测定
作者：雷 鸣 曾祖荫 郭渝成 张志高 吴 强 李保罗 杨国雄 陆德琴
单位：雷 鸣 曾祖荫 郭渝成 张志高 吴 强 550009 贵州省贵阳市，解放军44医院；李保罗 杨国雄 陆德琴 贵阳医学院病生教研室
关键词：心肌损伤；高粘血症；内皮细胞；内皮素；内皮功能；一氧化氮
中国微循环990209
【摘要】 目的 探讨高粘血症大鼠心肌损伤时的血粘度与内皮细胞及功能的关系。方法 采用Wister大鼠通过尾静脉注射高分子右旋糖酐复制心肌损伤动物模型，观察大鼠的全血粘度、循环内皮细胞计数(CEC)、血浆内皮素(ET)及一氧化氮(NO)的浓度变化。结果 实验组大鼠血粘度、CEC及ET明显增高，而NO低于对照组。结论 心肌损伤与血管内皮细胞损伤、功能障碍关系密切，由此所致的血管收缩、血液瘀滞可引起血粘度增高。高粘血症与内皮细胞损伤相互作用、影响，形成恶性循环，加重微循环障碍。
, 百拇医药
Changes of Endothelial Function in Cardiac Muscle Injury Rats with Hyperviscosity
Lei Ming，Zeng Zuyin，Guo Yucheng，et al.
44th Hospital of PLA，Guiyang 550009
【Abstract】 Objective To investigate the relationship of blood viscosity and endothelial function in cardiac muscls injury rats.Methods Animal model of cardiac muscle injury was induced by intravanous injection of high molecular dextran in Wistar rats.The blood viscosity，circular endothelial cells (CEC)，plasma concentration of endothelin (ET) and nitric oxide (NO) were measured.Results Blood viscosity，counts of CEC and level of ET were remarkably elevated，and plasma NO was significantly reduced in cardiac muscle injury rats.Conclusion Cardiac muscle injury is associated with endothelium impairment and dysfunction.The constrictive vessel and the slow flow，resulted from endothelium dystunction，can induce a marked rise in blood viscosity.Hyperviscosity and endothelial injury interact to form vicious circle，thus aggravating microcirculation dysfunction.
, 百拇医药
【Key words】 Cardiac muscle injury Hyperviscosity Endothelial cells Endothelin
Endothelial function Nitric oxide
近年来关于微血栓对心、血管损伤的报道日益增多，但对心、血管的损伤机理尚无一致看法。本文采用Wister大鼠复制心肌损伤动物模型，对血粘度、内皮细胞计数及反映血管内皮细胞功能的内皮素(ET)、一氧化氮(NO)变化作了观察，并对它们之间的关系作了探讨，现报道如下：
材料与方法
用Wister大鼠(雌雄不限)11只，体重180～255g，随机分为两组，高分子右旋糖酐组6只，生理盐水组5只，后者作对照用。实验前先测心电图，各导联均在正常范围内，然后从尾静脉缓慢注射10%高分子右旋糖酐(HMD，分子量40万)复制循环血中出现心肌损伤的模型[1]，剂量0.8ml/100gBW，每天一次，连续3天，第3天注射完毕后20分钟随访心电图，然后取血作血粘度、CEC、ET、NO检测。
, 百拇医药
观察测定指标的方法：
1 心电图： 用3%戊巴比妥钠液0.1ml/100gBW腹腔注射麻醉，仰卧位固定，用新银针作电极插入大鼠四肢皮下，以直流电作电源。每只鼠均记录Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ、avR、avL、avF导联心电图。
2 血粘度测定： 取动、静脉混合血2ml置于含3.8%枸橼酸钠溶液0.2ml的试管中混匀，用成都产NXE-Ⅰ型锥板式粘度计测定全血粘度。
3 循环血中内皮细胞计数： 取动、静脉混合血1.5ml，置于含3.8%枸橼酸钠溶液0.4ml的硅化玻璃试管中，用Percoll密度梯度快速一步分离法分离血中内皮细胞。将上述分离的上层和中层液分别置于血细胞计数池中，光学显微镜下计数，每一标本计数4次，取其均值为该层CEC数，再以上层和中层的均值为CEC计数结果。
4 血浆内皮素(ET)测定： 取股动、静脉混合血1ml，置于含10%EDTA二钠30ml和抑肽酶40μl的试管中，混匀，4℃3000rpm离心10min，分离血浆。用放免法测定血浆中ET。试剂盒由北京东亚技术研究所提供。
, 百拇医药
5 一氧化氮(NO)测定： 用苯乙烯二胺盐酸法测定。试剂盒由中国军事医学科学院放射医学研究所提供。
6 统计方法： 各项实验数据用
±s表示，进行t检验。
结 果
1 心电图： 注射HMD后的大鼠心肌损伤，ST段抬高，与注射前及对照组比较差异显著，见表1。
表1 注射HMD前后心电图ST段抬高比较(±s) 组 别
例 数
实验前ST段上抬
, 百拇医药
实验后ST段上抬
P值
对照组
实验组
5
6
0.012±0.005mv
0.013±0.007mv
0.014±0.006mv
0.250±0.12mv
>0.05
<0.001
, 百拇医药
2 血粘度变化，见表2。表2 对照组与实验组的血粘度比较(±s) 组 别
例 数
230S-1
23S-1
9.6S-1
对照组
实验组
5
6
4.93±1.16
, 百拇医药
6.95±1.08*
6.13±0.60
10.20±1.87△
7.71±0.67
18.5±3.23△
与对照组比较 *P<0.05，△P<0.001
3 CEC、ET、NO测定结果，见表3。
表3 实验组与对照组的CEC、ET、NO比较(±s) 组 别
例 数
, http://www.100md.com
CEC(NO./0.9μl)
ET(ng/L)
NO(μmol/L)
对照组
实验组
5
6
5.33±2.34
13.70±7.82*
123.10±11.70
160.42±10.70△
, 百拇医药 4.08±0.44
3.46±0.3*
与对照组比较 *P<0.05，△P<0.001
讨 论
本文用HMD静脉注射大鼠尾静脉，造成微血管中微血栓形成，心肌受到损伤，ST段呈弓背样抬高或呈单向曲线，成功复制了心肌损伤的动物模型[1]。此时测得大鼠血粘度增高(P<0.05～0.001)；循环血中CEC明显增加；ET水平增高，NO水平降低(P<0.001，P<0.05)。这些结果均说明大鼠心肌损伤时不仅血粘度增高，而且还有内皮细胞的损伤使其脱落增加，同时伴有内皮细胞功能的明显障碍。ET和NO是血管内皮细胞分泌的血管活性物质。当血粘度增高时血流缓慢，血流的切应力降低，导致内皮细胞释放NO减少[2]，同时血管内皮细胞受损后由内皮细胞分泌的NO也会不同程度减少，双重因素均使NO水平明显低下。而ET则不同，当血粘度增高时血流缓慢，血流切应力降低，ET的生成和分泌增加。此外心肌损伤、缺氧或肾上腺素、血管紧张素水平增加时可损伤血管内皮细胞，使ET分泌增加[2]。以上两方面因素均可引起血管强烈收缩，血液瘀滞，反过来使血粘度增加。由此可见微循环障碍时，血粘度增加对微血管内皮细胞有一定损伤，其功能受到影响，使CEC增加、NO水平降低、ET水平增高，致使微血管强烈收缩。微血管收缩，又使血液瘀滞，血粘度增高。这表明血粘度增高与内皮细胞损伤相互影响，形成恶性循环，进一步加重微循环障碍。
, http://www.100md.com
* 贵州省科学技术基金资助项目(NO：1997，3057)
参考文献
1 金惠铭.静脉注射高分子右旋醣酐复制家兔急性微循环障碍模型的实验研究.中国急救医学.1987，2(3)：37
2 刘凝慧.内皮细胞功能与心血管张力的调节.微循环技术杂志.1994，2(4)：214
收稿： 1998-07-10 修回： 1998-09-11
中国微生态学杂志 2000年第4期第12卷 技术方法
高压液色谱用于肠通透性的测定
作者：邓高月 刘振邦 徐燕英 刘跃武 何桂珍
单位：邓高月 刘振邦(解放军305医院，北京100017)；徐燕英 刘跃武(中国医学科学院基础研究所仪器中心)；何桂珍(中国医学科学北京协和医院)
关键词：高压液相色谱；肠通透性., 百拇医药
单位：雷 鸣 曾祖荫 郭渝成 张志高 吴 强 550009 贵州省贵阳市，解放军44医院；李保罗 杨国雄 陆德琴 贵阳医学院病生教研室
关键词：心肌损伤；高粘血症；内皮细胞；内皮素；内皮功能；一氧化氮
中国微循环990209
【摘要】 目的 探讨高粘血症大鼠心肌损伤时的血粘度与内皮细胞及功能的关系。方法 采用Wister大鼠通过尾静脉注射高分子右旋糖酐复制心肌损伤动物模型，观察大鼠的全血粘度、循环内皮细胞计数(CEC)、血浆内皮素(ET)及一氧化氮(NO)的浓度变化。结果 实验组大鼠血粘度、CEC及ET明显增高，而NO低于对照组。结论 心肌损伤与血管内皮细胞损伤、功能障碍关系密切，由此所致的血管收缩、血液瘀滞可引起血粘度增高。高粘血症与内皮细胞损伤相互作用、影响，形成恶性循环，加重微循环障碍。
, 百拇医药
Changes of Endothelial Function in Cardiac Muscle Injury Rats with Hyperviscosity
Lei Ming，Zeng Zuyin，Guo Yucheng，et al.
44th Hospital of PLA，Guiyang 550009
【Abstract】 Objective To investigate the relationship of blood viscosity and endothelial function in cardiac muscls injury rats.Methods Animal model of cardiac muscle injury was induced by intravanous injection of high molecular dextran in Wistar rats.The blood viscosity，circular endothelial cells (CEC)，plasma concentration of endothelin (ET) and nitric oxide (NO) were measured.Results Blood viscosity，counts of CEC and level of ET were remarkably elevated，and plasma NO was significantly reduced in cardiac muscle injury rats.Conclusion Cardiac muscle injury is associated with endothelium impairment and dysfunction.The constrictive vessel and the slow flow，resulted from endothelium dystunction，can induce a marked rise in blood viscosity.Hyperviscosity and endothelial injury interact to form vicious circle，thus aggravating microcirculation dysfunction.
, 百拇医药
【Key words】 Cardiac muscle injury Hyperviscosity Endothelial cells Endothelin
Endothelial function Nitric oxide
近年来关于微血栓对心、血管损伤的报道日益增多，但对心、血管的损伤机理尚无一致看法。本文采用Wister大鼠复制心肌损伤动物模型，对血粘度、内皮细胞计数及反映血管内皮细胞功能的内皮素(ET)、一氧化氮(NO)变化作了观察，并对它们之间的关系作了探讨，现报道如下：
材料与方法
用Wister大鼠(雌雄不限)11只，体重180～255g，随机分为两组，高分子右旋糖酐组6只，生理盐水组5只，后者作对照用。实验前先测心电图，各导联均在正常范围内，然后从尾静脉缓慢注射10%高分子右旋糖酐(HMD，分子量40万)复制循环血中出现心肌损伤的模型[1]，剂量0.8ml/100gBW，每天一次，连续3天，第3天注射完毕后20分钟随访心电图，然后取血作血粘度、CEC、ET、NO检测。
, 百拇医药
观察测定指标的方法：
1 心电图： 用3%戊巴比妥钠液0.1ml/100gBW腹腔注射麻醉，仰卧位固定，用新银针作电极插入大鼠四肢皮下，以直流电作电源。每只鼠均记录Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ、avR、avL、avF导联心电图。
2 血粘度测定： 取动、静脉混合血2ml置于含3.8%枸橼酸钠溶液0.2ml的试管中混匀，用成都产NXE-Ⅰ型锥板式粘度计测定全血粘度。
3 循环血中内皮细胞计数： 取动、静脉混合血1.5ml，置于含3.8%枸橼酸钠溶液0.4ml的硅化玻璃试管中，用Percoll密度梯度快速一步分离法分离血中内皮细胞。将上述分离的上层和中层液分别置于血细胞计数池中，光学显微镜下计数，每一标本计数4次，取其均值为该层CEC数，再以上层和中层的均值为CEC计数结果。
4 血浆内皮素(ET)测定： 取股动、静脉混合血1ml，置于含10%EDTA二钠30ml和抑肽酶40μl的试管中，混匀，4℃3000rpm离心10min，分离血浆。用放免法测定血浆中ET。试剂盒由北京东亚技术研究所提供。
, 百拇医药
5 一氧化氮(NO)测定： 用苯乙烯二胺盐酸法测定。试剂盒由中国军事医学科学院放射医学研究所提供。
6 统计方法： 各项实验数据用
±s表示，进行t检验。结 果
1 心电图： 注射HMD后的大鼠心肌损伤，ST段抬高，与注射前及对照组比较差异显著，见表1。
表1 注射HMD前后心电图ST段抬高比较(
±s) 组 别例 数
实验前ST段上抬
, 百拇医药
实验后ST段上抬
P值
对照组
实验组
5
6
0.012±0.005mv
0.013±0.007mv
0.014±0.006mv
0.250±0.12mv
>0.05
<0.001
, 百拇医药
2 血粘度变化，见表2。表2 对照组与实验组的血粘度比较(
±s) 组 别例 数
230S-1
23S-1
9.6S-1
对照组
实验组
5
6
4.93±1.16
, 百拇医药
6.95±1.08*
6.13±0.60
10.20±1.87△
7.71±0.67
18.5±3.23△
与对照组比较 *P<0.05，△P<0.001
3 CEC、ET、NO测定结果，见表3。
表3 实验组与对照组的CEC、ET、NO比较(
±s) 组 别例 数
, http://www.100md.com
CEC(NO./0.9μl)
ET(ng/L)
NO(μmol/L)
对照组
实验组
5
6
5.33±2.34
13.70±7.82*
123.10±11.70
160.42±10.70△
, 百拇医药 4.08±0.44
3.46±0.3*
与对照组比较 *P<0.05，△P<0.001
讨 论
本文用HMD静脉注射大鼠尾静脉，造成微血管中微血栓形成，心肌受到损伤，ST段呈弓背样抬高或呈单向曲线，成功复制了心肌损伤的动物模型[1]。此时测得大鼠血粘度增高(P<0.05～0.001)；循环血中CEC明显增加；ET水平增高，NO水平降低(P<0.001，P<0.05)。这些结果均说明大鼠心肌损伤时不仅血粘度增高，而且还有内皮细胞的损伤使其脱落增加，同时伴有内皮细胞功能的明显障碍。ET和NO是血管内皮细胞分泌的血管活性物质。当血粘度增高时血流缓慢，血流的切应力降低，导致内皮细胞释放NO减少[2]，同时血管内皮细胞受损后由内皮细胞分泌的NO也会不同程度减少，双重因素均使NO水平明显低下。而ET则不同，当血粘度增高时血流缓慢，血流切应力降低，ET的生成和分泌增加。此外心肌损伤、缺氧或肾上腺素、血管紧张素水平增加时可损伤血管内皮细胞，使ET分泌增加[2]。以上两方面因素均可引起血管强烈收缩，血液瘀滞，反过来使血粘度增加。由此可见微循环障碍时，血粘度增加对微血管内皮细胞有一定损伤，其功能受到影响，使CEC增加、NO水平降低、ET水平增高，致使微血管强烈收缩。微血管收缩，又使血液瘀滞，血粘度增高。这表明血粘度增高与内皮细胞损伤相互影响，形成恶性循环，进一步加重微循环障碍。
, http://www.100md.com
* 贵州省科学技术基金资助项目(NO：1997，3057)
参考文献
1 金惠铭.静脉注射高分子右旋醣酐复制家兔急性微循环障碍模型的实验研究.中国急救医学.1987，2(3)：37
2 刘凝慧.内皮细胞功能与心血管张力的调节.微循环技术杂志.1994，2(4)：214
收稿： 1998-07-10 修回： 1998-09-11
中国微生态学杂志 2000年第4期第12卷 技术方法
高压液色谱用于肠通透性的测定
作者：邓高月 刘振邦 徐燕英 刘跃武 何桂珍
单位：邓高月 刘振邦(解放军305医院，北京100017)；徐燕英 刘跃武(中国医学科学院基础研究所仪器中心)；何桂珍(中国医学科学北京协和医院)
关键词：高压液相色谱；肠通透性., 百拇医药