用SRID法检测结核性胸水中活动性结核标记物的意义
作者：耿志华 祝 扬 罗畅民 邓松华
单位：安徽医科大学附属医院药剂科， 安徽 合肥 230022
关键词：PCR；活动性结核标记物
疾病控制杂志990219
【摘要】 目的 用单向免疫扩散法(SRID)检测结核性胸腔积液中活动性结核标记物(ATM)并探讨其临床应用价值。方法 使用多聚酶链反应技术(PCR)和SRID法对42例患者结核性胸水中结核杆菌DNA和ATM检测，并将二者加以比较。结果 PCR法和SRID法在诊断结核性胸水方面，二者均具较高敏感性，阳性率分别为69.1%和64.3%，假阳性率PCR法大于SRID法。结论 用SRID法检测ATM诊断结核性胸水快速、简便、费用低廉，较之PCR法具有较大实用性。
【中图分类号】 R378.91； R446.61 【文献标识码】 A 【文章编号】 1008-6013(1999)02-0113-02
, http://www.100md.com
Detection of active tuberclosis marker in tuberculotic serothorax with SRID technique and its significance
GEN Zhi-hua, ZHU Yang, LUO Chang-ming, DENG Song-hua.
Affilicated Hospital of Anhui Medical University, Hefei 230022, China
【Abstract】 Objective To detect active tuberculosis marker(ATM) in tuberculotic serothorax and the clinical value. Methods Tuberculosis bacteria DNA and ATM were detected with PCR and SRID and the two methods compared. Results The two methods showed higher sensitivity in detecting tuberculosis serothrax. The positive rate was 69.1% and 64.3% respectively but false positive rate of PCR was higher than that of SRID. Conclusion Detection of plearisy of tuberculosis with ATM is quicker convenient and cheaper if compared with PCR.
, 百拇医药
【Key words】 PCR; active tuberculosis mark tuberculotic serothorax
传统诊断结核性胸腔积液主要依据临床表现，X线检查、细菌培养等手段，这些方法特异性差，敏感性低，80年代中后期建立的用PCR技术检测结核杆菌的DNA片段，大大提高了诊断的敏感性，取得了较为满意的结果[1，2]。本室使用单向免疫扩散(SRID)法检测结核性胸水中活动性结核标记物(ATM)，并将其和PCR法进行比较，以验证其敏感性和特异性，现将结果报道如下。
1 材料与方法
1.1 标本来源 结核性胸腔积液组42例，其中男性30例，女性12例，平均年龄42.5岁。非结性胸腔积液组16例，其中癌性胸水14例，心功能不全渗出液2例，以上病例均经临床确诊，经严格消毒取标本。
, 百拇医药 1.2 SRID法 按胡娟等[3]报道方法进行，用试剂盒(成都军区生物医学研究所提供)中反应原制成凝胶板打孔，于孔中加入即时待测血清10 μl，置37℃湿度饱和环境下平行扩散16 h，再经0.145 mol。L-1 NaCl漂洗，待干燥后以白染料着色，以标准色板为对照判断结果，反应原与血清中ATM结合而形成沉淀环，环径>3.5 mm为阳性。
PCR试剂盒源自上海复华公司生物技术中心，取15 μl胸水标本处理液、15 μl反应液、2 μl DNA-Polymerase，混合后中加20 μl液体石蜡，按步骤在PCR仪(西安新骊电子有限公司，XLP-100 DNA扩增仪)扩增，取15 μl产物与1 μl溴酚蓝混合，电泳后暗室中用紫外透射仪检测，以阳性对照为标准判断结果。
1.3 统计方法 采用卡方检验和直接计算概率法。
2 结果
, 百拇医药
42例结核性胸水者同时做PCR-TB-DNA和SRID-ATM测定，阳性率分别为69.1%和64.3%，二者敏感性差异无显著性(P>0.05)，另16例非结核性胸水组，PCR假阳性率为18%，SRID假阳性率为6%，二者差异无显著性(P>0.05)(表1)。
表1 PCR、SRID法检测胸腔积液的比较 项目
结核性胸水
非结核性胸水
n
阳性数(%)
n
阳性数(%)
PCR
, http://www.100md.com
42
29(69.1)
16
2(12.5)
ATM
42
27(64.3)
16
1(6.2)
3 讨论
结核性胸水中结核菌阳性率甚低，PPD皮试诊断价值亦不理想，结核抗体阳性率较高，但特异性差，且出现较晚，不宜于结胸的早期诊断， PCR为病原学诊断，有确诊意义。本文结核性胸水PCR-TB-DNA阳性率为69.1%，与肖志坚报道(69%)基本一致[4]。活动性结核标记物是近年来发现的一类蛋白生物素物质，存在于结核病患者各器官系统的体液中，在疾病的活动期可被检出，其含量与疾病的轻重呈正比[5]。本文结果显示，PCR法和SRID法诊断结核性胸水均具较高的阳性率，二者差别无显著性(χ2=0.21，P>0.05)，特异性较令人满意。非结核性胸水组，PCR假阳性2例(13%)，SRID假阳性1例(为癌性胸水者)，虽差别无显著性，但PCR检测结核假阳性率明显高于SRID 法，可能因为就PCR技术本身而言仍存在着扩增子携带污染以及因序列交叉和菌株异质性引起的假阳性增高[5]，亦有可能该肺癌患者同时潜在结核菌感染。就方法而言，SRID检测ATM简便、快速，且设备投入、试剂费用远较PCR低廉，适合于一般医院应用和大批人群普查。我们认为，以胸水作为早期诊断结核性胸膜炎方面，用SRID法测定活动性结核标记物 PCR法更为便利实用，值得进一步推广。
, 百拇医药
作者简介：耿志华，女，48岁，副主任药师 邓松华，男，46岁，硕士，教授
参考文献
[1] Kath LD. Polymerase chain reaction. Amplification of a repectrve DNA sequence specifrc for mycobacterium tubercalosis. J Infect Dis，1990，161:977.
[2] 胡 娟. SRID法检测活动性结核标记物的应用探讨. 现代预防医学，1993，21(4)：52.
[3] 胡 娟. SRID检测结核抗体技术的临床应用.中华结核和呼吸杂志，1993，16(5)：1～2.
[4] 肖志坚，崔秀琴，肖志敏，等. 聚合酶链反应早期诊断结核性胸膜炎的临床价值. 中华结核和呼吸杂志，1995，18(4)：196.
[5] 潘毓莹. 聚合酶链技术在结核病临床诊断中的应用及存在问题.中华结核和呼吸杂志，1995，18(4)：197.
收稿日期 1999-05-18, http://www.100md.com
单位：安徽医科大学附属医院药剂科， 安徽 合肥 230022
关键词：PCR；活动性结核标记物
疾病控制杂志990219
【摘要】 目的 用单向免疫扩散法(SRID)检测结核性胸腔积液中活动性结核标记物(ATM)并探讨其临床应用价值。方法 使用多聚酶链反应技术(PCR)和SRID法对42例患者结核性胸水中结核杆菌DNA和ATM检测，并将二者加以比较。结果 PCR法和SRID法在诊断结核性胸水方面，二者均具较高敏感性，阳性率分别为69.1%和64.3%，假阳性率PCR法大于SRID法。结论 用SRID法检测ATM诊断结核性胸水快速、简便、费用低廉，较之PCR法具有较大实用性。
【中图分类号】 R378.91； R446.61 【文献标识码】 A 【文章编号】 1008-6013(1999)02-0113-02
, http://www.100md.com
Detection of active tuberclosis marker in tuberculotic serothorax with SRID technique and its significance
GEN Zhi-hua, ZHU Yang, LUO Chang-ming, DENG Song-hua.
Affilicated Hospital of Anhui Medical University, Hefei 230022, China
【Abstract】 Objective To detect active tuberculosis marker(ATM) in tuberculotic serothorax and the clinical value. Methods Tuberculosis bacteria DNA and ATM were detected with PCR and SRID and the two methods compared. Results The two methods showed higher sensitivity in detecting tuberculosis serothrax. The positive rate was 69.1% and 64.3% respectively but false positive rate of PCR was higher than that of SRID. Conclusion Detection of plearisy of tuberculosis with ATM is quicker convenient and cheaper if compared with PCR.
, 百拇医药
【Key words】 PCR; active tuberculosis mark tuberculotic serothorax
传统诊断结核性胸腔积液主要依据临床表现，X线检查、细菌培养等手段，这些方法特异性差，敏感性低，80年代中后期建立的用PCR技术检测结核杆菌的DNA片段，大大提高了诊断的敏感性，取得了较为满意的结果[1，2]。本室使用单向免疫扩散(SRID)法检测结核性胸水中活动性结核标记物(ATM)，并将其和PCR法进行比较，以验证其敏感性和特异性，现将结果报道如下。
1 材料与方法
1.1 标本来源 结核性胸腔积液组42例，其中男性30例，女性12例，平均年龄42.5岁。非结性胸腔积液组16例，其中癌性胸水14例，心功能不全渗出液2例，以上病例均经临床确诊，经严格消毒取标本。
, 百拇医药 1.2 SRID法 按胡娟等[3]报道方法进行，用试剂盒(成都军区生物医学研究所提供)中反应原制成凝胶板打孔，于孔中加入即时待测血清10 μl，置37℃湿度饱和环境下平行扩散16 h，再经0.145 mol。L-1 NaCl漂洗，待干燥后以白染料着色，以标准色板为对照判断结果，反应原与血清中ATM结合而形成沉淀环，环径>3.5 mm为阳性。
PCR试剂盒源自上海复华公司生物技术中心，取15 μl胸水标本处理液、15 μl反应液、2 μl DNA-Polymerase，混合后中加20 μl液体石蜡，按步骤在PCR仪(西安新骊电子有限公司，XLP-100 DNA扩增仪)扩增，取15 μl产物与1 μl溴酚蓝混合，电泳后暗室中用紫外透射仪检测，以阳性对照为标准判断结果。
1.3 统计方法 采用卡方检验和直接计算概率法。
2 结果
, 百拇医药
42例结核性胸水者同时做PCR-TB-DNA和SRID-ATM测定，阳性率分别为69.1%和64.3%，二者敏感性差异无显著性(P>0.05)，另16例非结核性胸水组，PCR假阳性率为18%，SRID假阳性率为6%，二者差异无显著性(P>0.05)(表1)。
表1 PCR、SRID法检测胸腔积液的比较 项目
结核性胸水
非结核性胸水
n
阳性数(%)
n
阳性数(%)
PCR
, http://www.100md.com
42
29(69.1)
16
2(12.5)
ATM
42
27(64.3)
16
1(6.2)
3 讨论
结核性胸水中结核菌阳性率甚低，PPD皮试诊断价值亦不理想，结核抗体阳性率较高，但特异性差，且出现较晚，不宜于结胸的早期诊断， PCR为病原学诊断，有确诊意义。本文结核性胸水PCR-TB-DNA阳性率为69.1%，与肖志坚报道(69%)基本一致[4]。活动性结核标记物是近年来发现的一类蛋白生物素物质，存在于结核病患者各器官系统的体液中，在疾病的活动期可被检出，其含量与疾病的轻重呈正比[5]。本文结果显示，PCR法和SRID法诊断结核性胸水均具较高的阳性率，二者差别无显著性(χ2=0.21，P>0.05)，特异性较令人满意。非结核性胸水组，PCR假阳性2例(13%)，SRID假阳性1例(为癌性胸水者)，虽差别无显著性，但PCR检测结核假阳性率明显高于SRID 法，可能因为就PCR技术本身而言仍存在着扩增子携带污染以及因序列交叉和菌株异质性引起的假阳性增高[5]，亦有可能该肺癌患者同时潜在结核菌感染。就方法而言，SRID检测ATM简便、快速，且设备投入、试剂费用远较PCR低廉，适合于一般医院应用和大批人群普查。我们认为，以胸水作为早期诊断结核性胸膜炎方面，用SRID法测定活动性结核标记物 PCR法更为便利实用，值得进一步推广。
, 百拇医药
作者简介：耿志华，女，48岁，副主任药师 邓松华，男，46岁，硕士，教授
参考文献
[1] Kath LD. Polymerase chain reaction. Amplification of a repectrve DNA sequence specifrc for mycobacterium tubercalosis. J Infect Dis，1990，161:977.
[2] 胡 娟. SRID法检测活动性结核标记物的应用探讨. 现代预防医学，1993，21(4)：52.
[3] 胡 娟. SRID检测结核抗体技术的临床应用.中华结核和呼吸杂志，1993，16(5)：1～2.
[4] 肖志坚，崔秀琴，肖志敏，等. 聚合酶链反应早期诊断结核性胸膜炎的临床价值. 中华结核和呼吸杂志，1995，18(4)：196.
[5] 潘毓莹. 聚合酶链技术在结核病临床诊断中的应用及存在问题.中华结核和呼吸杂志，1995，18(4)：197.
收稿日期 1999-05-18, http://www.100md.com