黄丹胶囊对慢性肾衰大鼠血浆环磷酸鸟苷及心钠素的影响
作者：郑坚峰 洪淑云 陈思源 陈敬春 冯新民 张长弓
单位：郑坚峰 洪淑云 陈思源 冯新民 同济医科大学附属协和医院中医科，武汉 430022； 陈敬春 同济医科大学附属协和医院儿科，武汉 430022；张长弓 同济医科大学药学院植物化学教研室，武汉 430030
关键词：黄丹胶囊；肾功能衰竭；慢性；环磷酸鸟苷；心钠素
同济医科大学学报990221 摘要 制作5/6肾切除大鼠慢性肾衰模型，用黄丹胶囊治疗，观察血浆环磷酸鸟苷(cGMP)、心钠素(ANP)等指标，发现黄丹胶囊可以延缓慢性肾衰大鼠BUN、Scr增高，并延缓血浆cGMP、ANP水平增高。提示，黄丹胶囊可能通过调节水钠代谢，改善肾小球滤过率，通过机体调节，而对血浆cGMP、ANP有延缓增高作用。
中图法分类号 R692.5， Q556.1
, http://www.100md.com
Effects of Huangdan Capsule on Plasma cGMP and ANP in Rats with
Chronic Renal Failure
Zheng Jianfeng, Hong Shuyun, Chen Siyuan et al
Department of Traditional Chinese Medicine, Xiehe Hospital, Tongji Medical University,Wuhan 430022
Abstract The model of chronic renal failure (CRF) was made in 5/6 nephrectomized rats, and Huangdan capsule was used to treat these rats. The levels of cyclic guanosine monophosphate (cGMP) and atrial natriuretic peptide (ANP) in plasma were determined. The results showed that Huangdan capsule could postpone the increase of the levels of cGMP and ANP,suggesting that by regulating the water and sodium metabolism, Huangdan capsule could ameliorate the glomerular filtration rate, and that Huangdan capsule could lower the levels of cGMP and ANP in plasma via body regulation.
, 百拇医药
Key words Huangdan capsule; renal failure, chronic; cyclic guanosine monophosphate; atrial natriuretic peptide
本文以大鼠5/6肾切除术，建立慢性肾功能衰竭(CRF)的动物模型，以覆醛氧化淀粉作对照，观察了黄丹胶囊延缓5/6肾切除大鼠CRF进程的作用，并探讨了其对血浆环磷酸鸟苷及心钠素含量的影响。
1 材料与方法
1.1 动物
雄性SD大鼠100只，体重250～300 g，湖北医科大学实验动物中心提供(证书号95.11)，动物标准饲料由同济医科大学实验动物学部提供，实验期间动物自由进食，饮水。
1.2 黄丹胶囊
, http://www.100md.com
由同济医科大学药学院提供，主要由黄芪、大黄、丹参、淫羊藿、薏苡仁等组成。覆醛氧化淀粉：天津大学制药厂产品，批号：(88)卫药准字X-90号。
1.3 肾切除术
在腹腔麻醉(氯氨酮100 mg/kg)和无菌条件下，经背切除左肾皮质2/3，1～2周后切除右肾并开始记录术后时间，假手术对照组，切开皮肤暴露肾脏后缝合切口，不切肾〔1〕。
1.4 实验分组
术后2周后开始分组治疗，A组：假手术组；B组：模型组；C组：黄丹胶囊1号组(8.82 g/kg)；D组：黄丹胶囊2号组(4.41 g/kg)；E组：覆醛氧化淀粉组(研磨后灌胃1.57 g/kg)，C、D、E组用特制灌胃针经口灌胃1次/d，连续治疗12周，A、B组灌服等量自来水1次/d。
, 百拇医药
1.5 观察内容
1.5.1血尿素氮(BUN)、血肌酐(Scr)：BUN用脲酶、谷氨酸脱氢酶动力学法；Scr用苦味酸动力学法测定。
1.5.2 血浆环磷酸鸟苷(cGMP)、心钠素(ANP)：用放射免疫法测定，cGMP药盒为上海中医学院同位素室提供，ANP药盒为北京市北方免疫试剂研究所提供。严格按说明书操作，用中科院上海原子能研究所日环仪器厂生产的FMJ-182放射免疫r计数器计数。
1.6 统计学方法
文中数据以
±s表示，组间差异显著性用t检验。
2 结 果
术后14周，各手术组大鼠BUN，Scr显著高于A组，C、D、E组上述指标与B组相比有显著改善，以C组改善最明显，见表1。
, http://www.100md.com
术后14周，各手术组血浆cGMP、ANP显著高于A组，C、D组cGMP、ANP显著低于B组，E组与B组比较，差异无显著性意义。C、D、E组cGMP、ANP相比，C组cGMP显著低于E组，余差异均无显著性意义，见表2。
表1 大鼠术后14周血BUN、Scr(±s) 组别
n
BUN(mmol/L)
Scr(μmol/L)
A
10
6.03±0.77
, http://www.100md.com 90.50±12.85
B
10
23.97±4.97*
261.42±45.85*
C
10
12.51±3.54*△△△
164.81±30.37*△△
D
10
, 百拇医药
16.61±4.71*△△△
177.45±43.73*△△
E
10
18.18±3.85*△△△
217.34±41.61*△
与A组比较 *P<0.001；与B组比较 △ P<0.05
△△ P<0.01 △△△ P<0.001表2 大鼠术后14周血浆cGMP、ANP(±s) 组别
, 百拇医药
n
cGMP(pmol/L)
ANP(pg/L)
A
10
3.5±0.6
89.1±15.6
B
10
7.4±2.4***
186.8±70.9***
C
, 百拇医药
10
4.8±1.1*△△#
127.4±35.9**△
D
10
5.2±1.9**△
133.4±40.8**△
E
10
6.5±2.0***
145.7±45.0***
, 百拇医药
与A组比较 *P<0.05 **P<0.01 ***P<0.001；与B组比较△P<0.05 △△P<0.01；与E组比较#P<0.053 讨 论
目前认为，心钠素(ANP)是心房产生和分泌的一种有生物活性的多肽激素，可以直接释放到血浆中，它具有很强的利钠利尿，扩张血管和降低血压作用。cGMP是ANP的第二信使，且ANP是已知的唯一利用cGMP作为第二信使的多肽。由于肾脏是ANP的重要靶器官，也是ANP的重要清除器官，肾脏发生病变时，随着肾组织损害，肾小球滤过率下降，血浆cGMP经肾小球滤过减少，随尿中排泄减少，血浆中cGMP及ANP水平升高〔2〕，很多作者的研究结果都显示CRF患者内源性血浆ANP水平显著增加，并与肾小球滤过率呈负相关〔3〕。本组结果支持血浆cGMP及ANP水平与肾功能损害的严重程度有关。
大鼠5/6肾切除后14周，B组大鼠BUN、Scr明显升高，说明B组大鼠已发生CRF。而C、D组大鼠经使用黄丹胶囊治疗12周后，BUN、Scr显著低于B组，却高于A组。说明黄丹胶囊有延缓慢性肾衰的作用，且黄丹胶囊高剂量组疗效高于低剂量组。
, 百拇医药
慢性肾衰发病机制复杂，中医认为，脾肾虚衰、湿浊潴留是其关键。黄丹胶囊是以健脾补肾、活血化瘀、利湿泻浊而立方。黄丹胶囊中的大黄能增加CRF患者肠腔中粪氮的排泄〔4〕，抑制尿素氮合成，缓解残余肾高代谢，抑制肾小球系膜细胞及肾小管上皮细胞的增生，拮抗促肾因子刺激系膜细胞增殖，并调节脂质代谢紊乱〔5〕。黄芪有消除蛋白尿，减轻肾脏病理变化的功能〔6〕。淫羊藿有扩张血管，降低血压作用，尤其是对肾脏高血压有明显的降压作用〔7〕。丹参改善微循环，提高肾小球滤过率。薏苡仁利水渗湿，促进淋巴细胞转化，提高机体的免疫机能〔8〕。本实验表明，黄丹胶囊能延缓5/6肾切除大鼠慢性肾衰的进程，并能延缓血浆cGMP、ANP水平增高。这可能是黄丹胶囊通过各种药物的综合作用，改善慢性肾衰大鼠水钠潴留，增加肾小球滤过率，进而延缓血浆cGMP、ANP增高。本文使用的阳性对照药物覆醛氧化淀粉为目前临床常用的降BUN药物，其对延缓BUN、Scr的增高亦有一定效果。
, 百拇医药
作者简介：郑坚峰，男，1962年生，副教授，副主任医师
参考文献
1 程庆烁，陈香美.冬虫夏草对慢性肾功能不全大鼠细胞免疫机制的调节作用.中华医学杂志，1992，72(1)：27
2 陈孝文，陈观生，李达道.慢性肾功能衰竭患者环磷酸鸟苷与肾功能的关系.中华肾脏病杂志，1994，8(4)：228
3 Predel H G, Meyer-Lehnert H et al. Plasma concentration of human atrial natriuretic peptide in patients with stable chronic renal failure. Clin Nephrol, 1989，31:150
4 毕增祺，郑法雷，胡红宇等.大黄灌肠治疗慢性肾功能衰竭氮平衡研究.中西医结合杂志，1987，7(1)：21
5 黎磊石.大黄治疗慢性肾衰的疗效及其作用机制.临床内科杂志，1991，8(6)：12
6 赵一环，李世淑.黄芪对家兔实验性抗肾抗体肾炎疗效的初步观察.中西医结合杂志，1983，3(5)：302
7 吴葆杰主编.中草药药理学.北京：人民卫生出版社，1982. 92
8 陈以平，胡仲仪，沈玲妹等.益气活血化湿法为主治疗膜型肾炎临床及动物实验研究. 中医杂志，1987，28(2)：110
收稿日期：1998-04-01, 百拇医药
单位：郑坚峰 洪淑云 陈思源 冯新民 同济医科大学附属协和医院中医科，武汉 430022； 陈敬春 同济医科大学附属协和医院儿科，武汉 430022；张长弓 同济医科大学药学院植物化学教研室，武汉 430030
关键词：黄丹胶囊；肾功能衰竭；慢性；环磷酸鸟苷；心钠素
同济医科大学学报990221 摘要 制作5/6肾切除大鼠慢性肾衰模型，用黄丹胶囊治疗，观察血浆环磷酸鸟苷(cGMP)、心钠素(ANP)等指标，发现黄丹胶囊可以延缓慢性肾衰大鼠BUN、Scr增高，并延缓血浆cGMP、ANP水平增高。提示，黄丹胶囊可能通过调节水钠代谢，改善肾小球滤过率，通过机体调节，而对血浆cGMP、ANP有延缓增高作用。
中图法分类号 R692.5， Q556.1
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Effects of Huangdan Capsule on Plasma cGMP and ANP in Rats with
Chronic Renal Failure
Zheng Jianfeng, Hong Shuyun, Chen Siyuan et al
Department of Traditional Chinese Medicine, Xiehe Hospital, Tongji Medical University,Wuhan 430022
Abstract The model of chronic renal failure (CRF) was made in 5/6 nephrectomized rats, and Huangdan capsule was used to treat these rats. The levels of cyclic guanosine monophosphate (cGMP) and atrial natriuretic peptide (ANP) in plasma were determined. The results showed that Huangdan capsule could postpone the increase of the levels of cGMP and ANP,suggesting that by regulating the water and sodium metabolism, Huangdan capsule could ameliorate the glomerular filtration rate, and that Huangdan capsule could lower the levels of cGMP and ANP in plasma via body regulation.
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Key words Huangdan capsule; renal failure, chronic; cyclic guanosine monophosphate; atrial natriuretic peptide
本文以大鼠5/6肾切除术，建立慢性肾功能衰竭(CRF)的动物模型，以覆醛氧化淀粉作对照，观察了黄丹胶囊延缓5/6肾切除大鼠CRF进程的作用，并探讨了其对血浆环磷酸鸟苷及心钠素含量的影响。
1 材料与方法
1.1 动物
雄性SD大鼠100只，体重250～300 g，湖北医科大学实验动物中心提供(证书号95.11)，动物标准饲料由同济医科大学实验动物学部提供，实验期间动物自由进食，饮水。
1.2 黄丹胶囊
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由同济医科大学药学院提供，主要由黄芪、大黄、丹参、淫羊藿、薏苡仁等组成。覆醛氧化淀粉：天津大学制药厂产品，批号：(88)卫药准字X-90号。
1.3 肾切除术
在腹腔麻醉(氯氨酮100 mg/kg)和无菌条件下，经背切除左肾皮质2/3，1～2周后切除右肾并开始记录术后时间，假手术对照组，切开皮肤暴露肾脏后缝合切口，不切肾〔1〕。
1.4 实验分组
术后2周后开始分组治疗，A组：假手术组；B组：模型组；C组：黄丹胶囊1号组(8.82 g/kg)；D组：黄丹胶囊2号组(4.41 g/kg)；E组：覆醛氧化淀粉组(研磨后灌胃1.57 g/kg)，C、D、E组用特制灌胃针经口灌胃1次/d，连续治疗12周，A、B组灌服等量自来水1次/d。
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1.5 观察内容
1.5.1血尿素氮(BUN)、血肌酐(Scr)：BUN用脲酶、谷氨酸脱氢酶动力学法；Scr用苦味酸动力学法测定。
1.5.2 血浆环磷酸鸟苷(cGMP)、心钠素(ANP)：用放射免疫法测定，cGMP药盒为上海中医学院同位素室提供，ANP药盒为北京市北方免疫试剂研究所提供。严格按说明书操作，用中科院上海原子能研究所日环仪器厂生产的FMJ-182放射免疫r计数器计数。
1.6 统计学方法
文中数据以
±s表示，组间差异显著性用t检验。2 结 果
术后14周，各手术组大鼠BUN，Scr显著高于A组，C、D、E组上述指标与B组相比有显著改善，以C组改善最明显，见表1。
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术后14周，各手术组血浆cGMP、ANP显著高于A组，C、D组cGMP、ANP显著低于B组，E组与B组比较，差异无显著性意义。C、D、E组cGMP、ANP相比，C组cGMP显著低于E组，余差异均无显著性意义，见表2。
表1 大鼠术后14周血BUN、Scr(
±s) 组别n
BUN(mmol/L)
Scr(μmol/L)
A
10
6.03±0.77
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B
10
23.97±4.97*
261.42±45.85*
C
10
12.51±3.54*△△△
164.81±30.37*△△
D
10
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16.61±4.71*△△△
177.45±43.73*△△
E
10
18.18±3.85*△△△
217.34±41.61*△
与A组比较 *P<0.001；与B组比较 △ P<0.05
△△ P<0.01 △△△ P<0.001表2 大鼠术后14周血浆cGMP、ANP(
±s) 组别, 百拇医药
n
cGMP(pmol/L)
ANP(pg/L)
A
10
3.5±0.6
89.1±15.6
B
10
7.4±2.4***
186.8±70.9***
C
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4.8±1.1*△△#
127.4±35.9**△
D
10
5.2±1.9**△
133.4±40.8**△
E
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6.5±2.0***
145.7±45.0***
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与A组比较 *P<0.05 **P<0.01 ***P<0.001；与B组比较△P<0.05 △△P<0.01；与E组比较#P<0.053 讨 论
目前认为，心钠素(ANP)是心房产生和分泌的一种有生物活性的多肽激素，可以直接释放到血浆中，它具有很强的利钠利尿，扩张血管和降低血压作用。cGMP是ANP的第二信使，且ANP是已知的唯一利用cGMP作为第二信使的多肽。由于肾脏是ANP的重要靶器官，也是ANP的重要清除器官，肾脏发生病变时，随着肾组织损害，肾小球滤过率下降，血浆cGMP经肾小球滤过减少，随尿中排泄减少，血浆中cGMP及ANP水平升高〔2〕，很多作者的研究结果都显示CRF患者内源性血浆ANP水平显著增加，并与肾小球滤过率呈负相关〔3〕。本组结果支持血浆cGMP及ANP水平与肾功能损害的严重程度有关。
大鼠5/6肾切除后14周，B组大鼠BUN、Scr明显升高，说明B组大鼠已发生CRF。而C、D组大鼠经使用黄丹胶囊治疗12周后，BUN、Scr显著低于B组，却高于A组。说明黄丹胶囊有延缓慢性肾衰的作用，且黄丹胶囊高剂量组疗效高于低剂量组。
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慢性肾衰发病机制复杂，中医认为，脾肾虚衰、湿浊潴留是其关键。黄丹胶囊是以健脾补肾、活血化瘀、利湿泻浊而立方。黄丹胶囊中的大黄能增加CRF患者肠腔中粪氮的排泄〔4〕，抑制尿素氮合成，缓解残余肾高代谢，抑制肾小球系膜细胞及肾小管上皮细胞的增生，拮抗促肾因子刺激系膜细胞增殖，并调节脂质代谢紊乱〔5〕。黄芪有消除蛋白尿，减轻肾脏病理变化的功能〔6〕。淫羊藿有扩张血管，降低血压作用，尤其是对肾脏高血压有明显的降压作用〔7〕。丹参改善微循环，提高肾小球滤过率。薏苡仁利水渗湿，促进淋巴细胞转化，提高机体的免疫机能〔8〕。本实验表明，黄丹胶囊能延缓5/6肾切除大鼠慢性肾衰的进程，并能延缓血浆cGMP、ANP水平增高。这可能是黄丹胶囊通过各种药物的综合作用，改善慢性肾衰大鼠水钠潴留，增加肾小球滤过率，进而延缓血浆cGMP、ANP增高。本文使用的阳性对照药物覆醛氧化淀粉为目前临床常用的降BUN药物，其对延缓BUN、Scr的增高亦有一定效果。
, 百拇医药
作者简介：郑坚峰，男，1962年生，副教授，副主任医师
参考文献
1 程庆烁，陈香美.冬虫夏草对慢性肾功能不全大鼠细胞免疫机制的调节作用.中华医学杂志，1992，72(1)：27
2 陈孝文，陈观生，李达道.慢性肾功能衰竭患者环磷酸鸟苷与肾功能的关系.中华肾脏病杂志，1994，8(4)：228
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4 毕增祺，郑法雷，胡红宇等.大黄灌肠治疗慢性肾功能衰竭氮平衡研究.中西医结合杂志，1987，7(1)：21
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6 赵一环，李世淑.黄芪对家兔实验性抗肾抗体肾炎疗效的初步观察.中西医结合杂志，1983，3(5)：302
7 吴葆杰主编.中草药药理学.北京：人民卫生出版社，1982. 92
8 陈以平，胡仲仪，沈玲妹等.益气活血化湿法为主治疗膜型肾炎临床及动物实验研究. 中医杂志，1987，28(2)：110
收稿日期：1998-04-01, 百拇医药