μ-cell法测定农药对男性精子机能影响的分析
作者：刘 学 李贤相 江隆久 卜新柱 徐恒秋 徐希平
单位：
刘 学 李贤相 江隆久 卜新柱 徐恒秋 徐希平 安徽美中生物医学环境卫生研究所， 安徽 安庆 246001；徐希平 安徽医科大学生物医学研究所， 安徽 合肥 230032
关键词：农药；精子；μ-cell测定方法
疾病控制杂志990205
【摘要】 目的 研究农药对生育生殖的影响。方法 采用μ-cell测定方法。结果 暴露组精子的质量与数量都受到了影响，均呈下降趋势。结论 长期暴露于农药污染，可能引起生育生殖功能的下降。
【中图分类号】 S482； R339.21； R446 【文献标识码】 A 【文章编号】1008-6013(1999)02-0084-02
, http://www.100md.com
The effects of pesticide on sperm by μ-cell method
LIU Xue，LI Xian-xiang，JIANG Long-jiu，BU Xing-zhu，XU Heng-qiu， XU Xi-ping.
Anhui Meizhong Biomedical and Environmental Health Research Institute，Anqing 246001，China
【Abstract】 Objective To study the effect of pesticides on reproduction. Method We collected the data of sperm with μ-cell measure method. Result The quality and number of the sperm declined in the exposure group. Conclusions The pesticide pollution can damage the function of reproductive system.
, 百拇医药
【Key words】 pesticide; sperm; μ-cell method
众多动物实验证明，诸多农药，特别是有机磷农药可使雄性哺乳动物的精子数量减少，活动能力下降，畸形率增加等[1]。但有关男性长期慢性接触有机磷农药对精子机能影响的报道甚少，为了阐明农药对男性精子机能的影响，本文运用μ-cell法进行了农药对精子机能影响的初步探讨。
1 材料与方法
1. 1 精子稀释液(DPBS) 美国加州大学Davis生殖医学研究中心提供。
1.2 对象选择 选择农药厂的工人20人组成暴露组，年龄20～49岁(31.0±9.9)；毛毯厂的工人23人作为对照组，年龄21～47岁(30.0±7.9)。
1.3 检测方法 采用国际先进的μ-cell精子计数法(以美国加州大学生殖医学研究中心Semen Evaluation Protocols为蓝本)对精子机能进行评价。主要指标有：精液量、液化时间、pH值、粘性、精子活动度、密度、活率、凝集性及形态学的检查，精子密度公式：
, http://www.100md.com
1.4 资料分析 使用SAS6.0软件包在586微机上进行数据统计分析。
2 质控措施
2.1 培训 由美国加州大学生殖医学研究中心有经验的工作人员，对精液分析人员进行培训，通过双盲法考核者方可参与课题研究。
2.2 精液分析 在精液分析过程中，对每份样品均进行平行样品检测，特别是测定精子活率及密度时，每份样品均计算检测结果之间的差异(D值)；若D≤15%，取二次结果的均值；若D>15%，则进行第三次测定，取三次结果的中间值做为报告最终测定结果。D值计算公式：
2.3 grid的校正 因grid受环境因素影响较大，试验前位于目镜内的grid运用国际标准的测微尺(micrometer)对其进行校准，且计算出其系数(factor)，公式如下：
, 百拇医药
factor=E×E×20×10-6
式中：E=用测微尺实际测得grid的宽度
20=μ-cell计数板的池深(μm)
3 结果与讨论
3.1 结果 暴露组精子的活率、密度，总数明显低于对照组；暴露组的精液量和精子活动度也低于对照组，但无统计学意义(表1)；液化时间>30 min者暴露组为30%，对照组为4.3%；凝集现象，暴露组为5.0%，对照组为8.6%；pH值两组均值分别为7.3和7.1；这些指标在两组之间的差异无显著性意义。
表1 暴露组和对照组精液分析结果比较(
±s) 组别
, 百拇医药 n
量(ml)
活率(%)
活动度(级)
精子密度
(×106/ml)
总数
(×106)
暴露组
20
2.6±1.1
47.9±15.6*
2.2±0.5
, http://www.100md.com
42.9±22.4**
112.9±82.9**
对照组
23
3.0±1.5
57.6±14.2
2.5±0.5
74.5±43.6
220.2±157.0
与对照组比较，*P<0.05； **P<0.01
暴露组20人的正常形态精子百分率低于对照组，差异具有显著性。在畸形分类中，暴露组小头、尾部、颈体、混合畸形明显高于对照组(表2)。
, http://www.100md.com
表2 暴露组与对照组工人精子形态(%)比较(±s) 组别
n
正 常
头部无定形
大头
小头
长头
双头
头部正常
其他异常
尾部异常
, http://www.100md.com 颈体异常
胞浆残条
混合畸形
暴露组
20
22.5±4.6*
38.5±6.9
2.1±1.5
17.9±9.1*
12.2±5.1
1.3±0.4
6.9±3.9
, http://www.100md.com
13.3±6.5*
10.2±3.9*
5.5±4.0
22.5±5.6*
对照组
23
31.8±4.8
40.1±8.2
2.2±1.0
9.2±4.0
8.8±5.1
, http://www.100md.com
0.6±0.4
6.1±2.5
7.0±3.1
7.2±2.9
3.9±1.7
13.7±3.6
与对照组比较，**P<0.01
3.2 讨论 本次调查以农药厂为暴露组及毛毯厂为对照组，采用美国加州大学生殖医学研究中心提供的精液分析方法进行精子评价，并使用先进的仪器，严格的质控措施，保证结果的可靠性。分析结果表明，暴露组工人在生产过程中可能通过呼吸道和皮肤接触了有机磷农药，长期、慢性暴露对男性的生殖机能有不良影响，并有导致精子畸形的潜在可能性。
, 百拇医药
影响男性生殖机能的因素较多，一般认为精子数量的减少，活动能力的下降及畸形率的增加会导致生育能力的下降[2]，很多动物试验也证实了这一点。虽然本次调查的样本数未达到理想状态，但从分析结果基本上可以观察出有机磷农药对男性精子机能有一定的影响，提请有关劳动保护部门应进一步加强对职工的劳动保护。
作者简介：刘 学，男，35岁，主管技师
徐希平，男，42岁，博士，教授
参考文献
[1] 张慈禄，黄幸纾.化学农药对男人精子的损伤.劳动卫生与环境医学，1983，6：24.
[2] Geetha MK， Vijayalaxmi KA， Abdal Rahiman. Methyl parathion-indueed sperm shape abnormalities in mouse. Mutat Res, 1992，28：169～173.
收稿日期 1999-04-22, 百拇医药
单位：
刘 学 李贤相 江隆久 卜新柱 徐恒秋 徐希平 安徽美中生物医学环境卫生研究所， 安徽 安庆 246001；徐希平 安徽医科大学生物医学研究所， 安徽 合肥 230032
关键词：农药；精子；μ-cell测定方法
疾病控制杂志990205
【摘要】 目的 研究农药对生育生殖的影响。方法 采用μ-cell测定方法。结果 暴露组精子的质量与数量都受到了影响，均呈下降趋势。结论 长期暴露于农药污染，可能引起生育生殖功能的下降。
【中图分类号】 S482； R339.21； R446 【文献标识码】 A 【文章编号】1008-6013(1999)02-0084-02
, http://www.100md.com
The effects of pesticide on sperm by μ-cell method
LIU Xue，LI Xian-xiang，JIANG Long-jiu，BU Xing-zhu，XU Heng-qiu， XU Xi-ping.
Anhui Meizhong Biomedical and Environmental Health Research Institute，Anqing 246001，China
【Abstract】 Objective To study the effect of pesticides on reproduction. Method We collected the data of sperm with μ-cell measure method. Result The quality and number of the sperm declined in the exposure group. Conclusions The pesticide pollution can damage the function of reproductive system.
, 百拇医药
【Key words】 pesticide; sperm; μ-cell method
众多动物实验证明，诸多农药，特别是有机磷农药可使雄性哺乳动物的精子数量减少，活动能力下降，畸形率增加等[1]。但有关男性长期慢性接触有机磷农药对精子机能影响的报道甚少，为了阐明农药对男性精子机能的影响，本文运用μ-cell法进行了农药对精子机能影响的初步探讨。
1 材料与方法
1. 1 精子稀释液(DPBS) 美国加州大学Davis生殖医学研究中心提供。
1.2 对象选择 选择农药厂的工人20人组成暴露组，年龄20～49岁(31.0±9.9)；毛毯厂的工人23人作为对照组，年龄21～47岁(30.0±7.9)。
1.3 检测方法 采用国际先进的μ-cell精子计数法(以美国加州大学生殖医学研究中心Semen Evaluation Protocols为蓝本)对精子机能进行评价。主要指标有：精液量、液化时间、pH值、粘性、精子活动度、密度、活率、凝集性及形态学的检查，精子密度公式：
, http://www.100md.com
1.4 资料分析 使用SAS6.0软件包在586微机上进行数据统计分析。
2 质控措施
2.1 培训 由美国加州大学生殖医学研究中心有经验的工作人员，对精液分析人员进行培训，通过双盲法考核者方可参与课题研究。
2.2 精液分析 在精液分析过程中，对每份样品均进行平行样品检测，特别是测定精子活率及密度时，每份样品均计算检测结果之间的差异(D值)；若D≤15%，取二次结果的均值；若D>15%，则进行第三次测定，取三次结果的中间值做为报告最终测定结果。D值计算公式：
2.3 grid的校正 因grid受环境因素影响较大，试验前位于目镜内的grid运用国际标准的测微尺(micrometer)对其进行校准，且计算出其系数(factor)，公式如下：
, 百拇医药
factor=E×E×20×10-6
式中：E=用测微尺实际测得grid的宽度
20=μ-cell计数板的池深(μm)
3 结果与讨论
3.1 结果 暴露组精子的活率、密度，总数明显低于对照组；暴露组的精液量和精子活动度也低于对照组，但无统计学意义(表1)；液化时间>30 min者暴露组为30%，对照组为4.3%；凝集现象，暴露组为5.0%，对照组为8.6%；pH值两组均值分别为7.3和7.1；这些指标在两组之间的差异无显著性意义。
表1 暴露组和对照组精液分析结果比较(
±s) 组别, 百拇医药 n
量(ml)
活率(%)
活动度(级)
精子密度
(×106/ml)
总数
(×106)
暴露组
20
2.6±1.1
47.9±15.6*
2.2±0.5
, http://www.100md.com
42.9±22.4**
112.9±82.9**
对照组
23
3.0±1.5
57.6±14.2
2.5±0.5
74.5±43.6
220.2±157.0
与对照组比较，*P<0.05； **P<0.01
暴露组20人的正常形态精子百分率低于对照组，差异具有显著性。在畸形分类中，暴露组小头、尾部、颈体、混合畸形明显高于对照组(表2)。
, http://www.100md.com
表2 暴露组与对照组工人精子形态(%)比较(
±s) 组别n
正 常
头部无定形
大头
小头
长头
双头
头部正常
其他异常
尾部异常
, http://www.100md.com 颈体异常
胞浆残条
混合畸形
暴露组
20
22.5±4.6*
38.5±6.9
2.1±1.5
17.9±9.1*
12.2±5.1
1.3±0.4
6.9±3.9
, http://www.100md.com
13.3±6.5*
10.2±3.9*
5.5±4.0
22.5±5.6*
对照组
23
31.8±4.8
40.1±8.2
2.2±1.0
9.2±4.0
8.8±5.1
, http://www.100md.com
0.6±0.4
6.1±2.5
7.0±3.1
7.2±2.9
3.9±1.7
13.7±3.6
与对照组比较，**P<0.01
3.2 讨论 本次调查以农药厂为暴露组及毛毯厂为对照组，采用美国加州大学生殖医学研究中心提供的精液分析方法进行精子评价，并使用先进的仪器，严格的质控措施，保证结果的可靠性。分析结果表明，暴露组工人在生产过程中可能通过呼吸道和皮肤接触了有机磷农药，长期、慢性暴露对男性的生殖机能有不良影响，并有导致精子畸形的潜在可能性。
, 百拇医药
影响男性生殖机能的因素较多，一般认为精子数量的减少，活动能力的下降及畸形率的增加会导致生育能力的下降[2]，很多动物试验也证实了这一点。虽然本次调查的样本数未达到理想状态，但从分析结果基本上可以观察出有机磷农药对男性精子机能有一定的影响，提请有关劳动保护部门应进一步加强对职工的劳动保护。
作者简介：刘 学，男，35岁，主管技师
徐希平，男，42岁，博士，教授
参考文献
[1] 张慈禄，黄幸纾.化学农药对男人精子的损伤.劳动卫生与环境医学，1983，6：24.
[2] Geetha MK， Vijayalaxmi KA， Abdal Rahiman. Methyl parathion-indueed sperm shape abnormalities in mouse. Mutat Res, 1992，28：169～173.
收稿日期 1999-04-22, 百拇医药