血管紧张素转换酶抑制剂所致咳嗽与血管紧张素转换酶基因多态性的关系
作者：吴剑卿 赵卫红
单位：南京医科大学第一附属医院 邮政编码：210029
关键词：血管紧张素转换酶 基因多态性 咳嗽
江苏医药990302 摘要 为了探讨血管紧张素转换酶抑制剂(ACEI)所致咳嗽与血管紧张素转换酶(ACE)基因多态性的关系，应用聚合酶链反应(PCR)方法，检测52例由于服用ACEI引起的咳嗽患者及70例未发生咳嗽的患者ACE基因的插入(I)/缺失(D)多态性，并采用紫外法检测ACE活性。结果发现在ACEI引起咳嗽组Ⅱ型占46.2%，而无咳嗽组为30.0%，两组相比其差异具有统计学意义(P<0.05)；咳嗽组ACE活性低于无咳嗽组(P<0.01)。提示：ACEI所致咳嗽与ACE基因多态性有关，ACE基因多态性的分析有助于ACEI的合理使用。
The Association between the Gene Polymorphism of Angiotensin
, 百拇医药
Converting Enzyme (ACE) and ACE inhibitor-induced cough
Wu Jianqing et al
The First Affiliated Hospital of Nanjing Medical University, Nanjing
Abstract To investigate the association between angiotensin converting enzyme (ACE) gene polymorphism and ACE inhibitor (ACEI)-induced cough, polymerase chain reaction (PCR) was used to examine ACE I/D polymorphism and serum ACE activity was detected by using spectrophometer colorimitry in 52 ACEI-induced cough subjects and 70 no cough subjects. The results were:(1) The frequencies of ACE Ⅱ was 46.2% in cough group and 30.0% in the no cough group; (2) The activity of ACE in cough group was lower than that in no cough group. This study suggests that ACEI-induced cough may be related to ACE gene polymorphism, and the detection of ACE gene polymorphism may play a role in the rational treatment of ACEI.
, 百拇医药
Key words Angiotensin converting enzyme Gene polymorphism Cough
自70年代末血管紧张素转换酶抑制剂(ACEI)用于治疗高血压病、心衰等疾病以来，其应用日益广泛。但是，直到1985年ACEI引起的咳嗽反应才引起人们的重视。据国外报道[1]，ACEI常见的干咳发生率为15%；国内的报道亦高达10～20%[2]。ACEI引起咳嗽的确切机制仍未明了[1，3，4，5]，随着ACEI基因多态性研究的深入，国外学者[1]研究发现，正常人雾化吸入高渗盐水发生咳嗽的敏感性可能与ACE基因多态性有关。本文报告由于服用ACEI发生咳嗽的52例患者以及无咳嗽反应的70例患者ACE基因型分布，旨在探讨ACEI所致咳嗽与ACE基因多态性的关系。
对象与方法
, 百拇医药 一、对象
均为接受苯那普利(10mg/日)治疗的Ⅰ～Ⅱ期高血压病患者，皆为汉族，无血缘关系，无吸烟史，近期内无呼吸道感染，无慢性支气管炎及支气管哮喘等呼吸系统疾病。ACEI引起咳嗽组52例，其中男35例，女17例，平均年龄63.8±7.6岁；服用ACEI后无咳嗽副反应组共70例，其中男46例，女24例，平均年龄65.3±11.2岁。
二、方法
1.DNA的提取：采外周静脉血2ml，酸性柠檬酸葡萄糖溶液(ACD)抗凝。用细胞裂解液破碎红细胞和白细胞，酚和氯仿法抽提DNA，乙醇沉淀。
2.PCR检测ACE基因的I/D多态性：用PCR法扩增ACE基因第16内含子目的片段。引物序列为：正向5′-?CTGGAGACCACT-?CCCATCCTTTCT-3′，反向5′-GATGTGGCCATCACATTCGTCAGAT-3′，PCR反应总体积50μl，Taq酶购自Promega公司。PCR条件为95℃变性45秒，55℃退火45秒，72℃延伸1min，35个循环，运用PE480DNA合成仪。PCR产物经2%琼脂糖凝胶电泳，溴化乙锭染色，紫外灯下观察结果，出现490bp和190bp两条区带者为ID型，仅有490bp区带者为Ⅱ型，仅有190bp区带者为DD型。
, 百拇医药
3.血清ACE活性测定：采用紫外法。
三、统计学处理
ACE活性以
±s表示。组间均数值比较运用t检验；ACE基因型及等位基因频率在两组间差异比较采用χ2检验，并经过Hardy-Weinburg平衡检验。
结 果
一、ACE基因多态性与血清ACE活性之间关系
服用ACEI无咳嗽副反应组(无咳嗽组)平均ACE活性水平较服用ACEI后发生咳嗽组(咳嗽组)明显升高(P<0.01)；两组带有DD基因型者的ACE活性较同组带Ⅱ基因型者显著升高(P值均<0.01，见表1)。
, http://www.100md.com
表1 血清ACE活性水平与ACE基因型之间的关系 组 别
例数
平均
(ku/L)
ACE基因型
DD
DI
II
咳嗽组
52
32.7
40.4±10.4
, http://www.100md.com 32.8±11.2
25.0±11.1
无咳嗽组
70
42.1
50.6±9.7
42.1±10.1
33.6±7.9
二、两组患者ACE基因型及等位基因频率的比较
咳嗽组Ⅱ型占46.2%，而无咳嗽组为30.0%，两组比较其差异具有统计学意义(P<0.05)；咳嗽组和无咳嗽组Ⅰ等位基因频率分别为60.6%、43.6%，前者高于后者，其差异具有显著性(P<0.01，见表2)。 表2 两组患者ACE基因型及等位基因频率的比较 组别
, 百拇医药
例数
ACE基因型(%)
等位基因(%)
II
ID
DD
I
D
咳嗽组
52
24(46.2)
15(28.8)
13(25.0)
, 百拇医药
63(60.6)
41(39.4)
无咳嗽组
70
21(30.0)
19(27.1)
30(42.9)
61(43.6)
79(56.4)
讨 论
咳嗽是呼吸系统疾病最常见的症状之一，国内外资料均表明不少患者咳嗽是由于使用ACEI。ACEI引起咳嗽的机制是近年来研究的热点之一。有人认为缓激肽可能是ACEI引起咳嗽的活性肽，使用ACEI可使体内主要的缓激肽灭活酶受抑制，将造成肺内缓激肽水平升高[1]。但也有相反的报道，如Umeki报道了ACE功能不全综合征患者，表现有高肾素-血管紧张素Ⅰ-缓激肽血症，这些患者并不出现咳嗽。另有研究提示P物质[3]及血栓素[4]参与了ACEI致咳作用的发生。尽管研究较多，但ACEI致咳的确切机制仍不清楚。
, 百拇医药
近年来随着分子生物学等研究手段的成熟和深入，许多研究结果显示某些基因多态性与疾病的发生密切相关。ACE是一种含锌蛋白酶，此酶主要由血管内皮细胞产生，主要功能是将血管紧张素Ⅰ转化为血管紧张素Ⅱ，其基因位于人17q23染色体上。根据其第16内含子是否存在着287bp(碱基对)的缺失、插入片段，可将其分为DD、DI及II三种基因型。鉴于正常人雾化吸入高渗盐水致咳的敏感性与ACE基因多态性有关，即基因型为II者易发生咳嗽反应[1]。我们检测了服用ACEI的高血压患者ACE基因多态性，结果发现ACEI致咳组II基因型频率较无咳嗽组明显升高，这与基因型为II的健康者雾化吸入高渗盐水易发生咳嗽的结论相一致。此外，本研究中所测血清ACE活性以DD型最高，DI型居中，II型最低，这与大多数学者的结论相一致。
ACEI致咳嗽副反应可能为多种因素参与作用的结果。本文结果提示携带I等位基因是ACEI致咳嗽的危险因素，基因型为II者血清ACE活性较低，这些患者使用ACEI易发生咳嗽副反应。由于本文例数尚不很多，ACE基因多态性与ACEI咳嗽副反应之间的关系还有待于进一步研究。
, http://www.100md.com
参考文献
[1] Morice AH， et al.Thorax 1997；52：111.
[2] 郭翼珍.中华内科杂志1997；36：638.
[3] Tomaki M， et al. Thorax 1996；51：199.
[4] Malini PL， et al. Lancet 1997；350：15.
[5] 雷绥民，等.临床荟萃 1998；13：385.
(1998年7月24日收稿), http://www.100md.com
单位：南京医科大学第一附属医院 邮政编码：210029
关键词：血管紧张素转换酶 基因多态性 咳嗽
江苏医药990302 摘要 为了探讨血管紧张素转换酶抑制剂(ACEI)所致咳嗽与血管紧张素转换酶(ACE)基因多态性的关系，应用聚合酶链反应(PCR)方法，检测52例由于服用ACEI引起的咳嗽患者及70例未发生咳嗽的患者ACE基因的插入(I)/缺失(D)多态性，并采用紫外法检测ACE活性。结果发现在ACEI引起咳嗽组Ⅱ型占46.2%，而无咳嗽组为30.0%，两组相比其差异具有统计学意义(P<0.05)；咳嗽组ACE活性低于无咳嗽组(P<0.01)。提示：ACEI所致咳嗽与ACE基因多态性有关，ACE基因多态性的分析有助于ACEI的合理使用。
The Association between the Gene Polymorphism of Angiotensin
, 百拇医药
Converting Enzyme (ACE) and ACE inhibitor-induced cough
Wu Jianqing et al
The First Affiliated Hospital of Nanjing Medical University, Nanjing
Abstract To investigate the association between angiotensin converting enzyme (ACE) gene polymorphism and ACE inhibitor (ACEI)-induced cough, polymerase chain reaction (PCR) was used to examine ACE I/D polymorphism and serum ACE activity was detected by using spectrophometer colorimitry in 52 ACEI-induced cough subjects and 70 no cough subjects. The results were:(1) The frequencies of ACE Ⅱ was 46.2% in cough group and 30.0% in the no cough group; (2) The activity of ACE in cough group was lower than that in no cough group. This study suggests that ACEI-induced cough may be related to ACE gene polymorphism, and the detection of ACE gene polymorphism may play a role in the rational treatment of ACEI.
, 百拇医药
Key words Angiotensin converting enzyme Gene polymorphism Cough
自70年代末血管紧张素转换酶抑制剂(ACEI)用于治疗高血压病、心衰等疾病以来，其应用日益广泛。但是，直到1985年ACEI引起的咳嗽反应才引起人们的重视。据国外报道[1]，ACEI常见的干咳发生率为15%；国内的报道亦高达10～20%[2]。ACEI引起咳嗽的确切机制仍未明了[1，3，4，5]，随着ACEI基因多态性研究的深入，国外学者[1]研究发现，正常人雾化吸入高渗盐水发生咳嗽的敏感性可能与ACE基因多态性有关。本文报告由于服用ACEI发生咳嗽的52例患者以及无咳嗽反应的70例患者ACE基因型分布，旨在探讨ACEI所致咳嗽与ACE基因多态性的关系。
对象与方法
, 百拇医药 一、对象
均为接受苯那普利(10mg/日)治疗的Ⅰ～Ⅱ期高血压病患者，皆为汉族，无血缘关系，无吸烟史，近期内无呼吸道感染，无慢性支气管炎及支气管哮喘等呼吸系统疾病。ACEI引起咳嗽组52例，其中男35例，女17例，平均年龄63.8±7.6岁；服用ACEI后无咳嗽副反应组共70例，其中男46例，女24例，平均年龄65.3±11.2岁。
二、方法
1.DNA的提取：采外周静脉血2ml，酸性柠檬酸葡萄糖溶液(ACD)抗凝。用细胞裂解液破碎红细胞和白细胞，酚和氯仿法抽提DNA，乙醇沉淀。
2.PCR检测ACE基因的I/D多态性：用PCR法扩增ACE基因第16内含子目的片段。引物序列为：正向5′-?CTGGAGACCACT-?CCCATCCTTTCT-3′，反向5′-GATGTGGCCATCACATTCGTCAGAT-3′，PCR反应总体积50μl，Taq酶购自Promega公司。PCR条件为95℃变性45秒，55℃退火45秒，72℃延伸1min，35个循环，运用PE480DNA合成仪。PCR产物经2%琼脂糖凝胶电泳，溴化乙锭染色，紫外灯下观察结果，出现490bp和190bp两条区带者为ID型，仅有490bp区带者为Ⅱ型，仅有190bp区带者为DD型。
, 百拇医药
3.血清ACE活性测定：采用紫外法。
三、统计学处理
ACE活性以
±s表示。组间均数值比较运用t检验；ACE基因型及等位基因频率在两组间差异比较采用χ2检验，并经过Hardy-Weinburg平衡检验。结 果
一、ACE基因多态性与血清ACE活性之间关系
服用ACEI无咳嗽副反应组(无咳嗽组)平均ACE活性水平较服用ACEI后发生咳嗽组(咳嗽组)明显升高(P<0.01)；两组带有DD基因型者的ACE活性较同组带Ⅱ基因型者显著升高(P值均<0.01，见表1)。
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表1 血清ACE活性水平与ACE基因型之间的关系 组 别
例数
平均
(ku/L)
ACE基因型
DD
DI
II
咳嗽组
52
32.7
40.4±10.4
, http://www.100md.com 32.8±11.2
25.0±11.1
无咳嗽组
70
42.1
50.6±9.7
42.1±10.1
33.6±7.9
二、两组患者ACE基因型及等位基因频率的比较
咳嗽组Ⅱ型占46.2%，而无咳嗽组为30.0%，两组比较其差异具有统计学意义(P<0.05)；咳嗽组和无咳嗽组Ⅰ等位基因频率分别为60.6%、43.6%，前者高于后者，其差异具有显著性(P<0.01，见表2)。 表2 两组患者ACE基因型及等位基因频率的比较 组别
, 百拇医药
例数
ACE基因型(%)
等位基因(%)
II
ID
DD
I
D
咳嗽组
52
24(46.2)
15(28.8)
13(25.0)
, 百拇医药
63(60.6)
41(39.4)
无咳嗽组
70
21(30.0)
19(27.1)
30(42.9)
61(43.6)
79(56.4)
讨 论
咳嗽是呼吸系统疾病最常见的症状之一，国内外资料均表明不少患者咳嗽是由于使用ACEI。ACEI引起咳嗽的机制是近年来研究的热点之一。有人认为缓激肽可能是ACEI引起咳嗽的活性肽，使用ACEI可使体内主要的缓激肽灭活酶受抑制，将造成肺内缓激肽水平升高[1]。但也有相反的报道，如Umeki报道了ACE功能不全综合征患者，表现有高肾素-血管紧张素Ⅰ-缓激肽血症，这些患者并不出现咳嗽。另有研究提示P物质[3]及血栓素[4]参与了ACEI致咳作用的发生。尽管研究较多，但ACEI致咳的确切机制仍不清楚。
, 百拇医药
近年来随着分子生物学等研究手段的成熟和深入，许多研究结果显示某些基因多态性与疾病的发生密切相关。ACE是一种含锌蛋白酶，此酶主要由血管内皮细胞产生，主要功能是将血管紧张素Ⅰ转化为血管紧张素Ⅱ，其基因位于人17q23染色体上。根据其第16内含子是否存在着287bp(碱基对)的缺失、插入片段，可将其分为DD、DI及II三种基因型。鉴于正常人雾化吸入高渗盐水致咳的敏感性与ACE基因多态性有关，即基因型为II者易发生咳嗽反应[1]。我们检测了服用ACEI的高血压患者ACE基因多态性，结果发现ACEI致咳组II基因型频率较无咳嗽组明显升高，这与基因型为II的健康者雾化吸入高渗盐水易发生咳嗽的结论相一致。此外，本研究中所测血清ACE活性以DD型最高，DI型居中，II型最低，这与大多数学者的结论相一致。
ACEI致咳嗽副反应可能为多种因素参与作用的结果。本文结果提示携带I等位基因是ACEI致咳嗽的危险因素，基因型为II者血清ACE活性较低，这些患者使用ACEI易发生咳嗽副反应。由于本文例数尚不很多，ACE基因多态性与ACEI咳嗽副反应之间的关系还有待于进一步研究。
, http://www.100md.com
参考文献
[1] Morice AH， et al.Thorax 1997；52：111.
[2] 郭翼珍.中华内科杂志1997；36：638.
[3] Tomaki M， et al. Thorax 1996；51：199.
[4] Malini PL， et al. Lancet 1997；350：15.
[5] 雷绥民，等.临床荟萃 1998；13：385.
(1998年7月24日收稿), http://www.100md.com