泡利芬对小鼠免疫功能的影响
作者：姚林 王广增 闫红 孙荣距 黄晓光
单位：华北煤炭医学院预防医学系 (唐山 063000)
关键词：
卫生毒理学杂志990215 泡利芬是一种由茶多酚、黄芪、川贝、半夏等制成的复合制剂，主要用于尘肺的预防和治疗，呼吸道感染及改善肺功能。泡利芬具有很强的抗脂质过氧化和清除自由基的能力[1，2]。其主要成分茶多酚(Tea Polyphenols)对机体免疫功能的作用从90年代初就有人报道，茶多酚对细胞免疫和体液免疫以及非特异性免疫功能都有明显的增强作用，其机理可能为通过抗氧化作用而提高机体的免疫功能[3]。许多疾病的发生包括肺与免疫功能改变或免疫低下有关[4]，因此研究泡利芬对免疫的调节作用有助于预防疾病发生，抗病强身。我们试图通过试验了解泡利芬对小鼠免疫功能的影响。
, 百拇医药
材料与方法
一、材料
1.实验动物及受试物：昆明种成年小鼠18～22g，由华北煤炭医学院实验动物中心提供；泡利芬(矽肺康胶囊)胶囊，每粒500mg，含茶多酚100mg，由华北煤炭医学院预防医学系提供。
2.试验试剂：二硝基氟苯(DNFB)溶于丙酮麻油溶液新鲜配制，密封；豚鼠血清4℃冰箱保存，用时以SA缓冲液稀释；采集血和鸡血用生理盐水配制2%，10%绵羊红细胞(SRBC)悬液和20%鸡红细胞悬液。1∶1丙酮甲醇溶液、4%Giemsa磷酸缓冲液、都氏试剂、SA缓冲液。
3.动物分组及给药方法：小鼠120只，雌雄各半，随机分为4组：对照组每天正常标准饲料喂养；受试物组每天分别给含茶多酚1.25，2.5和5g/kg的泡利芬。均加入标准饲料，并保证每天给药小鼠能将含药饲料全部吃完，连续喂养5周后实验。
, 百拇医药
二、实验方法
1.迟发型变态反应(delayed type hypersensitivity,DTH)试验(耳肿胀法)：小鼠腹部皮肤脱毛，DNFB液50μl涂抹致敏，5天后再涂抹鼠耳进行攻击，24小时后，剪左右耳打孔取8mm耳片。计算左右耳片重量差值(肿胀度)。
2.半数溶血值(HC50)测定：2%SRBC腹腔注射，5天后取血离心收集血清。用SA缓冲液稀释，用稀释血清加10%SRBC、补体后离心取上清液，加都氏试剂，测吸收率，计算HC50。
样品HC50=样品吸收率值/SRBC半数溶血吸收率值×稀释倍数
3.小鼠腹腔巨噬细胞吞噬功能测定(半体内法)：腹腔注射20%鸡红细胞，30分处死后注射生理盐水，取腹腔液涂片，孵育后漂洗，凉干固定染色，显微镜下计算吞噬率和吞噬指数。
, 百拇医药
吞噬%=吞噬鸡红细胞的巨噬细胞数/计数的巨噬细胞数
吞噬指数=被吞噬鸡红细胞数/计数的吞噬细胞数
4.数据统计方法：SAS软件单因素方差分析。
结果与分析
一、DNFB诱导小鼠DTH试验
经方差分析，左右耳重量差值即肿胀度各组比较，差异有显著性(P<0.05，见表1)；2.5，5g/kg组与对照组比较差异均有显著性，且随着剂量增高，受试物组肿胀度明显降低。由此认为泡利芬对DNFB引发的小鼠耳肿胀有明显的抑制作用，提示泡利芬可调节小鼠细胞免疫功能，抑制迟发型变态反应造成的组织损伤。
表1 泡利芬对DNFB诱发的DTH的影响(mg)(
±s) 剂量
, 百拇医药
(g/kg)
n
左耳
右耳
肿胀度
对照组
10
8.0±1.9
14.1±0.7
6.1±1.9
1.25
10
8.9±0.5
, 百拇医药
13.4±1.4
4.1±1.4
2.5
10
8.2±0.9
11.8±2.3*
3.0±2.0*
5
10
8.0±1.2
10.9±2.2*
2.8±1.9*
, 百拇医药
与对照组比较 *P<0.05
二、半数溶血值(HC50)的测定
经方差分析，各组HC50比较差异有显著性(P<0.01)。2.5，5g/kg组显著高于对照组(P<0.01，见表2)；5g/kg组HC50比较低剂量组有显著性(P<0.01)。HC50表示血清溶血素的量，由此提示泡利芬可明显地增强小鼠体液免疫功能。
表2 泡利芬对半数溶血清(HC50)的影响(±s) 剂量
(g/kg)
n
, 百拇医药
HC50
对照组
10
127.54±5.28
1.25
10
129.10±11.62
2.5
10
144.72±14.52*
5
10
, 百拇医药
195.82±21.21*#
与对照组比较 *P<0.01；与1.25、2.5g/kg组比较#P<0.01
三、小鼠腹腔巨噬细胞吞噬鸡红细胞试验
各组吞噬百分率和吞噬指数比较差异都有显著性(P<0.05，见表3)，2.5，5g/kg组吞噬率和吞噬指数与对照组比较差异均有显著性；5g/kg组比较2.5g/kg组也有显著性，提示呈现剂量-反应关系。实验结果3提示泡利芬对小鼠腹腔巨噬细胞吞噬功能有促进作用。
表3 泡利芬对巨噬细胞吞噬功能的影响(±s) 剂量
(g/kg)
, 百拇医药
n
吞噬率
吞噬指数
对照组
10
20.31±6.46
0.35±0.11
1.25
10
22.81±5.54
0.43±0.11
2.5
10
, http://www.100md.com
30.19±8.31*
0.50±0.13*
5
10
36.94±10.42*#
0.59±0.12*#
与对照组比较 *P<0.05；与1.25g/kg组比较
P<0.05
讨 论
免疫机能主要包括细胞免疫、体液免疫和非特异性免疫。采用不同指标进行观察，初步可见，泡利芬对机体的细胞免疫功能具有调节作用，增强体液免疫和非特异性免疫功能。迟发型变态反应是机体接受再次抗原刺激24～48小时后发生的组织损伤。参与此反应的是致敏淋巴细胞(T细胞)、单核-巨噬细胞和淋巴细胞介导的免疫损伤。本实验DNFB是小分子半抗原，与皮肤角质蛋白结合形成完全抗原，可促使T淋巴细胞增殖成致敏淋巴细胞，刺激皮肤产生迟发型变态反应，表现为小鼠皮肤的肿胀。此实验可反映细胞免疫功能的强弱。实验结果表明，泡利芬能抑制DTH的产生，增强保护性免疫。
, 百拇医药
半数溶血值(HC50)可表示血清溶血素的量。溶血素是小鼠B淋巴细胞产生的特异性抗绵羊红细胞(SRBC)抗体，抗体水平反映了体液免疫功能状况。实验表明受试物组小鼠HC50显著高于对照组。由此说明，泡利芬具有增强体液免疫功能的作用。
机体的非特异性免疫包括天然屏障结构、吞噬细胞和抗微生物物质如补体、干扰素、溶酶体等。腹腔巨噬细胞的吞噬功能可反映小鼠非特异性免疫功能状况。我们通过对腹腔巨噬细胞吞噬率和吞噬指数的测定，认为泡利芬有增强非特异性免疫功能的作用。
上述分析表明，泡利芬是一种有效的免疫调节剂。药理研究表明，其主要成分茶多酚是一种非常有效的抗氧化剂，具有清除自由基和抗脂质过氧化。茶多酚是通过其抗氧化作用而提高机体免疫功能的，它能显著促进刀豆球蛋白A(ConA)刺激脾淋巴细胞转化，并促进后者产生集落刺激因子(CSFS)，促使T淋巴细胞大量增殖从而增强细胞免疫功能[5，6]。实验表明，服用茶多酚可使血清免疫球蛋白IgA、IgG、IgM和补体C4水平明显升高，从而增强体液免疫功能和免疫监视作用。这对于机体增强抵抗力，预防疾病发生有积极意义。此外，泡利芬能有效地抑制迟发型变态反应所造成的组织损伤，增强保护性免疫的作用。这是因为T细胞亚群是反映细胞免疫的，用药后抑制性T细胞CD有明显的上升趋势，从而抑制了变态反应的产生[7～10]。
, http://www.100md.com
参考文献
1.姚 林，王广增，赵伯阳，等.泡利芬对大鼠脂质过氧化的影响.卫生毒理学杂志，1998，11(2)：
2.陶荣达.茶多酚的制备和应用研究进展.化学世界，1997.
3.胡先珍，张友会.绿茶儿茶素对小鼠细胞免疫功能的增强作用.中华微生物和免疫学杂志，1991，11(2)：97～99.
4.王
兰，刚葆琪主编.现代劳动卫生学.第一版.北京：人民卫生出版社，1994，60.
5.周燕波.茶叶成分及其医疗价值.中药研究与开发.中国中医药信息杂志，1997，4(11)：16～18.
, 百拇医药 6.赵育莹.茶色素对血液透析患者的免疫调节作用.中国中医药科技，1997，4(3)：180.
7.曹明富，林植华，虞研原，等.茶多酚对细胞免疫功能的影响及抑瘤作用.现代应用药学，1994，11(4)：3～6.
8.祁 禄，韩 驰.茶多酚抑制促癌物TPA促癌作用抗氧化机制研究.卫生研究/营养与食品卫生，1998，27(1)：50～529.
9.Yang MT, Wang ZY. Tea and cancer (Review). J Natl Cancer Inst, 1993,85:1038.
10.Hu GZ, Han C, Chen JS. Inhibition of expression by green tea and (-)epigallocate chin gallate in mice. Nutri Cancer, 1995,24:203.
(修回日期 1998年12月), 百拇医药
单位：华北煤炭医学院预防医学系 (唐山 063000)
关键词：
卫生毒理学杂志990215 泡利芬是一种由茶多酚、黄芪、川贝、半夏等制成的复合制剂，主要用于尘肺的预防和治疗，呼吸道感染及改善肺功能。泡利芬具有很强的抗脂质过氧化和清除自由基的能力[1，2]。其主要成分茶多酚(Tea Polyphenols)对机体免疫功能的作用从90年代初就有人报道，茶多酚对细胞免疫和体液免疫以及非特异性免疫功能都有明显的增强作用，其机理可能为通过抗氧化作用而提高机体的免疫功能[3]。许多疾病的发生包括肺与免疫功能改变或免疫低下有关[4]，因此研究泡利芬对免疫的调节作用有助于预防疾病发生，抗病强身。我们试图通过试验了解泡利芬对小鼠免疫功能的影响。
, 百拇医药
材料与方法
一、材料
1.实验动物及受试物：昆明种成年小鼠18～22g，由华北煤炭医学院实验动物中心提供；泡利芬(矽肺康胶囊)胶囊，每粒500mg，含茶多酚100mg，由华北煤炭医学院预防医学系提供。
2.试验试剂：二硝基氟苯(DNFB)溶于丙酮麻油溶液新鲜配制，密封；豚鼠血清4℃冰箱保存，用时以SA缓冲液稀释；采集血和鸡血用生理盐水配制2%，10%绵羊红细胞(SRBC)悬液和20%鸡红细胞悬液。1∶1丙酮甲醇溶液、4%Giemsa磷酸缓冲液、都氏试剂、SA缓冲液。
3.动物分组及给药方法：小鼠120只，雌雄各半，随机分为4组：对照组每天正常标准饲料喂养；受试物组每天分别给含茶多酚1.25，2.5和5g/kg的泡利芬。均加入标准饲料，并保证每天给药小鼠能将含药饲料全部吃完，连续喂养5周后实验。
, 百拇医药
二、实验方法
1.迟发型变态反应(delayed type hypersensitivity,DTH)试验(耳肿胀法)：小鼠腹部皮肤脱毛，DNFB液50μl涂抹致敏，5天后再涂抹鼠耳进行攻击，24小时后，剪左右耳打孔取8mm耳片。计算左右耳片重量差值(肿胀度)。
2.半数溶血值(HC50)测定：2%SRBC腹腔注射，5天后取血离心收集血清。用SA缓冲液稀释，用稀释血清加10%SRBC、补体后离心取上清液，加都氏试剂，测吸收率，计算HC50。
样品HC50=样品吸收率值/SRBC半数溶血吸收率值×稀释倍数
3.小鼠腹腔巨噬细胞吞噬功能测定(半体内法)：腹腔注射20%鸡红细胞，30分处死后注射生理盐水，取腹腔液涂片，孵育后漂洗，凉干固定染色，显微镜下计算吞噬率和吞噬指数。
, 百拇医药
吞噬%=吞噬鸡红细胞的巨噬细胞数/计数的巨噬细胞数
吞噬指数=被吞噬鸡红细胞数/计数的吞噬细胞数
4.数据统计方法：SAS软件单因素方差分析。
结果与分析
一、DNFB诱导小鼠DTH试验
经方差分析，左右耳重量差值即肿胀度各组比较，差异有显著性(P<0.05，见表1)；2.5，5g/kg组与对照组比较差异均有显著性，且随着剂量增高，受试物组肿胀度明显降低。由此认为泡利芬对DNFB引发的小鼠耳肿胀有明显的抑制作用，提示泡利芬可调节小鼠细胞免疫功能，抑制迟发型变态反应造成的组织损伤。
表1 泡利芬对DNFB诱发的DTH的影响(mg)(
±s) 剂量, 百拇医药
(g/kg)
n
左耳
右耳
肿胀度
对照组
10
8.0±1.9
14.1±0.7
6.1±1.9
1.25
10
8.9±0.5
, 百拇医药
13.4±1.4
4.1±1.4
2.5
10
8.2±0.9
11.8±2.3*
3.0±2.0*
5
10
8.0±1.2
10.9±2.2*
2.8±1.9*
, 百拇医药
与对照组比较 *P<0.05
二、半数溶血值(HC50)的测定
经方差分析，各组HC50比较差异有显著性(P<0.01)。2.5，5g/kg组显著高于对照组(P<0.01，见表2)；5g/kg组HC50比较低剂量组有显著性(P<0.01)。HC50表示血清溶血素的量，由此提示泡利芬可明显地增强小鼠体液免疫功能。
表2 泡利芬对半数溶血清(HC50)的影响(
±s) 剂量(g/kg)
n
, 百拇医药
HC50
对照组
10
127.54±5.28
1.25
10
129.10±11.62
2.5
10
144.72±14.52*
5
10
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195.82±21.21*#
与对照组比较 *P<0.01；与1.25、2.5g/kg组比较#P<0.01
三、小鼠腹腔巨噬细胞吞噬鸡红细胞试验
各组吞噬百分率和吞噬指数比较差异都有显著性(P<0.05，见表3)，2.5，5g/kg组吞噬率和吞噬指数与对照组比较差异均有显著性；5g/kg组比较2.5g/kg组也有显著性，提示呈现剂量-反应关系。实验结果3提示泡利芬对小鼠腹腔巨噬细胞吞噬功能有促进作用。
表3 泡利芬对巨噬细胞吞噬功能的影响(
±s) 剂量(g/kg)
, 百拇医药
n
吞噬率
吞噬指数
对照组
10
20.31±6.46
0.35±0.11
1.25
10
22.81±5.54
0.43±0.11
2.5
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30.19±8.31*
0.50±0.13*
5
10
36.94±10.42*#
0.59±0.12*#
与对照组比较 *P<0.05；与1.25g/kg组比较
P<0.05
讨 论
免疫机能主要包括细胞免疫、体液免疫和非特异性免疫。采用不同指标进行观察，初步可见，泡利芬对机体的细胞免疫功能具有调节作用，增强体液免疫和非特异性免疫功能。迟发型变态反应是机体接受再次抗原刺激24～48小时后发生的组织损伤。参与此反应的是致敏淋巴细胞(T细胞)、单核-巨噬细胞和淋巴细胞介导的免疫损伤。本实验DNFB是小分子半抗原，与皮肤角质蛋白结合形成完全抗原，可促使T淋巴细胞增殖成致敏淋巴细胞，刺激皮肤产生迟发型变态反应，表现为小鼠皮肤的肿胀。此实验可反映细胞免疫功能的强弱。实验结果表明，泡利芬能抑制DTH的产生，增强保护性免疫。
, 百拇医药
半数溶血值(HC50)可表示血清溶血素的量。溶血素是小鼠B淋巴细胞产生的特异性抗绵羊红细胞(SRBC)抗体，抗体水平反映了体液免疫功能状况。实验表明受试物组小鼠HC50显著高于对照组。由此说明，泡利芬具有增强体液免疫功能的作用。
机体的非特异性免疫包括天然屏障结构、吞噬细胞和抗微生物物质如补体、干扰素、溶酶体等。腹腔巨噬细胞的吞噬功能可反映小鼠非特异性免疫功能状况。我们通过对腹腔巨噬细胞吞噬率和吞噬指数的测定，认为泡利芬有增强非特异性免疫功能的作用。
上述分析表明，泡利芬是一种有效的免疫调节剂。药理研究表明，其主要成分茶多酚是一种非常有效的抗氧化剂，具有清除自由基和抗脂质过氧化。茶多酚是通过其抗氧化作用而提高机体免疫功能的，它能显著促进刀豆球蛋白A(ConA)刺激脾淋巴细胞转化，并促进后者产生集落刺激因子(CSFS)，促使T淋巴细胞大量增殖从而增强细胞免疫功能[5，6]。实验表明，服用茶多酚可使血清免疫球蛋白IgA、IgG、IgM和补体C4水平明显升高，从而增强体液免疫功能和免疫监视作用。这对于机体增强抵抗力，预防疾病发生有积极意义。此外，泡利芬能有效地抑制迟发型变态反应所造成的组织损伤，增强保护性免疫的作用。这是因为T细胞亚群是反映细胞免疫的，用药后抑制性T细胞CD有明显的上升趋势，从而抑制了变态反应的产生[7～10]。
, http://www.100md.com
参考文献
1.姚 林，王广增，赵伯阳，等.泡利芬对大鼠脂质过氧化的影响.卫生毒理学杂志，1998，11(2)：
2.陶荣达.茶多酚的制备和应用研究进展.化学世界，1997.
3.胡先珍，张友会.绿茶儿茶素对小鼠细胞免疫功能的增强作用.中华微生物和免疫学杂志，1991，11(2)：97～99.
4.王
兰，刚葆琪主编.现代劳动卫生学.第一版.北京：人民卫生出版社，1994，60.5.周燕波.茶叶成分及其医疗价值.中药研究与开发.中国中医药信息杂志，1997，4(11)：16～18.
, 百拇医药 6.赵育莹.茶色素对血液透析患者的免疫调节作用.中国中医药科技，1997，4(3)：180.
7.曹明富，林植华，虞研原，等.茶多酚对细胞免疫功能的影响及抑瘤作用.现代应用药学，1994，11(4)：3～6.
8.祁 禄，韩 驰.茶多酚抑制促癌物TPA促癌作用抗氧化机制研究.卫生研究/营养与食品卫生，1998，27(1)：50～529.
9.Yang MT, Wang ZY. Tea and cancer (Review). J Natl Cancer Inst, 1993,85:1038.
10.Hu GZ, Han C, Chen JS. Inhibition of expression by green tea and (-)epigallocate chin gallate in mice. Nutri Cancer, 1995,24:203.
(修回日期 1998年12月), 百拇医药