西沙必利对部分肠神经递质释放的影响
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作者：徐三平 易粹琼
单位：同济医大附属协和医院消化科(武汉 430022)
关键词：西沙必利；乙酰胆碱；一氧化氮；P物质；血管活性肠肽
临床消化病杂志990209 摘 要 实验观察促胃肠运动药物西沙必利对豚鼠胃窦及结肠的肠神经内乙酰胆 碱、一氧化氮、P物质及血管活性肠肽的影响。豚鼠30只，18只为试验组，西沙必利2.5mg灌胃，每天3次，连续3天，第4天取材。乙酰胆碱、一氧化氮分别采用组织化学亚铁氰化铜 及还原性辅酶Ⅱ方法进行显示。P物质及血管活性肠肽按免疫组化PAP法进行。所有切片在光 镜下进行对比观察，用图象分析仪测定其肌间神经丛光密度值。结果：试验组肠神经丛内乙 酰胆碱、一氧化氮光密度增加，P物质则减少，与对照比较有显著意义，血管活性肠肽变化 不明显。结果提示西沙必利促进肠神经内乙酰胆碱、一氧化氮分泌，P物质分泌减少。
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The Influence of Cisapride on the Realease of Some Neurotran smitters in Enteric Nervous System of Guinea-pig
Xu Shan-pin, Yi Cui-qion
Digestire Department, Union Hospital, Tongji Medical University
Abstract The effect of prokinetic drug cisapride was observed o n the release of some neurotransmitters in enteric nervous system of guinea-pig. 30 animals were divided into experimental and control grou p cisapride 2.5 mg 3 tims a day was given to experimeatal group, fo r 3 day, on the forth day, samples were taken from antrum and colon . The acetycholine and nitric oxide were showed with histochemical met hods by knorvosly-roots method and NADPH-Ⅱ. Substance P and vasoacti ve intestinal peptide were showed with immunohistocheinical method by P AP. All the sections were observed under microscope. The optical densi ty of myenteric plexues were measured with mitrospheregraph. Results: I n the experimuntal. Ach, NO were stained strong, the optical density increase significent. SP was stained thin, the optical deasity decrease significent. Conclusions: Cisapride increase the Ach, NO release from the enteric nervou system, but SP release decline.
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Key words Cisapride Acetycholine Nitric oxide Substance P Vasoac tive intestinal peptide
西沙必利(Cisapride)作为促胃肠运动药物在临床上广泛应用，其作用 机理据认为是刺激肠肌间神经丛5-HT4受体，促进乙酰胆碱的释放。其确切机理有待进一 步研究。近年来神经生物学证实，在肠神经系统(Enteric nervous system, ENS)中主要 兴奋性递质是乙酰胆碱(Acetycholine, Ach)，主要抑制性递质是一氧化氮(Nitric oxide , NO)。本文试图通过肠神经系统的形态学对比观察，结合图象分析光密度测定，了解西沙 必利对乙酰胆碱、一氧化氮、P物质(Substance P, SP)、血管活性肠肽(Vasoactive in testinal peptide, VIP)的影响，以探讨西沙必利促胃肠运动作用的神经机制。
, http://www.100md.com 1 材料及方法
豚鼠30只，体重250～280g/只，雌雄不拘，分成5组，每组随机选取4只为试验组，2只为对照组。试验组豚鼠采用西沙必利(西安杨森制药有限公司生产)悬液灌胃，2.5mg每日 3次，连续3天。对照组和试验组饲养条件相同。第4天5组中的试验与对照动物均剖腹取材。 分别取全层胃窦、近端结肠(离回盲瓣5cm)标本，4%冷多聚甲醛固定。5小时后冰冻切片进 行Ach、NO组化染色，12小时后冰冻切片进行VIP、SP免疫组化染色。切片厚均为20μm。A ch采用亚铁氰化铜法显示乙酰胆碱脂酶(Ach E)表示，NO采用还原型辅酶Ⅱ—二磷酸酶法显 示一氧化氮合成酶(Nitric oxide synthase, NOS)表示。Ach E的孵育液组成为：碘化 乙酰硫代胆碱、硫酸铜、铁氰化钾、四异丙基焦磷酰胺、醋酸、枸椽酸钠。NOS孵育液组成 为1mmol/L还原型辅酶Ⅱ、0.5mmol/L 四氮唑蓝、0.3% triton-x100。分别浸染0 .5～1小时。SP、VIP染色按免疫组化PAP法进行。
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结果分析：在光镜下对比观察试验组与对照组切片神经纤维及胞体着色情况。在图象分析 仪下，对每张切片随机选取3个肌间神经丛进行光密度测定，3者均值代表该片光密度值。然 后两组间各神经递质光密度采用统计，进行t检验。
2 结 果
胃窦、结肠各层均可见丰富的Ach E、NOS阳性纤维，阳性胞体在粘膜下丛及肌间丛均易 见。无论是Ach E还是NOS，试验组均比对照组深染、易见。SP阳性纤维在环肌及粘膜肌层 易见，VIP阳性纤维则在粘膜层易见，肌层少见。SP、VIP肌间丛易见，粘膜下丛罕见。两组 比较，实验组SP着色浅淡，反应弱，而在VIP两组无明显差异。对两组肌间丛光密度—平均 积分光密度进行比较，其中Ach E、NOS在实验组显著升高，而SP相反减低，VIP变化不明显 (见附表)。
附表 胃窦及结肠肠肌间神经丛的光密度 递质
, 百拇医药 部位
光密 度
试验组(n=20)
对照组(n=10)
P
Ach E
G
X
I
0.2905±0.0132
2 11.7470±127.2980
0.2732±0.0126
, 百拇医药 135.7720±70.6170
<0.05
<0.05
C
X
I
0.3131±0.0111
171.1790±29.3861
0.2855±0.01 05
46.4450±9.2110
<0.05
<0.05
, 百拇医药
NOS
G
X
I
0.2788±0.0165
62.4120±37.0280
0.1068±0.0112
10.0400±4.9600
<0.05
<0.05
C
X
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I
0.3003±0.0215
124.5450±67.9600
0.2497±0.02 77
63.6920±32.4400
<0.05
<0.05
SP
G
X
I
0.1026±0.0097
, 百拇医药
14.2939±0.7210
0.1146±0.0052
40.8420±6.2940
< 0.05
<0.05
C
X
I
0.0943±0.0055
39.9200±10.6112
0.1138 ±0.0072
52.5970±10.0840
, 百拇医药
<0.05
<0.05
注：Ach E：乙酰胆碱酯酶，NOS：一氧化氮合成酶，SP：P物质，X ：平均光密度，I：积分光密度。
3 讨 论
西沙必利是全胃肠道促动力药，通过激动S-HT4或部分拮抗S-HT3受体，刺激肠神经 丛乙酰胆碱释放。显示乙酰胆碱酯酶是目前显示乙酰胆碱的公认方法，乙酰胆碱酯酶活性强 则表明乙酰胆碱释放增加。本文结果显示试验组乙酰胆碱酯酶活性增强，神经着色深染，神 经丛易见，平均光密度及积分光密度增加，表明乙酰胆碱释放增加，从形态学上支持了西沙 必利促进肌间神经丛乙酰胆碱释放的理论。
一般认为一氧化氮是非胆碱能非肾上腺素能的主要抑制性神经递质，参与胃肠舒张，血流 调控及粘膜分泌调节[1～3]。西沙必利对一氧化氮影响未见报道，有文献报道西沙 必利增强胃肠舒张运动，是否通过一氧化氮介导不得而知。我们推测西沙必利一方面通过一 氧化氮加强胃肠舒张反射，从而使胃肠运动在更高水平上协调一致。近年来报道一氧化氮具 有粘膜保护、调节粘膜血流量等作用，其促进一氧化氮释放的意义尚待进一步探讨。
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在临床上对无胃肠运动障碍的功能性消化不良患者西沙必利同样有效，提示其除了促进胃 肠运动作用外可能还有其它药理作用。近年一些研究提示在功能性消化不良患者中，存在胃肠感觉异常，西沙必利是否影响胃肠感觉神经未见报道。SP是体内最强的促进胃肠运动的递质，也是胃肠感觉神经元的主要神经递质。本文观察西沙必利作用后在肠神经SP反应性减低，这与国外学者观察到其作用后胃粘膜含量测定结果一致[4]，提示促动力作用并不通过SP。西沙必利是否通过减少SP释放，降低胃肠敏感性，从而治疗功能性消化不良，有待进一步探讨。
参考文献
1 Mark ES, Joseph H, Siurs wski. Role of nitric oxide in gastro intestinal and hepatic function and desease. Gastroeuterology，199 2,103∶1928.
, 百拇医药
2 Mark ES, Anthony J, Michuel GS, et al. Nitric oxide mediates inh ibitory nerve input in human and canine jeiumum. Gastroenterology,1993,1 04∶398.
3 Pautetzki JG, Sharkey KA, Bavison JS， et al. Involvement of L-a rginine-nitric oxide pathways in neural relaxation of the sphincter of oddi, Ear-J-pkarmacol，1993,232∶263-70.
4 Koop H, Monnikes H, Koop I, et al. Effect of the prokinetic dr ug cisapride on gastrointestinal hormone release. Scand J Gastroenterol, 1986,21∶907-913.
(1998 12 08收稿), http://www.100md.com