非溃疡性消化不良患者血浆及胃窦粘膜一氧化氮含量的变化
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作者：余 跃 侯晓华 茹立强
单位：余 跃 侯晓华 同济医科大学附属协和医院消化内科(武汉 430022)；茹立强 神经生物学教研室
关键词：非溃疡性消化不良；一氧化氮
临床消化病杂志990208 摘 要 目的：探讨非溃疡性消化不良(NUD)患者血浆及胃窦粘膜中一氧化氮(NO)含量有无变化以及它在NUD疾病过程中的可能作用和临床意义。方法：应用亚硝酸盐法测定31例NUD患者血浆NO含量，其中12例患者胃液体排空延迟(NUD2组)，19例患者胃液体排空 正常(NUD1组)；再用NADPH—黄递酶组织化学方法结合彩色图像分析系统测定这些患者胃窦粘膜NO含量，并以14例相当的正常人作对照。结果：NUD2组患者血浆NO含量明显高于NUD1组及对照组(P<0.01)；胃窦粘膜中NO含量NUD2组亦显著高于NUD1组及对照组(P<0.01)。西沙必利使NUD患者胃液体排空功能及临床症 状改善，也使其血浆和胃窦粘膜中NO含量明显升高(P<0.01)。结论：NO含量升高与胃液体排空延迟相关，NO在NUD的疾病过程中可能有一定的作用。
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Nitric Oxide in Plasma and Antral Mucosa in Non-ulcer Dyspe psia
Yu Yue， Hou Xiao-hua, Ru Li-qing
Department of Gastroenterlolgy of Union Hospital, Tongji Medical Unive rsity
Abstract Purpose: To explore the change of nitric oxide(NO) in plasma and antral mucosa and whether NO may play a role in non-ul cer dyspepsia(NUD). Methods: levels of NO in plasma were measured by levels of NO-3/NO-2 in 31 patients with MUD, including 12 pati ents with delayed gastric liquid emptying (NUD2 group), 19 patients with normal gastric emptying (NUD1 group); NO in antral mucosa was studied by NADPH-diaphorase histochemical methods, and quantitatively me asured with image analyser. 14 "healthy subjects" as control group. Re sults: The plasma NO in NUD2 group was significantly higher than th at in NUD1 and control groups (P<0.01); NO of antral mucosa in NUD2 group was much more than that of NUD1 and contr ol groups(P<0.01). Cisapride improved the gastric emptyin g and symptoms, and elevated significantly NO in plasma and antral mu cosa in NUD2 group(P<0.01). Conclusion: Abnormal change of NO was associated with delayed gastric liquid cmptying, and play some roles in NUD.
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Key words Non-ulcer dyspepsia Nitric oxide
非溃疡性消化不良(Non-ulcer dyspepsia, NUD)是一种胃肠功能紊 乱性疾病，发病率甚高，而机制不完全清楚。有研究表明NUD患者胃窦动力低下，胃排空延迟[1，2]。一氧化氮(Nitric xide,NO),一种新型胃肠道内非肾上腺素能非胆碱 能(Non adrenergical non-cholinergical, NANC)抑制性神经递质已引起了许多学者的 注意。NO在胃运动和排空中的作用尚存争议[3～6]，而关于NUD与NO的关系国内外 报道甚少[7]。本文同时检测血浆(亚硝酸法测NO-3/NO-2水平)及胃窦粘 膜中(以NAOPH-黄递酶组化法染色显示一氧化氮合成酶(Nitric oxide synthase,NOS) 阳性产物，结合图像分析系统来定量反映NO水平)NO含量，旨在探讨NO在NUD疾病过程中的可 能作用及其意义。
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1 对象和方法
1.1 对象 NUD组：31例，以国际公认的诊断标准[8]在门诊患者中选取，男14例，女17例，年龄19岁～66岁，平均36岁。病程1月～5年，平均3.75年。以B超测定 胃液体排空功能(方法同以往报道[4])的结果进行分组。NUD1组(n=19)：胃液体排空正常，男9例，女10例，平均年龄39.7岁，平均病程3.2年；NUD2组 (n=12)：胃液体排空延迟，男5例，女7例，平均年龄35岁，平均病程3.9年 。其中NUD2组患者服用西沙必利(Cisapride,5mg,tid)，4周后复查B超及胃镜，胃镜检 查当日早晨抽空服血2ml测血浆NO。对照组：14例，为健康人和胃息肉内镜下切除术后复 查者。男8例，女6例，年龄21～63岁，平均38岁。无消化道及神经系统症状与体征，无近期用药史。近期内服用过促动力药物者不列入本研究。
, 百拇医药 1.2 方法 血浆标本：空腹12小时后，次日早晨抽静脉血2ml，采血 后立即以3000r/min离心10分钟，取上清液4℃贮存待测。以改良的Greiss法[10] 进行NO-3/NO-2水平的测定。组织标本：胃镜直视下距幽门2～3cm处钳取胃窦 粘膜组织3块，1块按常规送病理检查，另2块立即放入4% Millong氏多聚甲醛液中4℃固定6 ～24小时待测。后入20%蔗糖溶液中过夜，AQ恒冷箱连续冰冻切片，20μm厚度，用显微镜 确定含粘膜肌标本按NADPH-黄递酶组化法[11]染色。切片入含有1mol/Lβ-N ADPH、0.25mmol/L硝基四氮唑蓝(NBT)、0.3%Tritonx-100、0.1mol/LTris-HCL( pH=7.6)溶液中37℃孵育30分钟～1小时。标本漂洗后，梯度酒精脱水，二甲苯透明，中性树 胶封片，显微镜下观察，图像定量分析(MPAIS-500彩色图像分析仪为同济医科大学太阳公司产品)。显微镜下NOS阳性产物(包括神经纤维及末梢，神经元胞体)为蓝色，与背景同色为阴性。在10×10倍视野下摄取图像，计算机自动开启了19122μm2的测量窗口，在此 固定窗口下对NOS阳性产物的面积进行测定，每组测定30次，并进行统计学处理。组间数据 应用表示，采用t检验。
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2 结 果
2.1 各组血浆NO-3/NO-2水平 表1示NUD2组血浆NO含量明显高于NUD1组及对照组。
表1 三组血浆NO-3/NO-2含量(×104nmol/L) 组 别
n
NO3/NO2含量
对照组
14
9.17±1.68
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NUD1组
19
9.40±3.40
NUD2组
12
13.60±2.52*
*P<0.01 vs对照组
2.2 各组胃窦粘膜中NOS阳性产物情况 NUD2组胃窦粘膜肌NOS阳性纤维及末梢较对照组和NUD1组增粗，增多，染色增强。在粘膜下层易见到NOS阳性神经元胞 体及丛内突起。对照组NOS阳性产物与NUD1组基本类似。根据3组胃窦粘膜肌NOS阳性产物 图像分析结果，我们发现NUD2组胃窦粘膜肌内NOS阳性神经纤维及末梢的面积为1536.75 ±82.20μm2，NUD1组仅为676.72±76.77μm2，而对照组为624.81±35.01μm2。NUD2组胃窦粘膜肌内NOS阳性神经纤维及末梢的面积较对照组、NUD1组明显增加，差异有极显著性意义(P<0.01)，而对照组与NUD1组间差异无显著性 (P>0.05)。
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2.3 西沙必利对NUD的疗效观察 西沙必利治疗后，NUD2组胃液体排 空功能及症状明显改善(P<0.01)，而无论是血浆还是胃窦粘膜中NO含量 均明显增高(P<0.01)。见表2。表2 西沙必利治疗NUD效果
治疗前
治疗后
T1/2(min)
44.82±12.81
21 .03±5.80*
症状积分
8.41±0.30
3.21±0.45*
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血浆NO(×104 nmol/L)
13.60±2.52
18.21±3.74*
胃窦粘膜NO(μm2)
1576.75±82.20
1712.45±103.01*
*P<0.01 vs治疗前
3 讨 论
NUD的发病机制尚未完全明了，但多数研究认为与胃运动障碍有关[1～2]。NO作 为一种新型胃肠运动抑制性NANC神经递质，对胃运动和排空有重要调节作用，而NO在胃运动 和排空中的作用尚存争议[3～6]，且关于NUD与NO的关系国内外报道甚少[7] 。
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Konturek等[3]给志愿者舌下含服NO供体硝酸甘油后发现胃液体排空显著延迟， 因而认为外源性NO对胃排空加速的患者可能有治疗作用。给志愿者静脉注入NOS抑制剂L-NM MA和NO前体左旋精氨酸后，他们发现内源性NO也影响人的胃液体排空，阻断内源性NO合成后 使胃排空显著增加，这可能是由于抑制了胃的受纳性舒张所致[4]。Vamatoe等 [5]对离体胃肌条进行检测进一步证实了NO而非ATP介导胃的抑制性神经传递；然而Orih ata等[6]给狗静脉注入NOS抑制剂L-NAME后得出了相反的结论。正常状态下的NO-NANC通路通过抑制胃十二指肠协调运动而加速胃固体排空，因此NO在胃排空的作用尚未确定 。
本研究发现胃液体排空延迟的NUD2组患者血浆NO含量明显高于NUD1组和对照组，进而发现胃液体排空延迟的NUD2组胃窦粘膜中的NO也较NUD1组和对照组显著增高。这说明NU D患者机体内NO含量升高与胃液体排空延迟相关，机体过量NO产生抑制了胃液体排空。我们的结果与国外报道NO抑制胃排空的结果相一致[3～5]。NUD2组患者血浆NO含量明 显升高机理不明。NO合成与分泌受许多因素调节，胃酸分泌，胃肠运动，迷走神经功能异常 等可能影响其产生。本研究中胃窦粘膜中NO含量也明显升高，是否某调节机制作用于该处使 NO合成与分泌增加并释放入血出现血浆NO含量增高尚难确定。
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新一代全胃肠道促动力药物—西沙必利，治疗NUD有效且耐受性好。我们给NUD2组患者 服用西沙必利，结果发现随着NUD患者胃液体排空功能的改善，临床症状也明显消失。这说 明胃运动障碍是NUD的原因之一。但本研究还观察到NUD2组患者服用西沙必利后血浆及胃 窦粘膜中NO含量均显著升高，是否与西沙必利诱导激活不同类型NOS，使NO合成与分泌增加 有关，尚难以肯定。这一现象也给我们提出了进一步的研究课题。因此深入研究西沙必利对 胃肠激素或神经递质的调节作用具有十分重要的临床意义。
总之，本研究提示NUD患者存在全身或局部NO含量的异常改变，这可能在NUD发病过程中具 有一定的作用。西沙必利治疗后血浆及胃窦粘膜中的NO含量均显著升高，其机理有待于进一 步探讨。
参考文献
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(1998 08 16收稿), 百拇医药