声带息肉中凹空样细胞和HPV的相关性
作者：王继群 练兵
单位：王继群 练兵(暨南大学医学院附属第一医院耳鼻咽喉科，广州 510630)
关键词：声带息肉；凹空样细胞；乳头状瘤病毒；人；聚合酶链反应
临床与实验病理学杂志990311摘要 目的：通过形态学和分子生物学技术来探讨声带息肉与人类乳头状瘤病毒(human papilloma virus, HPV)的关系。方法：对99例声带息肉HE染色标本，进行形态学光镜研究；同时，随机选择其中40例标本采用聚合酶链反应(PCR)技术行HPV DNA检测。结果：99例标本中有55例声带息肉复层鳞状上皮棘细胞层中出现凹空样细胞，阳性率为55.5%。40例行PCR检测的标本中HPV感染阳性率为67.5%(27/40)，其中凹空样细胞的HPV-DNA检测均为阳性占52.5%(21/40)；无凹空样细胞标本的其HPV-DNA阳性有6例，占15%(6/40)。结论：HPV在声带息肉的发生发展中充当重要角色。
, http://www.100md.com
分类号 R767.4 文献标识码 A
文章编号 1001-7399(1999)03-0219-02
Correlation between koilocytoid cell and HPV in human vocal cord polyp
Wang Jiqun, Lian Bing
(Dept of Otorhinolaryngol, First Affiliated Hospital of Jinan Medical College, Guangzhou 510632)
ABSTRACT Purpose To explore the correlation between HPV and human vocal cord polyp. Methods The study analyzed the morphology of 99 vocal cord polyps stained by HE and examined 40 of them with HPV-DNA by PCR. Results There were koilocytoid cells in 55 cases(55/99), in the 40 cases examined by PCR, there were 21 cases with koilocytoid cells and all were HPV-DNA positive. While only 6 cases without koilocytoid cells were HPV-DNA positive. Conclusion HPV plays an important role in the etiology of vocal cord polyp.
, 百拇医药
KEY WORDS vocal cord polyp; koilo-cytoid cell; papillomavirus, human; polymerase chain reaction
声带息肉是人类喉部的常见多发病，但其病因一直众说不一。有许多学者认为机械性磨擦是其重要原因，但机械性损伤引起的粘膜充血、水肿及炎性细胞浸润在声带息肉中并不多见。我们对1997年1月～1998年12月我科收治的声带息肉HE染色病理切片进行了形态学研究，并随机对其中40例新鲜组织标本采用PCR技术行人类乳头状瘤病毒(HPV)-DNA的检测。
1 材料与方法
99例声带息肉标本均来自暨南大学医学院第一附属医院耳鼻咽喉科住院的广东籍患者，经支撑喉镜下显微手术摘除的标本均被病理检查证实。99例均为首发病例，其中男性46例，女性53例，年龄16～71岁，平均41.2岁；病程为2月～2年，平均为10.3月；单侧发病89例，双侧发病10例。
, 百拇医药
99例标本均为中性福尔马林固定、石蜡切片HE染色在光学显微镜下观察。其中40例随机标本同时进行新鲜组织DNA苯酚抽提，行PCR扩增(自行设计的引物可检测HPV13个亚型)，检测HPV-DNA，已知HPV阳性DNA作阳性对照，无菌双蒸水代替模板DNA及人白细胞DNA分别作阴性对照，扩增产物在1.5%琼脂糖(含0.5%溴乙锭)中电泳，电压80V，电流10 mA，1.5 h；于紫外照射仪下观察电泳结果并拍照，DNA分子量用Marker对照，出现444bp荧光条带者为HPV-DNA阳性。
2 结果
99例声带息肉中有凹空样细胞达55例，阳性率为55.5%(55/99)；其中男性23例，女性32例。40例行PCR检测的40例标本中，HPV阳性率为67.5%，其中21例有凹空样细胞者HPV-DNA均为阳性，占52.5%(21/40)；无凹空样细胞的19例标本中有6例HPV-DNA阳性，占15%(6/40)。凹空样细胞出现与患者的性别、上皮细胞的角化、增生及HPV感染的关系如表1～3所示，光镜下的表现见图1、2所示，PCR结果见表3，另外6例无凹空样细胞的标本中也检测到HPV-DNA。
, 百拇医药
图1 声带息肉空样细胞伴角化及增生.HE×400
图2 声带息肉空样细胞伴单纯角化.HE×400表1 声带息肉中男女性凹空样细胞的观察 性别
阳性
阴性
阳性率(%)
男
23
23
23.2
女
32
, 百拇医药
21
32.3
合计
55
44
55.5
经χ2检验,P>0.05
表2 凹空样细胞与上皮角化、增生及角化伴增生的观察 分类
阳性
阴性
阳性率(%)
单纯角化
, 百拇医药
16
9
16.1
单纯增生
6
6
6.1
角化伴增生
18
2
18.1
经χ2检验,单纯角化P>0.05；单纯增生P>0.05；角化伴增生P<0.01
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表3 40例PCR检测中HPV与凹空样细胞的观察 HPV
凹空样细胞
阳性率
(%)
阳性
阴性
阳性
21
6
52
阴性
0
13
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0
合计
21
19
52
经χ2检验,P<0.01
表1～3数据经SPSS医学统计软件χ2检验，结果显示：凹空样细胞的出现与性别，上皮的单纯角化及单纯增生无关(P>0.05)，与上皮角化伴增生和HPV-DNA有关(P<0.01)。
3 讨论
声带息肉中的凹空样细胞与尖锐湿疣中的凹空细胞在大小，形态上有一定区别但也极为相似。差异性表现在凹空样细胞没有明显的细胞增大及胞浆中丝状物出现；相似性表现如图1所示：凹空样细胞多位于上皮表层，多呈灶状分布也有散在出现，细胞边界不清，核固缩可呈镰刀形，核仁多消失，核形态大小不一，核周出现空泡〔1〕多伴有上皮增生和角化，鉴于这种区别，我们把声带息肉中的这种表现称为凹空样细胞。由于HPVs是一种嗜上皮的乳头状瘤病毒，其感染部位和病变形式与HPV的亚型有关〔2〕，现已知其亚型达80余种〔3〕。因此，两者在形态上的差异极可能是由于感染的HPV亚型不同所致。HPVs涉及喉部的多种疾病，如喉乳头状瘤、喉癌等，在这类疾病中HPVs感染与凹空细胞出现明显相关〔4〕。
, 百拇医药
我们的资料显示声带息肉中固有层水肿，充血及炎性细胞浸润的现象并不多见，而凹空样细胞的出现率达55.5%(55/99)。随机选择的40例声带息肉行PCR检测，发现凹空样细胞的出现与HPV感染密切相关；6例无凹空样细胞的标本中也检测到HPV-DNA，提示从HPV感染到凹空样细胞出现的形态学改变之间有一段时间和过程，凹空样细胞是HPV感染的结果。我们的资料显示：声带息肉中凹空样细胞的出现与角化伴增生明显相关与HPV促上皮增生的特性相吻合〔5，6〕。因此，我们认为HPV感染声带，引起上皮增生，进而角化并伴有凹空样细胞的出现是一系列事件。由于感染的HPV亚型不同导致的最终结果可能为声带息肉，也可能为喉癌或喉乳头状瘤。声带息肉中凹空样细胞的出现在男女间无明显不同，PCR检测中HPV阳性在性别上也无差异(未列表显示)，说明凹空样细胞出现与HPV感染在声带息肉发生上与患者的性激素水平无关。
虽然我们检测的40例声带息肉中HPV感染率达67.5%，但由于引物扩增的限制，因此不排除声带息肉中HPV-DNA阳性率会更高。早在10年前就有学者在声带息肉上皮细胞核内找到病毒颗粒〔7〕，因此，我们认为HPV病毒感染声带上皮细胞后在核中复制以及在胞浆中装配干扰了细胞的正常代谢，从而导致凹空样细胞的出现；也可能由于HPV感染后激发上皮过度增生，致使上皮表层细胞过早老化衰退，出现凹空样的表现。总之，根据我们对声带息肉中凹空样细胞的观察及其与HPV的相关性研究，认为在声带息肉的发生发展中HPV起着重要作用。在今后声带息肉的预防及治疗中应考虑进行有关HPV方面的防治。
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基金项目：广东省科委(No 1998-278-5)和国务院侨办科研基金资助项目(No 93A128)
作者简介：王继群，男，40岁，医学博士，副教授，硕士生导师。研究方向：头颈部肿瘤
参考文献
1，刘彤华主编. 诊断病理学. 北京：人民卫生出版社，1995：946
2，闻玉梅主编. 医学分子病毒学及其应用. 上海：上海医科大学出版社，1995：122～126
3，Lin KY, Willian HW, Haskins KK et al. Co-infection of HPV11 and HPV16 in a case of laryngeal squamous papillomas with severe dysplasia. The Laryngoscope, 1997;107(7):942
, 百拇医药
4，Manuel LA, Tomas GC, Ascension LR et al. Human papillomavirus and p53 oncoprotein in verrucous carcinoma of the larynx. J Laryngol Otol,1996;110(8):742～747
5，Theodore DK, Robbert JS, William GN et al. Human papillomavirus 16 E6 expression disrupts the p53 mediated cellular response to DNA damage. Proc Natl Acad Sci USA,1993;90:3988～3992
6，Robbert JCS, Mann HL, Beverly SP et al. p53-dependent G1 arrest involves pRB-related proteins and is disrupted by the human papillomavirus 16 E7 oncoprotein. Proc Natsl Acad Sci USA,1994;91:5320～5324
7，洪明理，付治锋，崔 萍等. 声带息肉的电子显微镜观察. 中华耳鼻咽喉科杂志，1986；21：62～63
收稿日期：1999-01-20, 百拇医药
单位：王继群 练兵(暨南大学医学院附属第一医院耳鼻咽喉科，广州 510630)
关键词：声带息肉；凹空样细胞；乳头状瘤病毒；人；聚合酶链反应
临床与实验病理学杂志990311摘要 目的：通过形态学和分子生物学技术来探讨声带息肉与人类乳头状瘤病毒(human papilloma virus, HPV)的关系。方法：对99例声带息肉HE染色标本，进行形态学光镜研究；同时，随机选择其中40例标本采用聚合酶链反应(PCR)技术行HPV DNA检测。结果：99例标本中有55例声带息肉复层鳞状上皮棘细胞层中出现凹空样细胞，阳性率为55.5%。40例行PCR检测的标本中HPV感染阳性率为67.5%(27/40)，其中凹空样细胞的HPV-DNA检测均为阳性占52.5%(21/40)；无凹空样细胞标本的其HPV-DNA阳性有6例，占15%(6/40)。结论：HPV在声带息肉的发生发展中充当重要角色。
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分类号 R767.4 文献标识码 A
文章编号 1001-7399(1999)03-0219-02
Correlation between koilocytoid cell and HPV in human vocal cord polyp
Wang Jiqun, Lian Bing
(Dept of Otorhinolaryngol, First Affiliated Hospital of Jinan Medical College, Guangzhou 510632)
ABSTRACT Purpose To explore the correlation between HPV and human vocal cord polyp. Methods The study analyzed the morphology of 99 vocal cord polyps stained by HE and examined 40 of them with HPV-DNA by PCR. Results There were koilocytoid cells in 55 cases(55/99), in the 40 cases examined by PCR, there were 21 cases with koilocytoid cells and all were HPV-DNA positive. While only 6 cases without koilocytoid cells were HPV-DNA positive. Conclusion HPV plays an important role in the etiology of vocal cord polyp.
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KEY WORDS vocal cord polyp; koilo-cytoid cell; papillomavirus, human; polymerase chain reaction
声带息肉是人类喉部的常见多发病，但其病因一直众说不一。有许多学者认为机械性磨擦是其重要原因，但机械性损伤引起的粘膜充血、水肿及炎性细胞浸润在声带息肉中并不多见。我们对1997年1月～1998年12月我科收治的声带息肉HE染色病理切片进行了形态学研究，并随机对其中40例新鲜组织标本采用PCR技术行人类乳头状瘤病毒(HPV)-DNA的检测。
1 材料与方法
99例声带息肉标本均来自暨南大学医学院第一附属医院耳鼻咽喉科住院的广东籍患者，经支撑喉镜下显微手术摘除的标本均被病理检查证实。99例均为首发病例，其中男性46例，女性53例，年龄16～71岁，平均41.2岁；病程为2月～2年，平均为10.3月；单侧发病89例，双侧发病10例。
, 百拇医药
99例标本均为中性福尔马林固定、石蜡切片HE染色在光学显微镜下观察。其中40例随机标本同时进行新鲜组织DNA苯酚抽提，行PCR扩增(自行设计的引物可检测HPV13个亚型)，检测HPV-DNA，已知HPV阳性DNA作阳性对照，无菌双蒸水代替模板DNA及人白细胞DNA分别作阴性对照，扩增产物在1.5%琼脂糖(含0.5%溴乙锭)中电泳，电压80V，电流10 mA，1.5 h；于紫外照射仪下观察电泳结果并拍照，DNA分子量用Marker对照，出现444bp荧光条带者为HPV-DNA阳性。
2 结果
99例声带息肉中有凹空样细胞达55例，阳性率为55.5%(55/99)；其中男性23例，女性32例。40例行PCR检测的40例标本中，HPV阳性率为67.5%，其中21例有凹空样细胞者HPV-DNA均为阳性，占52.5%(21/40)；无凹空样细胞的19例标本中有6例HPV-DNA阳性，占15%(6/40)。凹空样细胞出现与患者的性别、上皮细胞的角化、增生及HPV感染的关系如表1～3所示，光镜下的表现见图1、2所示，PCR结果见表3，另外6例无凹空样细胞的标本中也检测到HPV-DNA。
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图1 声带息肉空样细胞伴角化及增生.HE×400
图2 声带息肉空样细胞伴单纯角化.HE×400表1 声带息肉中男女性凹空样细胞的观察 性别
阳性
阴性
阳性率(%)
男
23
23
23.2
女
32
, 百拇医药
21
32.3
合计
55
44
55.5
经χ2检验,P>0.05
表2 凹空样细胞与上皮角化、增生及角化伴增生的观察 分类
阳性
阴性
阳性率(%)
单纯角化
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16
9
16.1
单纯增生
6
6
6.1
角化伴增生
18
2
18.1
经χ2检验,单纯角化P>0.05；单纯增生P>0.05；角化伴增生P<0.01
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表3 40例PCR检测中HPV与凹空样细胞的观察 HPV
凹空样细胞
阳性率
(%)
阳性
阴性
阳性
21
6
52
阴性
0
13
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0
合计
21
19
52
经χ2检验,P<0.01
表1～3数据经SPSS医学统计软件χ2检验，结果显示：凹空样细胞的出现与性别，上皮的单纯角化及单纯增生无关(P>0.05)，与上皮角化伴增生和HPV-DNA有关(P<0.01)。
3 讨论
声带息肉中的凹空样细胞与尖锐湿疣中的凹空细胞在大小，形态上有一定区别但也极为相似。差异性表现在凹空样细胞没有明显的细胞增大及胞浆中丝状物出现；相似性表现如图1所示：凹空样细胞多位于上皮表层，多呈灶状分布也有散在出现，细胞边界不清，核固缩可呈镰刀形，核仁多消失，核形态大小不一，核周出现空泡〔1〕多伴有上皮增生和角化，鉴于这种区别，我们把声带息肉中的这种表现称为凹空样细胞。由于HPVs是一种嗜上皮的乳头状瘤病毒，其感染部位和病变形式与HPV的亚型有关〔2〕，现已知其亚型达80余种〔3〕。因此，两者在形态上的差异极可能是由于感染的HPV亚型不同所致。HPVs涉及喉部的多种疾病，如喉乳头状瘤、喉癌等，在这类疾病中HPVs感染与凹空细胞出现明显相关〔4〕。
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我们的资料显示声带息肉中固有层水肿，充血及炎性细胞浸润的现象并不多见，而凹空样细胞的出现率达55.5%(55/99)。随机选择的40例声带息肉行PCR检测，发现凹空样细胞的出现与HPV感染密切相关；6例无凹空样细胞的标本中也检测到HPV-DNA，提示从HPV感染到凹空样细胞出现的形态学改变之间有一段时间和过程，凹空样细胞是HPV感染的结果。我们的资料显示：声带息肉中凹空样细胞的出现与角化伴增生明显相关与HPV促上皮增生的特性相吻合〔5，6〕。因此，我们认为HPV感染声带，引起上皮增生，进而角化并伴有凹空样细胞的出现是一系列事件。由于感染的HPV亚型不同导致的最终结果可能为声带息肉，也可能为喉癌或喉乳头状瘤。声带息肉中凹空样细胞的出现在男女间无明显不同，PCR检测中HPV阳性在性别上也无差异(未列表显示)，说明凹空样细胞出现与HPV感染在声带息肉发生上与患者的性激素水平无关。
虽然我们检测的40例声带息肉中HPV感染率达67.5%，但由于引物扩增的限制，因此不排除声带息肉中HPV-DNA阳性率会更高。早在10年前就有学者在声带息肉上皮细胞核内找到病毒颗粒〔7〕，因此，我们认为HPV病毒感染声带上皮细胞后在核中复制以及在胞浆中装配干扰了细胞的正常代谢，从而导致凹空样细胞的出现；也可能由于HPV感染后激发上皮过度增生，致使上皮表层细胞过早老化衰退，出现凹空样的表现。总之，根据我们对声带息肉中凹空样细胞的观察及其与HPV的相关性研究，认为在声带息肉的发生发展中HPV起着重要作用。在今后声带息肉的预防及治疗中应考虑进行有关HPV方面的防治。
, http://www.100md.com
基金项目：广东省科委(No 1998-278-5)和国务院侨办科研基金资助项目(No 93A128)
作者简介：王继群，男，40岁，医学博士，副教授，硕士生导师。研究方向：头颈部肿瘤
参考文献
1，刘彤华主编. 诊断病理学. 北京：人民卫生出版社，1995：946
2，闻玉梅主编. 医学分子病毒学及其应用. 上海：上海医科大学出版社，1995：122～126
3，Lin KY, Willian HW, Haskins KK et al. Co-infection of HPV11 and HPV16 in a case of laryngeal squamous papillomas with severe dysplasia. The Laryngoscope, 1997;107(7):942
, 百拇医药
4，Manuel LA, Tomas GC, Ascension LR et al. Human papillomavirus and p53 oncoprotein in verrucous carcinoma of the larynx. J Laryngol Otol,1996;110(8):742～747
5，Theodore DK, Robbert JS, William GN et al. Human papillomavirus 16 E6 expression disrupts the p53 mediated cellular response to DNA damage. Proc Natl Acad Sci USA,1993;90:3988～3992
6，Robbert JCS, Mann HL, Beverly SP et al. p53-dependent G1 arrest involves pRB-related proteins and is disrupted by the human papillomavirus 16 E7 oncoprotein. Proc Natsl Acad Sci USA,1994;91:5320～5324
7，洪明理，付治锋，崔 萍等. 声带息肉的电子显微镜观察. 中华耳鼻咽喉科杂志，1986；21：62～63
收稿日期：1999-01-20, 百拇医药