原位末端标记(TUNEL)法、流式细胞仪PI法和PI、Annexin V双标记法检测细胞凋亡的比较
作者：田 涛 吴朝晖 金惠铭
单位： 200032 上海医科大学病理生理教研室
关键词：
中国微循环990207 【摘要】 目的 检测正常家兔血液流变学指标，建立其正常参考值，并对有关影响因素进行探讨。方法 采用NXE-1型锥板式粘度计。测定5.75S-1～307.2S-1七个切变率的血液表观粘度、血浆粘度、红细胞硬度指数(TK)、红细胞聚集指数(RAI)和氧释放系数(OD)。结果 雄性组家兔高切变率和低切变率下的血液粘度及RAI较雌性组明显增高(P<0.05和P<0.01)，而OD较雌性组明显降低(P<0.05)。高体重组家兔高、中、低各切变率下的血液粘度和红细胞压积(Hct)较低体重组明显增高(P<0.05和P<0.01)，而OD明显低于低体重组(P<0.05)。高Hct组家兔的血液粘度、OD较低Hct组明显增高(P均<0.01)，而血浆粘度和TK较低Hct组明显降低(P<0.05和P<0.01)。结论 家兔不同性别、体重和Hct，其血液流变学指标存在明显差异。
, 百拇医药
Study on Hemorrheological Parameters and Its Effective Factors in Healthy Rabbits
Liu Feng，Shi Zengli，Li Xiangyun，et al.
Binzhou Medical College，Binzhou 256603
【Abstract】 Objective To establish the normal reference ranges of hemorrheological parameters and explore its effective factors in healthy rabbits.Methods Apparent viscosity of blood、plasma viscosity、red blood cell aggregation index(RAI)、red blood cell rigidness index(TK) and oxygen diffusion index(OD) were measured using NXE-1 type cone-plate viscometer.Results The low and high shear rate apparent viscosity of blood、RAI of male rabbits group were increased and OD were deceased compared with female rabbits group.The apparent viscosity of blood in low、middle and high shear rate and hematocrit were increased and OD were decreased in high body weight rabbits group compared with low body weight rabbits group.Apparent viscosity of blood and OD were increased and plasma viscosity and TK were decreased in high hematocrit rabbits group compared with low hematocrit rabbits group.Conclusions Hemorrheological parameters have obvious difference in rabbits of different sex、body weight and hematocrit.
, 百拇医药
【Key words】 Hemorrheology Rabbit
血液流变学研究在生理、病理生理和临床医学领域已被广泛应用[1，2]。该研究常需复制疾病模型。家兔因其取血方便、结果稳定而被经常采用。我室采用NXE-1型锥板式粘度计对132只正常家兔血液流变学指标进行了检测，以期建立其正常参考值。并对有关影响因素进行分析。现报道如下。
材料与方法
1 实验动物； 健康青紫兰家兔132只，雌性61只，雄性71只。体重1.50～3.00kg，平均2.10kg。其中≤2.00kg(1.50～2.00)67只，>2.00kg(2.05～3.00)65只。稳定正常饮食7天，于实验前10小时禁食。
2 实验方法： 用9号针头由颈外静脉取血6毫升，肝素(10μ/ml 全血)干管抗凝。(1) 血液表观粘度测定： 用NXE-1型锥板式粘度计在25±0.1℃恒温条件下，测定307.2S-1、230S-1、115S-1、46S-1、23S-1、11.5S-1、5.75S-1切变率下的血液表观粘度，每标本剪切时间小于3分钟，取血后4小时内完成。(2) 血浆粘度测定： 将全血以3000转/分离心30分钟，分离血浆，在230S-1切变率下测定血浆粘度。(3) 用温氏分血管测定红细胞压积(Hct)。(4) 根据Dintenfass[3]和Chien[4]等方法计算红细胞硬度指数(TK)、红细胞聚集指数(RAI)和氧释放系数(OD)。
, 百拇医药
3 统计学处理： 用PEMS软件计算家兔各血液流变学指标的均数(
±s)，不同性别、体重和Hct组间行t检验，不同切变率下的血液表观粘度、血浆粘度及其它指标间行直线相关分析，显著性检验水准a=0.05。
结 果
不同性别、体重和Hct家兔血液流变学指标比较结果见表1和表2。
表1 正常家兔不同性别、体重和红细胞压积血液表观粘度测定值(±s) 切 变 率
正 常 值
性 别
体 重(kg)
, 百拇医药
Hct(%)
雌 性
(n=61)
雄 性
(n=71)
≤2.0
(n=67)
>2.0
(n=65)
<42
(n=65)
≥42
(n=67)
, 百拇医药
307.2S-1
230.0S-1
115.0S-1
46.0S-1
23.0S-1
11.5S-1
5.75S-1
4.67± 0.63
4.86±0.67
5.45±0.86
, 百拇医药
6.60±1.46
7.88±1.86
9.35±2.46
11.5±3.49
4.57±0.50
4.73±0.53
5.22±0.92
6.46±1.14
7.66±1.72
8.98±2.34
10.73±3.18
4.75±0.71*
, 百拇医药
4.98±0.75*
5.60±0.95*
6.72±1.68
8.06±1.98
9.55±2.74
12.16±3.62**
4.53±0.56
4.69±0.58
5.24±0.76
6.34±1.15
7.48±1.60
, 百拇医药
8.85±2.12
10.79±2.99
4.75±0.88*
5.05±0.70**
5.65±0.90**
6.97±1.48**
8.27±2.05**
9.82±2.72*
12.18±3.82*
4.42±0.53
, 百拇医药
4.60±0.54
5.09±0.66
6.07±0.92
7.10±1.30
8.26±1.75
10.46±3.01
4.92±0.63**
5.15±0.68**
5.79±0.90**
7.18±1.49**
, http://www.100md.com 8.50±2.63**
10.33±2.64**
12.52±3.64**
注： 不同性别、体重、Hct间比较 *P<0.05；**P<0.01表2 正常家兔不同性别、体重和红细胞压积血浆粘度等指标测定值(±s)
正 常 值
体 重(kg)
性 别
Hct(%)
≤2.0
, 百拇医药
(n=67)
>2.0
(n=65)
雌 性
(n=61)
雄 性
(n=71)
<42
(n=65)
≥42
(n=67)
血浆粘度
TK
, 百拇医药
RAI
OD
Hct
1.69±0.20
0.83±0.10
1.70±0.42
8.55±0.90
41.38±4.59
1.66±0.16
0.83±0.08
1.71±0.37
8.69±0.91
, 百拇医药
40.68±4.37
1.71±0.19
0.83±0.11
1.74±0.38
8.42±0.88*
42.08±4.74*
1.70±0.22
0.83±0.08
1.65±0.32
8.75±0.83
41.2±4.30
, http://www.100md.com
1.71±0.21
0.83±0.10
1.77±0.43*
8.38±0.92*
41.51±4.77
1.72±0.17
0.85±0.10
1.72±0.37
8.21±0.80
1.65±0.18*
0.81±0.07**
, 百拇医药
1.75±0.37
8.87±0.87**
注： 不同性别、体重、Hct间比较 *P<0.05；**
1 雄性组家兔高切变率和低切变率下的血液表观粘度以及RAI明显高于雌性组，而OD明显低于雌性组。
2 >2.00kg体重组(简称高体重组)家兔高、中、低切变率的血液表观粘度和Hct较≤2.00kg体重组(称低体重组)明显增高，而OD明显低于低体重组。高体重组家兔的血浆粘度和RAI也较低体重组有所增高，但无统计学意义。体重与高、中、低切变率的血液表观粘度、Hct呈显著正相关(r为0.3012，0.3600，0.3405，0.2459；P分别<0.01和0.05)。
3 根据家兔的Hct不同将其分为两组，即<42%者为低Hct组，共65只；≥42%者为高Hct组，共67只。高Hct组高、中、低切变率的血液表观粘度和OD值较低Hct组明显增高，而血浆粘度和TK值较低Hct组明显降低。高Hct组的RAI较低Hct组有所增加，但无统计学意义。Hct与高、中、低切变率的血液表观粘度、OD值呈显著正相关(r为0.4202，0.5664，0.6131，0.2729；P分别<0.01和0.05)；Hct与TK值呈显著负相关(r=-0.4500；P<0.01)。OD值与TK值及不同切变率的血液表观粘度呈显著负相关(r为-0.5533，-0.3014，-0.4255，-0.4757；P均<0.01)。RAI与低切变率下的血液表观粘度呈显著正相关(r=0.7032；P<0.01)。
, 百拇医药
讨 论
生命的维持与血液流动是分不开的，机体的生理功能和防御功能都必须依赖于正常的血液流变状态，以满足机体氧和营养物质的需要。血液流变状态除与某些疾病有关外，还取决于血液本身的流变性质。血液是一种由血细胞悬浮于血浆的胶体溶液，属非牛顿液体。血浆是由各种成分组成的胶体溶液，血浆成分的变化可以影响到血细胞的流态，血细胞的流态对血液粘度起重要作用。红细胞聚集性增强是全血粘度增高的重要原因之一。本研究发现雄性组家兔高切变率和低切变率下的全血粘度明显高于雌性组。这可能与红细胞的聚集性增强及雄性激素的作用等有关。雄性组家兔的氧释放能力则较雌性组明显降低。可能是由于全血粘度增高、血流阻力加大，而造成氧释障碍。相关分析表明，OD与血液粘度呈显著负相关关系，也支持上述观点。本文还发现高体重组家兔血液表观粘度和Hct明显高于低体重组，而氧释放能力较低体重组明显降低。表明家兔体重对血液流变学指标有一定影响，因此在采用家兔作血液流变学研究时，应注意体重的选择。Hct是影响全血粘度的另一重要原因，血液粘度随Hct增高而呈指数增长[5]。本文高Hct组家兔不同切变率的血液粘度明显高于低Hct组，Hct与高、中、低切变率的血液粘度呈显著正相关，表明Hct确与血液粘度有密切关系。Chien[6]研究发现红细胞变形随红细胞浓度增高而增强，其原因是红细胞浓度增加引起细胞之间局部切变率增加，而使变形性增强。本研究高Hct组家兔的红细胞变形性较低Hct组明显增强，相关分析也证实Hct与TK有显著负相关关系。此结果与Chien报道一致。
, http://www.100md.com
本实验结果表明，不同性别、不同体重和不同Hct的家兔，其血液流变学指标存在明显差异。因此，在复制家兔疾病模型时，要注意上述因素对血液流变学实验结果的影响，以确保实验结果的准确性和可重复性。
参考文献
1 杨桂通，岑人经主编.生物力学研究和应用.广州： 华南理工大学出版社.1990，339～342
2 Schneditz D.Viscoelastic properties of whole blood.Influence of fast sedimenting red blood cell aggregates.Biorheology.1987，24：13
3 Dintenfass L，Kammer S.Re-evalation of heart precipitation method for plasma fibrinogen estimation： effect of abnormal protein and plasma and viscosity.J.Clin.Path.1976，29：130
, 百拇医药
4 Chien S.Hemorrheology in disease：Pathophysiological significance and therapeutic implications.Clinical hemorrheology.1981，1：419
5 陈文杰主编.血液流变学.天津： 科学技术出版社.1988，53
6 Chien S.Principles and techniques for assessing erythrocyte deformability.Blood cells.1977，3：71
收稿： 1998-06-18 修回： 1998-12-22, 百拇医药
单位： 200032 上海医科大学病理生理教研室
关键词：
中国微循环990207 【摘要】 目的 检测正常家兔血液流变学指标，建立其正常参考值，并对有关影响因素进行探讨。方法 采用NXE-1型锥板式粘度计。测定5.75S-1～307.2S-1七个切变率的血液表观粘度、血浆粘度、红细胞硬度指数(TK)、红细胞聚集指数(RAI)和氧释放系数(OD)。结果 雄性组家兔高切变率和低切变率下的血液粘度及RAI较雌性组明显增高(P<0.05和P<0.01)，而OD较雌性组明显降低(P<0.05)。高体重组家兔高、中、低各切变率下的血液粘度和红细胞压积(Hct)较低体重组明显增高(P<0.05和P<0.01)，而OD明显低于低体重组(P<0.05)。高Hct组家兔的血液粘度、OD较低Hct组明显增高(P均<0.01)，而血浆粘度和TK较低Hct组明显降低(P<0.05和P<0.01)。结论 家兔不同性别、体重和Hct，其血液流变学指标存在明显差异。
, 百拇医药
Study on Hemorrheological Parameters and Its Effective Factors in Healthy Rabbits
Liu Feng，Shi Zengli，Li Xiangyun，et al.
Binzhou Medical College，Binzhou 256603
【Abstract】 Objective To establish the normal reference ranges of hemorrheological parameters and explore its effective factors in healthy rabbits.Methods Apparent viscosity of blood、plasma viscosity、red blood cell aggregation index(RAI)、red blood cell rigidness index(TK) and oxygen diffusion index(OD) were measured using NXE-1 type cone-plate viscometer.Results The low and high shear rate apparent viscosity of blood、RAI of male rabbits group were increased and OD were deceased compared with female rabbits group.The apparent viscosity of blood in low、middle and high shear rate and hematocrit were increased and OD were decreased in high body weight rabbits group compared with low body weight rabbits group.Apparent viscosity of blood and OD were increased and plasma viscosity and TK were decreased in high hematocrit rabbits group compared with low hematocrit rabbits group.Conclusions Hemorrheological parameters have obvious difference in rabbits of different sex、body weight and hematocrit.
, 百拇医药
【Key words】 Hemorrheology Rabbit
血液流变学研究在生理、病理生理和临床医学领域已被广泛应用[1，2]。该研究常需复制疾病模型。家兔因其取血方便、结果稳定而被经常采用。我室采用NXE-1型锥板式粘度计对132只正常家兔血液流变学指标进行了检测，以期建立其正常参考值。并对有关影响因素进行分析。现报道如下。
材料与方法
1 实验动物； 健康青紫兰家兔132只，雌性61只，雄性71只。体重1.50～3.00kg，平均2.10kg。其中≤2.00kg(1.50～2.00)67只，>2.00kg(2.05～3.00)65只。稳定正常饮食7天，于实验前10小时禁食。
2 实验方法： 用9号针头由颈外静脉取血6毫升，肝素(10μ/ml 全血)干管抗凝。(1) 血液表观粘度测定： 用NXE-1型锥板式粘度计在25±0.1℃恒温条件下，测定307.2S-1、230S-1、115S-1、46S-1、23S-1、11.5S-1、5.75S-1切变率下的血液表观粘度，每标本剪切时间小于3分钟，取血后4小时内完成。(2) 血浆粘度测定： 将全血以3000转/分离心30分钟，分离血浆，在230S-1切变率下测定血浆粘度。(3) 用温氏分血管测定红细胞压积(Hct)。(4) 根据Dintenfass[3]和Chien[4]等方法计算红细胞硬度指数(TK)、红细胞聚集指数(RAI)和氧释放系数(OD)。
, 百拇医药
3 统计学处理： 用PEMS软件计算家兔各血液流变学指标的均数(
±s)，不同性别、体重和Hct组间行t检验，不同切变率下的血液表观粘度、血浆粘度及其它指标间行直线相关分析，显著性检验水准a=0.05。结 果
不同性别、体重和Hct家兔血液流变学指标比较结果见表1和表2。
表1 正常家兔不同性别、体重和红细胞压积血液表观粘度测定值(
±s) 切 变 率正 常 值
性 别
体 重(kg)
, 百拇医药
Hct(%)
雌 性
(n=61)
雄 性
(n=71)
≤2.0
(n=67)
>2.0
(n=65)
<42
(n=65)
≥42
(n=67)
, 百拇医药
307.2S-1
230.0S-1
115.0S-1
46.0S-1
23.0S-1
11.5S-1
5.75S-1
4.67± 0.63
4.86±0.67
5.45±0.86
, 百拇医药
6.60±1.46
7.88±1.86
9.35±2.46
11.5±3.49
4.57±0.50
4.73±0.53
5.22±0.92
6.46±1.14
7.66±1.72
8.98±2.34
10.73±3.18
4.75±0.71*
, 百拇医药
4.98±0.75*
5.60±0.95*
6.72±1.68
8.06±1.98
9.55±2.74
12.16±3.62**
4.53±0.56
4.69±0.58
5.24±0.76
6.34±1.15
7.48±1.60
, 百拇医药
8.85±2.12
10.79±2.99
4.75±0.88*
5.05±0.70**
5.65±0.90**
6.97±1.48**
8.27±2.05**
9.82±2.72*
12.18±3.82*
4.42±0.53
, 百拇医药
4.60±0.54
5.09±0.66
6.07±0.92
7.10±1.30
8.26±1.75
10.46±3.01
4.92±0.63**
5.15±0.68**
5.79±0.90**
7.18±1.49**
, http://www.100md.com 8.50±2.63**
10.33±2.64**
12.52±3.64**
注： 不同性别、体重、Hct间比较 *P<0.05；**P<0.01表2 正常家兔不同性别、体重和红细胞压积血浆粘度等指标测定值(
±s)正 常 值
体 重(kg)
性 别
Hct(%)
≤2.0
, 百拇医药
(n=67)
>2.0
(n=65)
雌 性
(n=61)
雄 性
(n=71)
<42
(n=65)
≥42
(n=67)
血浆粘度
TK
, 百拇医药
RAI
OD
Hct
1.69±0.20
0.83±0.10
1.70±0.42
8.55±0.90
41.38±4.59
1.66±0.16
0.83±0.08
1.71±0.37
8.69±0.91
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40.68±4.37
1.71±0.19
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1.74±0.38
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, http://www.100md.com
1.71±0.21
0.83±0.10
1.77±0.43*
8.38±0.92*
41.51±4.77
1.72±0.17
0.85±0.10
1.72±0.37
8.21±0.80
1.65±0.18*
0.81±0.07**
, 百拇医药
1.75±0.37
8.87±0.87**
注： 不同性别、体重、Hct间比较 *P<0.05；**
1 雄性组家兔高切变率和低切变率下的血液表观粘度以及RAI明显高于雌性组，而OD明显低于雌性组。
2 >2.00kg体重组(简称高体重组)家兔高、中、低切变率的血液表观粘度和Hct较≤2.00kg体重组(称低体重组)明显增高，而OD明显低于低体重组。高体重组家兔的血浆粘度和RAI也较低体重组有所增高，但无统计学意义。体重与高、中、低切变率的血液表观粘度、Hct呈显著正相关(r为0.3012，0.3600，0.3405，0.2459；P分别<0.01和0.05)。
3 根据家兔的Hct不同将其分为两组，即<42%者为低Hct组，共65只；≥42%者为高Hct组，共67只。高Hct组高、中、低切变率的血液表观粘度和OD值较低Hct组明显增高，而血浆粘度和TK值较低Hct组明显降低。高Hct组的RAI较低Hct组有所增加，但无统计学意义。Hct与高、中、低切变率的血液表观粘度、OD值呈显著正相关(r为0.4202，0.5664，0.6131，0.2729；P分别<0.01和0.05)；Hct与TK值呈显著负相关(r=-0.4500；P<0.01)。OD值与TK值及不同切变率的血液表观粘度呈显著负相关(r为-0.5533，-0.3014，-0.4255，-0.4757；P均<0.01)。RAI与低切变率下的血液表观粘度呈显著正相关(r=0.7032；P<0.01)。
, 百拇医药
讨 论
生命的维持与血液流动是分不开的，机体的生理功能和防御功能都必须依赖于正常的血液流变状态，以满足机体氧和营养物质的需要。血液流变状态除与某些疾病有关外，还取决于血液本身的流变性质。血液是一种由血细胞悬浮于血浆的胶体溶液，属非牛顿液体。血浆是由各种成分组成的胶体溶液，血浆成分的变化可以影响到血细胞的流态，血细胞的流态对血液粘度起重要作用。红细胞聚集性增强是全血粘度增高的重要原因之一。本研究发现雄性组家兔高切变率和低切变率下的全血粘度明显高于雌性组。这可能与红细胞的聚集性增强及雄性激素的作用等有关。雄性组家兔的氧释放能力则较雌性组明显降低。可能是由于全血粘度增高、血流阻力加大，而造成氧释障碍。相关分析表明，OD与血液粘度呈显著负相关关系，也支持上述观点。本文还发现高体重组家兔血液表观粘度和Hct明显高于低体重组，而氧释放能力较低体重组明显降低。表明家兔体重对血液流变学指标有一定影响，因此在采用家兔作血液流变学研究时，应注意体重的选择。Hct是影响全血粘度的另一重要原因，血液粘度随Hct增高而呈指数增长[5]。本文高Hct组家兔不同切变率的血液粘度明显高于低Hct组，Hct与高、中、低切变率的血液粘度呈显著正相关，表明Hct确与血液粘度有密切关系。Chien[6]研究发现红细胞变形随红细胞浓度增高而增强，其原因是红细胞浓度增加引起细胞之间局部切变率增加，而使变形性增强。本研究高Hct组家兔的红细胞变形性较低Hct组明显增强，相关分析也证实Hct与TK有显著负相关关系。此结果与Chien报道一致。
, http://www.100md.com
本实验结果表明，不同性别、不同体重和不同Hct的家兔，其血液流变学指标存在明显差异。因此，在复制家兔疾病模型时，要注意上述因素对血液流变学实验结果的影响，以确保实验结果的准确性和可重复性。
参考文献
1 杨桂通，岑人经主编.生物力学研究和应用.广州： 华南理工大学出版社.1990，339～342
2 Schneditz D.Viscoelastic properties of whole blood.Influence of fast sedimenting red blood cell aggregates.Biorheology.1987，24：13
3 Dintenfass L，Kammer S.Re-evalation of heart precipitation method for plasma fibrinogen estimation： effect of abnormal protein and plasma and viscosity.J.Clin.Path.1976，29：130
, 百拇医药
4 Chien S.Hemorrheology in disease：Pathophysiological significance and therapeutic implications.Clinical hemorrheology.1981，1：419
5 陈文杰主编.血液流变学.天津： 科学技术出版社.1988，53
6 Chien S.Principles and techniques for assessing erythrocyte deformability.Blood cells.1977，3：71
收稿： 1998-06-18 修回： 1998-12-22, 百拇医药