头皮针对倒相活动节律大鼠间脑中单胺类神经递质的调整作用
作者：刘雨星 导师 宋开源教授 曾 征 景晓明
单位：刘雨星 导师 宋开源教授(成都中医药大学针灸推拿学院 成都 610075)；曾 征(成都中医药大学附属医院 成都 610072)；景晓明(西南民族学院化学系 成都 610041)
关键词：头皮针；倒相节律；间脑；单胺类神经递质
中国中医基础医学杂志990217 摘 要 “轮班不适应症”和“时差反应”日益威胁着人类的安全和身体健康，已成为世人亟待解决的重要问题。本研究采用颠倒光-暗周期模拟夜班工作造成倒相活动节律大鼠模型，观察了针刺调整倒相活动节律大鼠间脑水平5-HT、5-HIAA、NE、DA的节律特征。结果表明 头皮针有促进间脑水平单胺类神经递质节律恢复正常的作用。
利用小动物活动记录仪连续监测活动-休息节律，颠倒光-暗周期造成倒相活动节律大鼠模型，动态观察了头皮针对其倒相后间脑水平5-HT、5-HIAA、NE、DA的影响。现将有关研究结果报告如下：
, 百拇医药
实验材料与方法
1 实验动物
选用Wistar成年大鼠96只，体重200±20g，均为雄性(由华西医科大学动物实验中心提供)。随机分成对照组、倒相组、针刺组(恢复自然光照结合针刺)、自然恢复组(恢复自然光照)4组，每组24只。然后又将每组再随机分成子、卯、午、酉四个时辰组，每时辰组6只，分笼饲养，自由摄食和饮水。
2 实验方法
2.1 将受试大鼠置于室温20℃，光照强度恒定，LD12:12的正常光—暗周期(07：00～19：00光照，19：00一次日07:00黑暗)的环境中同步驯化10天。
2.2 节律倒相 在同步驯化10天后，运用S—LY型存储器和小动物活动记录仪连续监测各组大鼠的自发性活动。于第7天的下午7时(19：00)颠倒光—暗周期，即由L/D—12hrs转变成D/L—12hrs(19:00—次日07:00光照，07:00～19:00黑暗)，直至第17日，监测大鼠的活动已完全倒相。
, 百拇医药
2.3 针刺方法 在第18日07:00时，将自然恢复组与针刺组的光照由D/L—12hrs恢复成正常L/D—12hrs。将针刺组各时辰组的大鼠予以顶区头皮针，留针10分钟。
2.4 取样 节律倒相组在颠倒光—暗周期11天后，分别于卯、午、酉、子四个时辰组将各对应时辰组大鼠迅速断头，取脑组织，迅速用冰生理盐水洗去血迹，在干净滤纸上吸干，然后置低温冰箱中保存。其余各组按对照组—针刺组—自然恢复组的顺序，在恢复正常光照制(L/D—12hrs)7天后，分别于卯、午、酉、子四个时辰按前法处死大鼠，取脑组织，并保存。
2.5 测定 将所取脑组织的间脑按Glowinsk法切割下来，用电子分析天平称重，参照王氏等方法，分离、提取及显色。用日本岛津RF—510型荧光分光光度计测定间脑5—HT、5—HIAA、NE、DA的含量。
结果
, http://www.100md.com 1 针刺对倒相活动节律大鼠间脑中5—HT含量变化的影响
表1显示，大鼠间脑中5—HT含量存在昼夜节律性变化：光照期高，黑暗期低。其中对照组的峰相位在-196.85°，即13：07时其含量最高，针刺组的峰相位在-183.77°(12:15)，自然恢复组在-164.39°(10:58)。针刺组与自然恢复组其峰相位差为19.38°(约77分钟)，且针刺能使其振幅升高，但对其中值影响不大(P>0.05)。提示针刺能促进其节律相位的恢复。
表1 大鼠间脑中5—HT含量余弦法处理昼夜节律参数(ng/g) 组别
样本
个数
PR
P
, http://www.100md.com F
中值±s
振幅(95%CL)
峰相位(95%CL)
对照组
24
46.345
0.00145
9.069
411.86±23.0
66.871(25.53,108.21)
-196.85 (-235.04,-158.66)
, http://www.100md.com
倒相组
24
58.714
<0.001
14.932
280.47±10.7
39.925(20.69,59.16)
-27.335(-358.53,-56.137)
针刺组
24
51.645
<0.001
, 百拇医药
11.214
286.41±23.6
76.265(33.86,118.67)
-183.77 (-217.55,-149.99)
自然恢复组
24
35.694
0.0097
5.828
287.26±25.2
58.958(13.50,104.43)
, 百拇医药
-164.39(-214.85,-113.93)
注：360度=24小时，参考相位：0000=0度。 2 针刺对倒相活动节律大鼠间脑中5-HIAA含量变化的影响
表2说明，受试各组间脑中5-HIAA含量存在昼夜节律性变化，其中对照组的峰相位在14：43，倒相组的峰相位在22：24时，自然恢复组在19：36时，针刺组在10:20时，且针刺能使中值增高，说明针刺对其相位影响较大。
表2 大鼠间脑中5-HIAA含量余弦法处理昼夜节律参数(ng/g) 组别
样本
个数
PR
P
, http://www.100md.com
F
中值±s
振幅(95%CL)
峰相位(95%CL)
对照组
24
34.43
0.0119
5.513
423.94±30.5
69.073(14.30 ,123.85)
-220.96(-273.43,-168.50)
, http://www.100md.com
倒相组
24
45.528
0.0017
8.776
305.83±14.4
41.269(15.33 ,67.21)
-336.37(-297.43,-15.310)
针刺组
24
35.671
0.0097
, 百拇医药
5.822
339.42±14.6
34.024( 7.770,60.28)
-155.02(-205.52,-104.52)
自然恢复组
24
42.021
0.0033
7.610
306.44±14.8
39.361(12.81,65.92)
, http://www.100md.com
-294.00(-336.45,-251.55)
注：360度=24小时，参考相位：0000=0度；与自然恢复组比较：*P<0.05,**P<0.01。
3 针刺对倒相活动节律大鼠间脑中NE含量变化的影响
表3表明 大鼠间脑中NE含量存在昼夜节律性变化，针刺对其节律相位影响不大，但使其振幅增大。
表3 大鼠间脑中NE含量余弦法处理昼夜节律参数(ng/g) 组别
样本
个数
PR
P
, 百拇医药
F
中值±s
振幅(95%CL)
峰相位(95%CL)
对照组
24
34.404
0.119
5.507
377.82±20.9
38.215(7.686,74.97)
-16.543(-301.29,-69.41)
, 百拇医药
倒相组
24
41.599
0.0035
7.480
398.44±15.4
40.553(12.95,68.16)
-219.37(-262.28,-176.47)
针刺组
24
55.174
<0.001
, 百拇医药
12.924
373.50±32.4
74.808(36.06,113.55)
-353.21(-322.02,-24.40)
自然恢复组
24
38.507
0.0060
6.575
377.03±24.2
59.708(16.35,103.31)
, 百拇医药
-351.35(-304.79,-37.91)
注：360度=24小时，参考相位：0000=0度。
4 针刺对倒相活动节律大鼠间脑中DA含量变化的影响
表4说明，大鼠间脑中DA含量存在昼夜节律性变化，其中对照组的峰相位在-14.48°(00:58)，自然恢复组的峰相位在-267.67°(17:51)，针刺组的峰相位在-333.91°(22:16)。且针刺能使其中值显著增大，能明显加速大鼠间脑中DA昼夜节律倒相后的相位恢复。 表4 大鼠间脑中DA含量余弦法处理昼夜节律参数(ng/g)
组别
样本
个数
PR
, 百拇医药
P
F
中值±SE
振幅(95%CL)
峰相位(95%CL)
对照组
24
62.707
<0.001
17.655
437.91±41.4
111.78 (62.25,161.32)
, http://www.100md.com
- 14.479(-348.18,-44.78)
倒相组
24
44.705
0.0019
8.489
573.38±23.8
66.925(24.16,109.69)
-228.70 (-268.41,-188.97)
针刺组
24
, http://www.100md.com 38.386
0.0062
6.541
569.33±29.9
73.737(20.08,127.41)
-333.91 (-287.19,-20.63)
自然恢复组
24
66.026
<0.001
20.406
, 百拇医药 491.05±41.4
119.63 (70.33,168.94)
-267.67 (-292.01,-243.33)
注：360度=24小时，参考相位：0000=0度；与自然恢复组比较：P<0.05, P<0.01。讨论
活动—休息的交替过程与中枢单胺类神经递质(5—HT、NE、DA)含量的动态变化密切相关。它们之间存在相互拮抗和相互协同的关系，5—HT对慢波睡眠的发生和维持起重要作用，CA(NE、DA)的中枢作用以兴奋为主。本研究表明，在正常情况下，大鼠间脑水平5—HT、5—HIAA具有昼高夜低的节律模式，在大鼠的休息相(白天)中5—HT、5—HIAA的含量均较高，5—HIAA为5—HT的主要代谢产物，说明间脑水平5—HT能神经元在大鼠的休息相中活动较多，这有利于大鼠白天休息的维持。而NE、DA则以与之相反的节律模式—昼低夜高发生变化，且大鼠间脑水平NE、DA节律峰值相位在01:00～02：00，这与大鼠在午夜具有最大活动量一致。且其NE、DA含量节律性变化基本同步，有利于在黑暗期协同维持大鼠的活动。针刺能使间脑中5—HIAA含量明显增高(与自然恢复组比较P<0.01)，说明针刺可使间脑干中5—HT的释放和利用增多。且可使其DA含量增高，能激发间脑中DA能神经元的活动，使间脑NE的振幅升高，增强其含量变化的节律性，有利于机体活动节律性的维持，针刺促进了5—HT、5—HIAA、DA节律倒相后的恢复，这就为针刺调整倒相活动节律提供了神经生化依据。
, http://www.100md.com
作者简介：刘雨星，男，30岁，助理研究员。成都中医药大学针推学院。1995年硕士研究生毕业后留校任教。
参考文献
[1] Glowinski J.et, al:Regional studies of catechilamines in the rat brain. J.Neurochen,1966；13:655～699
[2] 王孝媛，等.苏州医学院学报 1985；(1)：10～14
[3] 北京医学院基础部针麻原理研究组生理组编.中枢神经介质概论.第1版.北京：科学出版社，1977：359, http://www.100md.com
单位：刘雨星 导师 宋开源教授(成都中医药大学针灸推拿学院 成都 610075)；曾 征(成都中医药大学附属医院 成都 610072)；景晓明(西南民族学院化学系 成都 610041)
关键词：头皮针；倒相节律；间脑；单胺类神经递质
中国中医基础医学杂志990217 摘 要 “轮班不适应症”和“时差反应”日益威胁着人类的安全和身体健康，已成为世人亟待解决的重要问题。本研究采用颠倒光-暗周期模拟夜班工作造成倒相活动节律大鼠模型，观察了针刺调整倒相活动节律大鼠间脑水平5-HT、5-HIAA、NE、DA的节律特征。结果表明 头皮针有促进间脑水平单胺类神经递质节律恢复正常的作用。
利用小动物活动记录仪连续监测活动-休息节律，颠倒光-暗周期造成倒相活动节律大鼠模型，动态观察了头皮针对其倒相后间脑水平5-HT、5-HIAA、NE、DA的影响。现将有关研究结果报告如下：
, 百拇医药
实验材料与方法
1 实验动物
选用Wistar成年大鼠96只，体重200±20g，均为雄性(由华西医科大学动物实验中心提供)。随机分成对照组、倒相组、针刺组(恢复自然光照结合针刺)、自然恢复组(恢复自然光照)4组，每组24只。然后又将每组再随机分成子、卯、午、酉四个时辰组，每时辰组6只，分笼饲养，自由摄食和饮水。
2 实验方法
2.1 将受试大鼠置于室温20℃，光照强度恒定，LD12:12的正常光—暗周期(07：00～19：00光照，19：00一次日07:00黑暗)的环境中同步驯化10天。
2.2 节律倒相 在同步驯化10天后，运用S—LY型存储器和小动物活动记录仪连续监测各组大鼠的自发性活动。于第7天的下午7时(19：00)颠倒光—暗周期，即由L/D—12hrs转变成D/L—12hrs(19:00—次日07:00光照，07:00～19:00黑暗)，直至第17日，监测大鼠的活动已完全倒相。
, 百拇医药
2.3 针刺方法 在第18日07:00时，将自然恢复组与针刺组的光照由D/L—12hrs恢复成正常L/D—12hrs。将针刺组各时辰组的大鼠予以顶区头皮针，留针10分钟。
2.4 取样 节律倒相组在颠倒光—暗周期11天后，分别于卯、午、酉、子四个时辰组将各对应时辰组大鼠迅速断头，取脑组织，迅速用冰生理盐水洗去血迹，在干净滤纸上吸干，然后置低温冰箱中保存。其余各组按对照组—针刺组—自然恢复组的顺序，在恢复正常光照制(L/D—12hrs)7天后，分别于卯、午、酉、子四个时辰按前法处死大鼠，取脑组织，并保存。
2.5 测定 将所取脑组织的间脑按Glowinsk法切割下来，用电子分析天平称重，参照王氏等方法，分离、提取及显色。用日本岛津RF—510型荧光分光光度计测定间脑5—HT、5—HIAA、NE、DA的含量。
结果
, http://www.100md.com 1 针刺对倒相活动节律大鼠间脑中5—HT含量变化的影响
表1显示，大鼠间脑中5—HT含量存在昼夜节律性变化：光照期高，黑暗期低。其中对照组的峰相位在-196.85°，即13：07时其含量最高，针刺组的峰相位在-183.77°(12:15)，自然恢复组在-164.39°(10:58)。针刺组与自然恢复组其峰相位差为19.38°(约77分钟)，且针刺能使其振幅升高，但对其中值影响不大(P>0.05)。提示针刺能促进其节律相位的恢复。
表1 大鼠间脑中5—HT含量余弦法处理昼夜节律参数(ng/g) 组别
样本
个数
PR
P
, http://www.100md.com F
中值±s
振幅(95%CL)
峰相位(95%CL)
对照组
24
46.345
0.00145
9.069
411.86±23.0
66.871(25.53,108.21)
-196.85 (-235.04,-158.66)
, http://www.100md.com
倒相组
24
58.714
<0.001
14.932
280.47±10.7
39.925(20.69,59.16)
-27.335(-358.53,-56.137)
针刺组
24
51.645
<0.001
, 百拇医药
11.214
286.41±23.6
76.265(33.86,118.67)
-183.77 (-217.55,-149.99)
自然恢复组
24
35.694
0.0097
5.828
287.26±25.2
58.958(13.50,104.43)
, 百拇医药
-164.39(-214.85,-113.93)
注：360度=24小时，参考相位：0000=0度。 2 针刺对倒相活动节律大鼠间脑中5-HIAA含量变化的影响
表2说明，受试各组间脑中5-HIAA含量存在昼夜节律性变化，其中对照组的峰相位在14：43，倒相组的峰相位在22：24时，自然恢复组在19：36时，针刺组在10:20时，且针刺能使中值增高，说明针刺对其相位影响较大。
表2 大鼠间脑中5-HIAA含量余弦法处理昼夜节律参数(ng/g) 组别
样本
个数
PR
P
, http://www.100md.com
F
中值±s
振幅(95%CL)
峰相位(95%CL)
对照组
24
34.43
0.0119
5.513
423.94±30.5
69.073(14.30 ,123.85)
-220.96(-273.43,-168.50)
, http://www.100md.com
倒相组
24
45.528
0.0017
8.776
305.83±14.4
41.269(15.33 ,67.21)
-336.37(-297.43,-15.310)
针刺组
24
35.671
0.0097
, 百拇医药
5.822
339.42±14.6
34.024( 7.770,60.28)
-155.02(-205.52,-104.52)
自然恢复组
24
42.021
0.0033
7.610
306.44±14.8
39.361(12.81,65.92)
, http://www.100md.com
-294.00(-336.45,-251.55)
注：360度=24小时，参考相位：0000=0度；与自然恢复组比较：*P<0.05,**P<0.01。
3 针刺对倒相活动节律大鼠间脑中NE含量变化的影响
表3表明 大鼠间脑中NE含量存在昼夜节律性变化，针刺对其节律相位影响不大，但使其振幅增大。
表3 大鼠间脑中NE含量余弦法处理昼夜节律参数(ng/g) 组别
样本
个数
PR
P
, 百拇医药
F
中值±s
振幅(95%CL)
峰相位(95%CL)
对照组
24
34.404
0.119
5.507
377.82±20.9
38.215(7.686,74.97)
-16.543(-301.29,-69.41)
, 百拇医药
倒相组
24
41.599
0.0035
7.480
398.44±15.4
40.553(12.95,68.16)
-219.37(-262.28,-176.47)
针刺组
24
55.174
<0.001
, 百拇医药
12.924
373.50±32.4
74.808(36.06,113.55)
-353.21(-322.02,-24.40)
自然恢复组
24
38.507
0.0060
6.575
377.03±24.2
59.708(16.35,103.31)
, 百拇医药
-351.35(-304.79,-37.91)
注：360度=24小时，参考相位：0000=0度。
4 针刺对倒相活动节律大鼠间脑中DA含量变化的影响
表4说明，大鼠间脑中DA含量存在昼夜节律性变化，其中对照组的峰相位在-14.48°(00:58)，自然恢复组的峰相位在-267.67°(17:51)，针刺组的峰相位在-333.91°(22:16)。且针刺能使其中值显著增大，能明显加速大鼠间脑中DA昼夜节律倒相后的相位恢复。 表4 大鼠间脑中DA含量余弦法处理昼夜节律参数(ng/g)
组别
样本
个数
PR
, 百拇医药
P
F
中值±SE
振幅(95%CL)
峰相位(95%CL)
对照组
24
62.707
<0.001
17.655
437.91±41.4
111.78 (62.25,161.32)
, http://www.100md.com
- 14.479(-348.18,-44.78)
倒相组
24
44.705
0.0019
8.489
573.38±23.8
66.925(24.16,109.69)
-228.70 (-268.41,-188.97)
针刺组
24
, http://www.100md.com 38.386
0.0062
6.541
569.33±29.9
73.737(20.08,127.41)
-333.91 (-287.19,-20.63)
自然恢复组
24
66.026
<0.001
20.406
, 百拇医药 491.05±41.4
119.63 (70.33,168.94)
-267.67 (-292.01,-243.33)
注：360度=24小时，参考相位：0000=0度；与自然恢复组比较：P<0.05, P<0.01。讨论
活动—休息的交替过程与中枢单胺类神经递质(5—HT、NE、DA)含量的动态变化密切相关。它们之间存在相互拮抗和相互协同的关系，5—HT对慢波睡眠的发生和维持起重要作用，CA(NE、DA)的中枢作用以兴奋为主。本研究表明，在正常情况下，大鼠间脑水平5—HT、5—HIAA具有昼高夜低的节律模式，在大鼠的休息相(白天)中5—HT、5—HIAA的含量均较高，5—HIAA为5—HT的主要代谢产物，说明间脑水平5—HT能神经元在大鼠的休息相中活动较多，这有利于大鼠白天休息的维持。而NE、DA则以与之相反的节律模式—昼低夜高发生变化，且大鼠间脑水平NE、DA节律峰值相位在01:00～02：00，这与大鼠在午夜具有最大活动量一致。且其NE、DA含量节律性变化基本同步，有利于在黑暗期协同维持大鼠的活动。针刺能使间脑中5—HIAA含量明显增高(与自然恢复组比较P<0.01)，说明针刺可使间脑干中5—HT的释放和利用增多。且可使其DA含量增高，能激发间脑中DA能神经元的活动，使间脑NE的振幅升高，增强其含量变化的节律性，有利于机体活动节律性的维持，针刺促进了5—HT、5—HIAA、DA节律倒相后的恢复，这就为针刺调整倒相活动节律提供了神经生化依据。
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作者简介：刘雨星，男，30岁，助理研究员。成都中医药大学针推学院。1995年硕士研究生毕业后留校任教。
参考文献
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[2] 王孝媛，等.苏州医学院学报 1985；(1)：10～14
[3] 北京医学院基础部针麻原理研究组生理组编.中枢神经介质概论.第1版.北京：科学出版社，1977：359, http://www.100md.com