细胞图像分析仪测定法与MTT法用于牙科材料细胞毒性的检测
作者：刘胜武 施斌 王革
单位：430071 武汉，湖北医科大学微生物学与免疫学教研室
关键词：
中华口腔医学杂志990223 为了对MTT(thiazolyl blue,噻唑蓝)法和细胞图像分析仪测定法进行评价，我们用此两种方法同时对牙科材料铁镍合金、铁铬合金、软磁铁氧体及生物活性陶瓷进行细胞毒性测试。
一、材料与方法
1.材料：细胞株：小鼠成纤维细胞(L929)；MTT瑞士Fluka产品，NO 88415；全自动图像分析仪，德国Kontron公司IBAS型；牙科材料及纯肽(阴性对照)，纯铅(阳性对照)均制成直径5 mm，高6 mm的圆柱体。
2.方法：MTT法：将灭菌后的材料用5%的火棉胶固定在无菌24孔培养板中央，每种材料重复放置5孔。每孔加入1.5×108/L L929细胞0.5 ml，培养48小时后，每孔加入5 g/L MTT 20 μl。继续培养24小时后，弃上清，用PBS洗二次，每孔加入二甲亚砜1 ml，作用10分钟使其溶解显色。每孔取200 μl转入40孔微量反应板中，用酶联检测仪于570 nm处测定OD值，参照吕晓迎[1]等的方法计算细胞增殖百分率并进行毒性定级。细胞图像分析仪测定法：材料放置及靶细胞浓度同MTT法。培养72小时后吸去上清液，再用PBS洗二次，每孔加入结晶紫液0.5 ml染色10分钟，用缓慢自来水冲去残余染料，自然干燥后，以细胞图像分析仪分析结果。参照张彩霞[2]等的方法计算细胞密度相对比值并进行毒性定级。
二、结果
铁镍合金、铁铬合金、软磁铁氧体、生物活性陶瓷用MTT法检测，其细胞增殖率分别为100.86%、92.24%、100.86%、90.52%，毒性均为0级。用细胞图像分析仪检测法，其细胞密度相对比分别为106.52%、101.30%、106.39%、107.99%，毒性均为0级。
三、讨论
操作简便、快速，结果精确、客观的测试方法，对牙科材料的生物相容性检测是重要的。MTT法用于细胞毒性的检测是近年来使用的一种新方法。该法能敏感、客观地反映出被测试材料对细胞的毒性损害程度，无需特殊设备，操作简便。细胞图像分析仪测定法是通过微机图像处理系统对测试细胞生长的形态及密度面积进行处理以确定其细胞受损程度的一种定量的方法。具有操作简便、快速、客观、定量、可保存及复核等优点。我们选用上述两种方法同时对4种牙科材料进行了细胞毒性检测，结果显示其测试结果相同。因此，可以认为MTT法与细胞图像分析仪测定法用于牙科材料的细胞毒性检测都是较理想的方法，可根据实验室条件选取。
参考文献
1 吕晓迎，H.F.Kappert.牙科材料细胞毒性评定的新方法.中华口腔医学杂志，1995，30：377-379.
2 张彩霞，叶莉明，陈世浩，等.细胞图像分析仪定量评价牙科及医用金属材料的毒性研究.口腔医学纵横，1991，7：108-109.
(收稿：1997-07-23 修回：1998-12-24), http://www.100md.com
单位：430071 武汉，湖北医科大学微生物学与免疫学教研室
关键词：
中华口腔医学杂志990223 为了对MTT(thiazolyl blue,噻唑蓝)法和细胞图像分析仪测定法进行评价，我们用此两种方法同时对牙科材料铁镍合金、铁铬合金、软磁铁氧体及生物活性陶瓷进行细胞毒性测试。
一、材料与方法
1.材料：细胞株：小鼠成纤维细胞(L929)；MTT瑞士Fluka产品，NO 88415；全自动图像分析仪，德国Kontron公司IBAS型；牙科材料及纯肽(阴性对照)，纯铅(阳性对照)均制成直径5 mm，高6 mm的圆柱体。
2.方法：MTT法：将灭菌后的材料用5%的火棉胶固定在无菌24孔培养板中央，每种材料重复放置5孔。每孔加入1.5×108/L L929细胞0.5 ml，培养48小时后，每孔加入5 g/L MTT 20 μl。继续培养24小时后，弃上清，用PBS洗二次，每孔加入二甲亚砜1 ml，作用10分钟使其溶解显色。每孔取200 μl转入40孔微量反应板中，用酶联检测仪于570 nm处测定OD值，参照吕晓迎[1]等的方法计算细胞增殖百分率并进行毒性定级。细胞图像分析仪测定法：材料放置及靶细胞浓度同MTT法。培养72小时后吸去上清液，再用PBS洗二次，每孔加入结晶紫液0.5 ml染色10分钟，用缓慢自来水冲去残余染料，自然干燥后，以细胞图像分析仪分析结果。参照张彩霞[2]等的方法计算细胞密度相对比值并进行毒性定级。
二、结果
铁镍合金、铁铬合金、软磁铁氧体、生物活性陶瓷用MTT法检测，其细胞增殖率分别为100.86%、92.24%、100.86%、90.52%，毒性均为0级。用细胞图像分析仪检测法，其细胞密度相对比分别为106.52%、101.30%、106.39%、107.99%，毒性均为0级。
三、讨论
操作简便、快速，结果精确、客观的测试方法，对牙科材料的生物相容性检测是重要的。MTT法用于细胞毒性的检测是近年来使用的一种新方法。该法能敏感、客观地反映出被测试材料对细胞的毒性损害程度，无需特殊设备，操作简便。细胞图像分析仪测定法是通过微机图像处理系统对测试细胞生长的形态及密度面积进行处理以确定其细胞受损程度的一种定量的方法。具有操作简便、快速、客观、定量、可保存及复核等优点。我们选用上述两种方法同时对4种牙科材料进行了细胞毒性检测，结果显示其测试结果相同。因此，可以认为MTT法与细胞图像分析仪测定法用于牙科材料的细胞毒性检测都是较理想的方法，可根据实验室条件选取。
参考文献
1 吕晓迎，H.F.Kappert.牙科材料细胞毒性评定的新方法.中华口腔医学杂志，1995，30：377-379.
2 张彩霞，叶莉明，陈世浩，等.细胞图像分析仪定量评价牙科及医用金属材料的毒性研究.口腔医学纵横，1991，7：108-109.
(收稿：1997-07-23 修回：1998-12-24), http://www.100md.com