养精汤对老龄大鼠生殖系统及下丘脑β-内啡呔的影响
作者：宋韬1 刘敏如2 刘金星3
单位：宋韬(四川省计划生育科学研究所，四川 成都 610041)；刘敏如(成都中医药大学)；刘金星(山东中医药大学)
关键词：养精汤；老龄大鼠；生殖系统；β-内啡呔
成都中医药大学学报990224 摘 要： 为探讨中药复方制剂养精汤对老龄雌性大鼠生殖系统的改善作用及其机理，观察了养精汤对老龄雌性大鼠生殖系统及下丘脑β-内啡呔(β-EOP)的影响。结果表明：养精汤对大鼠子宫有明显的增重作用，并能提高老龄大鼠阴道上皮细胞角化指数，对大鼠的卵巢、黄体、间质腺也有显著的促进作用；同时，养精汤还对老龄大鼠升高的β-EOP水平有明显的降低作用。提示：除对老年雌性大鼠生殖系统的直接作用外，对大鼠下丘脑β-EOP的调节作用，可能是养精汤改善老龄大鼠生殖系统的作用途径之一。
, 百拇医药
中图分类号： R243,R711.11 文献标识码：A 文章编号：1004-0668(1999)02-0046-02
养精汤是成都中医药大学刘敏如教授根据中医“肾藏精，主生殖”及“天癸竭，精少，肾藏衰，形体皆极”等理论，结合临床实践研制而成的、以填补肾精为主要功效的经验方，临床上用于治疗以肾精虚衰为基本病机的妇科病证，疗效显著。为探讨养精汤改善老年女性生殖系统的作用机制，我们观察了养精汤对老龄雌性大鼠生殖系统及下丘脑β-内啡呔(β-EOP)的影响，现将结果报告如下。
1 材料与方法
1.1 实验材料
(1)养精汤：由女贞子、山萸肉、肉苁蓉、黄精、制首乌、紫河车等组成。药材由成都市中药材公司提供。药物制备：养精汤(除紫河车粉外)水煎过滤，浓缩至每mL毫升含生药2g备用；紫河车粉过9＃筛过筛，细粉末按所需用量分包包装，备用。
, 百拇医药
(2)尼尔雌醇(Nilestrol)：北京四环制药厂生产(规格：1mg/片；批号：950612)。
(3)实验动物：Wister雌性大鼠48只，体重250g±25g，约16月龄，由华西医科大学实验动物中心提供。
(4)β-EOP放射免疫药盒：第二军医大学神经生理学教研室提供。
1.2 实验方法
1.2.1 动物分组及给药
将大鼠随机分为4组，每组12只。Ⅰ组为空白对照组，每日上、下午各予生理盐水2mL灌胃1次，；Ⅱ组为尼尔雌醇组，每周灌胃尼尔雌醇与蒸馏水2mL的混悬液1次，剂量为0.15mg/100g；Ⅲ组为养精汤组，每日上、下午各予养精汤2mL灌胃1次，每次加入紫河车粉0.15g/kg；Ⅳ组为紫河车粉组，每日上、下午各予紫河车粉0.15g/kg与蒸馏水2mL的混悬液灌胃各1次。以上各组均连续给药4周。
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1.2.2 阴道细胞学涂片检查
治疗前及停药前1周，将各组大鼠逐只作阴道细胞涂片，巴氏染色，每日1次，连续5天。
1.2.3 子宫湿重的测量
末次给药后24h，静脉采血后将动物断头处死，迅速取出其子宫，立即在分析天平(DF110型)上称其湿重。
1.2.4 卵巢组织学观察
将所取的卵巢组织作HE染色，普通光学显微镜下进行观察。
1.2.5 下丘脑β-EOP的测定
断头处死大鼠取出子宫后，迅速开颅取脑，置100℃生理盐水中加热5min后取出，分离下丘脑(切取前面至视交叉前2mm，后侧至乳头体，侧面从下丘脑裂纹至离底面3mm深的组织)，称重，取下丘脑组织25g±5mg，置于1mL含1当量的醋酸溶液的玻璃匀浆瓶中匀浆，充分酸化后，用1当量氢氧化钠中和，置高速冷冻离心机上以3000r/min离心10min，取上清液，保存于-20℃冰箱中备测。按照放免药盒说明书中的操作方法，采用放射免疫分析法(RIA)测定下丘脑β-EOP的含量。
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2 结果
实验期间，各组动物均有不同程度的死亡，Ⅰ、Ⅱ、Ⅳ组各死亡3只、Ⅲ组死亡2只。
2.1 实验后各组大鼠子宫湿重的比较
结果见表1。
表1 实验后各组大鼠子宫湿重比较(
±s，mg/100g) 组 别
n
子宫湿重
空白对照组
9
181.92±87.8**
, 百拇医药
尼尔雌醇组
9
245.93±30.92*
养精汤组
10
267.06±39.00
紫河四组
9
242.89±70.92*
与养精汤组比较，**P<0.01，*P<0.05
2.2 对各组大鼠阴道细胞学的影响
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实验前后各组大鼠均作阴道细胞学涂片检查，并统计阴道上皮脱落细胞角化指数，结果见表2。
表2 各组大鼠实验前后阴道上皮角化指数(CI) 组 别
n
CI(实验前)
CI(实验后)
空白对照组
9
<20%
<20%
尼尔雌醇组
9
, http://www.100md.com <20%
50%～70%
养精汤组
10
<20%
40%～60%
紫河四组
9
<20%
35%～50%
2.3 对各组大鼠卵巢组织学的影响
(1)卵巢大体检查：Ⅰ组(空白对照组)大鼠的卵巢苍白、萎缩，表面仅见数个卵泡，黄体数目少；Ⅱ组(尼尔雌醇组)卵巢色泽鲜红，表面有丰富的卵泡和黄体；Ⅲ组(养精汤组)卵巢色泽鲜红，表面有丰富的卵泡和黄体；Ⅳ组(紫河车组)卵巢大体检查稍优于Ⅰ组。
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(2)实验后各组大鼠卵巢的卵泡、黄体、间质腺数量比较结果见表3。表3 实验后大鼠卵巢的组织学改变 组 别
n
卵泡数
次级以上
卵泡数
黄体数
间质腺数
空白对照组
9
18
68**
79**
, 百拇医药
53**
尼尔雌醇组
9
18
92*
177*
90*
养精汤组
10
20
170
191
, http://www.100md.com
138
紫河四组
9
18
87*
89*
96*
与空白对照组比较，**P<0.01 *P<0.05
2.4 对各组大鼠下丘脑β-EOP的影响
结果见表4。
表4 实验后大鼠下丘脑β-EOP含量比较 组 别
, 百拇医药
n
β-EOP含量比较*
空白对照组
9
179.83±26.32
尼尔雌醇组
9
138.47±21.54**
养精汤组
10
121.65±23.18**
紫河四组
, 百拇医药
9
146.22±29.76**
与空白对照组比较，**P<0.01
3 讨论
3.1 通过观察我们发现，具有填补肾精功效的养精汤在对老龄大鼠的子宫重量、阴道细胞角化指数以及卵巢卵泡、黄体、间质腺的生长发育方面均有良好的促进作用，这说明了养精汤能够明显延缓老龄雌性大鼠生殖系统的衰老进程。实验结果提示，养精汤能增加老龄大鼠的子宫湿重，说明养精汤对大鼠衰老的子宫具有滋养作用；而对大鼠阴道上皮角化指数及卵巢组织形态学的影响，说明养精汤对老龄大鼠衰老的生殖系统具有直接的抗衰老作用，其能使阴道、卵巢周围组织及供血机能得到改善。
3.2 通过对养精汤对老龄大鼠下丘脑β-内啡呔的影响的观察，发现养精汤对老龄大鼠衰老的生殖系统的作用，除直接作用外，还可能与下丘脑β-EOP的改变有关。
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养精汤对老年雌性大鼠升高的β-EOP有明显的降低作用，且这些作用均优于单味填精补肾药物如紫河车等。这提示了养精汤对老年大鼠生殖系统的影响，亦不能排除养精汤对老龄大鼠性腺轴整体调节的作用。有学者研究认为，补肾药对下丘脑、垂体、卵巢等存在着多元性和双向性的调节作用[1]；而目前的假说认为，更年期卵巢功能衰退，引起甾体激素分泌减少，影响下丘脑内源性阿片肽(尤其是β-EOP)的活性，从而引起多种神经递质的代谢[2]，这可能是养精汤对大鼠卵巢功能衰退及生殖系统具有一定改善作用的作用途径之一。但是，也有学者研究中药和雌激素对去势大鼠下丘脑内源性阿片肽的影响后认为，中药与雌激素对大鼠下丘脑内源性阿片肽的作用途径可能不同[3]，故对养精汤的进一步作用机理，还有待于继续深入研究加以证实。
作者简介：宋韬，女，1961年11月生；医学博士，副主任医师；中医妇科学专业；研究方向：中西医结合防治老年妇科疾病及生殖内分泌研究。
参考文献
1 叶雪清，吕肖峰，余勇，等.更年期综合征发病机理的临床观察.中华妇产科杂志，1990，25(2)：92.
2 归绥琪整理.中西医结合女性生殖调节研讨会纪要.中西医结合杂志，1989，9(3)：192.
3 吕肖峰，叶雪清，李安.甲蓉健宁片和雌激素对去势大鼠下丘脑内源性阿片肽影响的比较.中医杂志，1988，(5)：58.
(收稿日期：1998-09-11), 百拇医药(宋韬1 刘敏如2 刘金星3)
单位：宋韬(四川省计划生育科学研究所，四川 成都 610041)；刘敏如(成都中医药大学)；刘金星(山东中医药大学)
关键词：养精汤；老龄大鼠；生殖系统；β-内啡呔
成都中医药大学学报990224 摘 要： 为探讨中药复方制剂养精汤对老龄雌性大鼠生殖系统的改善作用及其机理，观察了养精汤对老龄雌性大鼠生殖系统及下丘脑β-内啡呔(β-EOP)的影响。结果表明：养精汤对大鼠子宫有明显的增重作用，并能提高老龄大鼠阴道上皮细胞角化指数，对大鼠的卵巢、黄体、间质腺也有显著的促进作用；同时，养精汤还对老龄大鼠升高的β-EOP水平有明显的降低作用。提示：除对老年雌性大鼠生殖系统的直接作用外，对大鼠下丘脑β-EOP的调节作用，可能是养精汤改善老龄大鼠生殖系统的作用途径之一。
, 百拇医药
中图分类号： R243,R711.11 文献标识码：A 文章编号：1004-0668(1999)02-0046-02
养精汤是成都中医药大学刘敏如教授根据中医“肾藏精，主生殖”及“天癸竭，精少，肾藏衰，形体皆极”等理论，结合临床实践研制而成的、以填补肾精为主要功效的经验方，临床上用于治疗以肾精虚衰为基本病机的妇科病证，疗效显著。为探讨养精汤改善老年女性生殖系统的作用机制，我们观察了养精汤对老龄雌性大鼠生殖系统及下丘脑β-内啡呔(β-EOP)的影响，现将结果报告如下。
1 材料与方法
1.1 实验材料
(1)养精汤：由女贞子、山萸肉、肉苁蓉、黄精、制首乌、紫河车等组成。药材由成都市中药材公司提供。药物制备：养精汤(除紫河车粉外)水煎过滤，浓缩至每mL毫升含生药2g备用；紫河车粉过9＃筛过筛，细粉末按所需用量分包包装，备用。
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(2)尼尔雌醇(Nilestrol)：北京四环制药厂生产(规格：1mg/片；批号：950612)。
(3)实验动物：Wister雌性大鼠48只，体重250g±25g，约16月龄，由华西医科大学实验动物中心提供。
(4)β-EOP放射免疫药盒：第二军医大学神经生理学教研室提供。
1.2 实验方法
1.2.1 动物分组及给药
将大鼠随机分为4组，每组12只。Ⅰ组为空白对照组，每日上、下午各予生理盐水2mL灌胃1次，；Ⅱ组为尼尔雌醇组，每周灌胃尼尔雌醇与蒸馏水2mL的混悬液1次，剂量为0.15mg/100g；Ⅲ组为养精汤组，每日上、下午各予养精汤2mL灌胃1次，每次加入紫河车粉0.15g/kg；Ⅳ组为紫河车粉组，每日上、下午各予紫河车粉0.15g/kg与蒸馏水2mL的混悬液灌胃各1次。以上各组均连续给药4周。
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1.2.2 阴道细胞学涂片检查
治疗前及停药前1周，将各组大鼠逐只作阴道细胞涂片，巴氏染色，每日1次，连续5天。
1.2.3 子宫湿重的测量
末次给药后24h，静脉采血后将动物断头处死，迅速取出其子宫，立即在分析天平(DF110型)上称其湿重。
1.2.4 卵巢组织学观察
将所取的卵巢组织作HE染色，普通光学显微镜下进行观察。
1.2.5 下丘脑β-EOP的测定
断头处死大鼠取出子宫后，迅速开颅取脑，置100℃生理盐水中加热5min后取出，分离下丘脑(切取前面至视交叉前2mm，后侧至乳头体，侧面从下丘脑裂纹至离底面3mm深的组织)，称重，取下丘脑组织25g±5mg，置于1mL含1当量的醋酸溶液的玻璃匀浆瓶中匀浆，充分酸化后，用1当量氢氧化钠中和，置高速冷冻离心机上以3000r/min离心10min，取上清液，保存于-20℃冰箱中备测。按照放免药盒说明书中的操作方法，采用放射免疫分析法(RIA)测定下丘脑β-EOP的含量。
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2 结果
实验期间，各组动物均有不同程度的死亡，Ⅰ、Ⅱ、Ⅳ组各死亡3只、Ⅲ组死亡2只。
2.1 实验后各组大鼠子宫湿重的比较
结果见表1。
表1 实验后各组大鼠子宫湿重比较(
±s，mg/100g) 组 别n
子宫湿重
空白对照组
9
181.92±87.8**
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尼尔雌醇组
9
245.93±30.92*
养精汤组
10
267.06±39.00
紫河四组
9
242.89±70.92*
与养精汤组比较，**P<0.01，*P<0.05
2.2 对各组大鼠阴道细胞学的影响
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实验前后各组大鼠均作阴道细胞学涂片检查，并统计阴道上皮脱落细胞角化指数，结果见表2。
表2 各组大鼠实验前后阴道上皮角化指数(CI) 组 别
n
CI(实验前)
CI(实验后)
空白对照组
9
<20%
<20%
尼尔雌醇组
9
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50%～70%
养精汤组
10
<20%
40%～60%
紫河四组
9
<20%
35%～50%
2.3 对各组大鼠卵巢组织学的影响
(1)卵巢大体检查：Ⅰ组(空白对照组)大鼠的卵巢苍白、萎缩，表面仅见数个卵泡，黄体数目少；Ⅱ组(尼尔雌醇组)卵巢色泽鲜红，表面有丰富的卵泡和黄体；Ⅲ组(养精汤组)卵巢色泽鲜红，表面有丰富的卵泡和黄体；Ⅳ组(紫河车组)卵巢大体检查稍优于Ⅰ组。
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(2)实验后各组大鼠卵巢的卵泡、黄体、间质腺数量比较结果见表3。表3 实验后大鼠卵巢的组织学改变 组 别
n
卵泡数
次级以上
卵泡数
黄体数
间质腺数
空白对照组
9
18
68**
79**
, 百拇医药
53**
尼尔雌醇组
9
18
92*
177*
90*
养精汤组
10
20
170
191
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138
紫河四组
9
18
87*
89*
96*
与空白对照组比较，**P<0.01 *P<0.05
2.4 对各组大鼠下丘脑β-EOP的影响
结果见表4。
表4 实验后大鼠下丘脑β-EOP含量比较 组 别
, 百拇医药
n
β-EOP含量比较*
空白对照组
9
179.83±26.32
尼尔雌醇组
9
138.47±21.54**
养精汤组
10
121.65±23.18**
紫河四组
, 百拇医药
9
146.22±29.76**
与空白对照组比较，**P<0.01
3 讨论
3.1 通过观察我们发现，具有填补肾精功效的养精汤在对老龄大鼠的子宫重量、阴道细胞角化指数以及卵巢卵泡、黄体、间质腺的生长发育方面均有良好的促进作用，这说明了养精汤能够明显延缓老龄雌性大鼠生殖系统的衰老进程。实验结果提示，养精汤能增加老龄大鼠的子宫湿重，说明养精汤对大鼠衰老的子宫具有滋养作用；而对大鼠阴道上皮角化指数及卵巢组织形态学的影响，说明养精汤对老龄大鼠衰老的生殖系统具有直接的抗衰老作用，其能使阴道、卵巢周围组织及供血机能得到改善。
3.2 通过对养精汤对老龄大鼠下丘脑β-内啡呔的影响的观察，发现养精汤对老龄大鼠衰老的生殖系统的作用，除直接作用外，还可能与下丘脑β-EOP的改变有关。
, http://www.100md.com
养精汤对老年雌性大鼠升高的β-EOP有明显的降低作用，且这些作用均优于单味填精补肾药物如紫河车等。这提示了养精汤对老年大鼠生殖系统的影响，亦不能排除养精汤对老龄大鼠性腺轴整体调节的作用。有学者研究认为，补肾药对下丘脑、垂体、卵巢等存在着多元性和双向性的调节作用[1]；而目前的假说认为，更年期卵巢功能衰退，引起甾体激素分泌减少，影响下丘脑内源性阿片肽(尤其是β-EOP)的活性，从而引起多种神经递质的代谢[2]，这可能是养精汤对大鼠卵巢功能衰退及生殖系统具有一定改善作用的作用途径之一。但是，也有学者研究中药和雌激素对去势大鼠下丘脑内源性阿片肽的影响后认为，中药与雌激素对大鼠下丘脑内源性阿片肽的作用途径可能不同[3]，故对养精汤的进一步作用机理，还有待于继续深入研究加以证实。
作者简介：宋韬，女，1961年11月生；医学博士，副主任医师；中医妇科学专业；研究方向：中西医结合防治老年妇科疾病及生殖内分泌研究。
参考文献
1 叶雪清，吕肖峰，余勇，等.更年期综合征发病机理的临床观察.中华妇产科杂志，1990，25(2)：92.
2 归绥琪整理.中西医结合女性生殖调节研讨会纪要.中西医结合杂志，1989，9(3)：192.
3 吕肖峰，叶雪清，李安.甲蓉健宁片和雌激素对去势大鼠下丘脑内源性阿片肽影响的比较.中医杂志，1988，(5)：58.
(收稿日期：1998-09-11), 百拇医药(宋韬1 刘敏如2 刘金星3)