血浆、丘脑下部心钠素含量在大鼠急性脑缺血再灌注损伤时的变化
作者：于挺敏 邬英全 赵 力 孔繁莹 屈洪澜
单位：于挺敏 邬英全 赵 力(白求恩医科大学第三临床学院神经内科，长春 130031)；孔繁莹(白求恩医科大学第一临床学院)；屈洪澜(长春市朝阳区医院)
关键词：大鼠；脑缺血再灌注损伤；心钠素；精氨酸加压素
中国老年学杂志/990331 摘 要 目的 探讨大鼠急性脑缺血再灌注损伤时血浆及丘脑下部心钠素含量的变化。方法 用血管闭塞法制备大鼠脑缺血再灌注模型，应用放免分析法检测Wistar大鼠急性脑缺血再灌注后血浆、丘脑下部心钠素(ANP)含量变化。结果 单纯脑缺血组丘脑下部ANP含量较假手术对照组升高1倍以上，血流再灌注后，ANP含量进一步增加，但不显著，而血浆中ANP含量各组间比较无统计差异。结论 丘脑下部ANP参与脑缺血再灌注损伤过程，而血浆中ANP含量不能反映病情。
, http://www.100md.com Changes of ANP content in plasma and
hypothalamus of rats after acute cerebral
ischcmia reperfusion/injury
Yu Tingmin,Kong Fanying,Qu Honglan et al
Department of Neurology,the Third Teaching Hospital,Bethune University of Medica l Sciences,Changchan 130031
Changes of ANP in plasma and hypothalamus after acut e cerebral ischemia reperfusion were studied.The results indicate that the ische m ia group as compared with the sham-operated group that the ANP in hypothalamus increase a more than double after postreperfusion period.There is no statistical difference about the content of ANP in plasma.It is suggested that the ANP in h yposthalamus is related with injury after cerebral ischemia/reperfusion,but ANP in plasma does not reflect the anomaly of CNS.
, 百拇医药
Key words Rat cerebral ischemia/reperfision ANP
心脏能够产生ANP，中枢神经系统也能合成和分泌ANP，脑内ANP以下丘脑和隔区含量最高。在脑室周围组织，颅内动静脉上皮细胞以及脉络丛上皮细胞尚有ANP受体的存在，故认为ANP与脑血管收缩、脑血流量分布的生理调节有密切关系，是急性脑血管病时脑血管血液循环紊乱的重要物质基础。血浆ANP含量在急性缺血性脑血管疾病时的变化各家报道不一〔1〕，丘脑下部ANP含量在急性脑缺血再灌注时的变化报道较少。本研究应用放免法测定大鼠急性脑缺血再灌注后血浆、丘脑下部ANP含量变化，探讨其与急性脑缺血再灌注损伤的关系。
1 材料与方法
1.1 动物实验 Wistar大鼠18只，体重180～250g，随机分为3组，每组6只，Ⅰ组：假手术对照组；Ⅱ组：脑缺血20min；Ⅲ组：脑缺血20min再灌注60min组。
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动物实验采用Pullsinelli的四血管闭塞法〔2〕。大鼠以3%戊巴比妥钠按40mg/kg腹腔注射麻醉后，电凝闭双侧椎动脉，24h后，动物完全清醒状态下，Ⅱ、Ⅲ组结扎双侧颈总动脉20min，Ⅲ组剪断结扎线，使血流再通60min，Ⅰ组不凝闭、结扎血管，余手术过程同Ⅱ组，届时断头取脑取血。
实验成功判断：结扎双侧颈总动脉后，动物出现意识障碍，四肢瘫，直立反射及翻正反射消失为实验成功，弃去不成功动物。
1.2 ANP测定
1.2.1 标本采集 血浆标本：断头取躯干血置于加入EDTA-Na2及抑肽酶的试管中混匀，离心分离血浆，置于-20℃冰箱保存待测，丘脑下部标本制备采用陈泮藻报道的方法〔3〕。
1.2.2 ANP放免测定 ANP放免试剂盒由北京北方免疫试剂研究所提供。试剂配制及操作严格按说明书进行。用西安二六二厂生产的自动γ-免疫计数器测定，其值采用Ln-Longet线性回归运算。试剂盒批内变异系数<6.8%，批间变异系数<13.0%，平均回收率为95.0%～99.0%。
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1.3 统计学处理 数据以
±s表示，各组间比较用t检验。
2 结 果
单纯脑缺血组丘脑下部ANP含量较假手术，对照组升高1倍以上，再灌注后，其含量进一步增多，但与单纯缺血组比较无统计学差异。血浆ANP在单纯缺血组及再灌注组均呈增加趋势，但各组间比较无统计学差异，结果见表1。
表1 各组血浆、丘脑下部ANP含量(±s) 分组
n
血浆ANP(ng/g)
丘脑下部ANP(ng/g.wet.wt)
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Ⅰ
6
353.61±41.10
2.11±0.29
Ⅱ
6
397.01±63.42
5.32±0.961)
Ⅲ
6
405.62±61.01
5.71±0.942)
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血浆各组比较P>0.05，丘部下部：1)Ⅰ、Ⅱ组比较P<0.001，2)Ⅱ、Ⅲ组比较P>0.05
3 讨 论
血浆ANP是一种具有强大的排钠、利尿、舒张血管、降低血压作用的活性肽，心房细胞合成的ANP是血浆ANP的主要来源。脑内具有独立的ANP系统，并广泛参与中枢神经对多种生理功能的调解过程。脑内ANP的合成部位主要集中于下丘脑与心血管活动和水盐代谢调节有关的脑区〔4〕，提示其作用与外周是协同的。ANP免疫活性神经元对第三脑室前区(AV3V)的心血管活动调整中枢呈抑制效应，并能抑制交感神经、兴奋副交感神经，间接调整血管活性。
脑内血管紧张素Ⅱ(AⅡ)的分布与ANP相似，ANP对AⅡ的分泌，AⅡ的血管收缩作用等均具有抑制功能，AⅡ增加又能刺激ANP的分泌〔2〕。AⅡ对精氨酸加压素(AVP)的释放有刺激作用，目前认为〔5〕，ANP和AVP是一对相互拮抗又相互协调的与体内水盐代谢调节有关的激素调节系统，AVP可以刺激ANP的释放，而ANP对AⅡ以及其他各种原因引起的AVP释放有抑制作用。通过上述途径，ANP参与水盐代谢及血管舒缩活动的调节。脑血管上皮细胞上ANP受体的存在进一步证明，ANP参与脑血管舒缩活动和脑血流量的调节。根据脉络膜上皮细胞上存在ANP受体推测，ANP可能参与脑脊液分泌的调节，间接调节颅内压，动物实验亦证明了这一推论，脑室内投入ANP证明可抑制脑脊液生成，抑制实验性脑水肿时脑组织中水钠的增加。
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本实验表明，脑缺血后，丘脑下部ANP含量升高，对减轻脑水肿、减少脑脊液产生、舒张脑血管、增加脑血流量具有良性作用，并间接减轻脑缺血水肿后继发的钙离子、自由基以及血管舒缩物质如前列环素——血栓烷A2之间平衡失调所造成的组织损伤，故有利于疾病的恢复。曾有动物实验证明，ANP尚可特异地作用于血脑屏障，增加脑微血管和脉络丛上皮细胞鸟苷酸环化酶的活性。
脑缺血再灌注后，丘脑下部ANP含量增加的机制包括如下方面：(1)急性脑缺血缺氧的应激反应，使交感神经兴奋，AVP分泌增多，刺激ANP分泌增加。(2)丘脑下部因缺血缺氧所致的功能紊乱及由此继发脑水肿对ANP分泌的刺激。(3)脑缺血后，内皮素产生增加对ANP分泌的刺激。(4)脑缺血后各种代谢产物的刺激使ANP增加。脑缺血再灌注后，脑水肿进一步加重，组织损伤进一步明显，代谢产物堆积进一步增加，丘脑下部ANP含量虽有增加趋势但与单纯缺血组比较却无明显差别，其机制不明，可能与丘脑下部复杂的生理生化调节有关，有待进一步探讨。
, 百拇医药
脑缺血及再灌注后，血浆中ANP含量变化不明显，与一些临床报道不一致，但这一结果进一步说明中枢神经系统存在独立的ANP系统，血浆ANP含量变化不能反映中枢神经系统疾病及程度。
作者简介：于挺敏，女，37岁，副教授，从事脑血管病研究
4 参考文献
1 王景周.ANP与脑和脑血管病.国外医学*神经精神疾病分册，1991；1：37
2 Pulsinelli WA.A new model of bilateral in the unanesthetiged rat hemisperic ischemia.Stroke，1979；102：267
3 陈泮藻，郑秋莆，李振甲 et al.心钠素快速免疫分析.中华核医学杂志，1986；6(3)：147
4 马丽云，杨旭东，张墨玲 et al.肾上腺切除对大鼠下丘脑心钠素含量的影响.中华内分泌代谢杂志，1992；4：226
5 祁金顺.心房利钠因子和脑.国外医学*内分泌分册，1989(2)：63
〔1998-07-01收稿 1998-12-01修回〕, 百拇医药
单位：于挺敏 邬英全 赵 力(白求恩医科大学第三临床学院神经内科，长春 130031)；孔繁莹(白求恩医科大学第一临床学院)；屈洪澜(长春市朝阳区医院)
关键词：大鼠；脑缺血再灌注损伤；心钠素；精氨酸加压素
中国老年学杂志/990331 摘 要 目的 探讨大鼠急性脑缺血再灌注损伤时血浆及丘脑下部心钠素含量的变化。方法 用血管闭塞法制备大鼠脑缺血再灌注模型，应用放免分析法检测Wistar大鼠急性脑缺血再灌注后血浆、丘脑下部心钠素(ANP)含量变化。结果 单纯脑缺血组丘脑下部ANP含量较假手术对照组升高1倍以上，血流再灌注后，ANP含量进一步增加，但不显著，而血浆中ANP含量各组间比较无统计差异。结论 丘脑下部ANP参与脑缺血再灌注损伤过程，而血浆中ANP含量不能反映病情。
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hypothalamus of rats after acute cerebral
ischcmia reperfusion/injury
Yu Tingmin,Kong Fanying,Qu Honglan et al
Department of Neurology,the Third Teaching Hospital,Bethune University of Medica l Sciences,Changchan 130031
Changes of ANP in plasma and hypothalamus after acut e cerebral ischemia reperfusion were studied.The results indicate that the ische m ia group as compared with the sham-operated group that the ANP in hypothalamus increase a more than double after postreperfusion period.There is no statistical difference about the content of ANP in plasma.It is suggested that the ANP in h yposthalamus is related with injury after cerebral ischemia/reperfusion,but ANP in plasma does not reflect the anomaly of CNS.
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Key words Rat cerebral ischemia/reperfision ANP
心脏能够产生ANP，中枢神经系统也能合成和分泌ANP，脑内ANP以下丘脑和隔区含量最高。在脑室周围组织，颅内动静脉上皮细胞以及脉络丛上皮细胞尚有ANP受体的存在，故认为ANP与脑血管收缩、脑血流量分布的生理调节有密切关系，是急性脑血管病时脑血管血液循环紊乱的重要物质基础。血浆ANP含量在急性缺血性脑血管疾病时的变化各家报道不一〔1〕，丘脑下部ANP含量在急性脑缺血再灌注时的变化报道较少。本研究应用放免法测定大鼠急性脑缺血再灌注后血浆、丘脑下部ANP含量变化，探讨其与急性脑缺血再灌注损伤的关系。
1 材料与方法
1.1 动物实验 Wistar大鼠18只，体重180～250g，随机分为3组，每组6只，Ⅰ组：假手术对照组；Ⅱ组：脑缺血20min；Ⅲ组：脑缺血20min再灌注60min组。
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动物实验采用Pullsinelli的四血管闭塞法〔2〕。大鼠以3%戊巴比妥钠按40mg/kg腹腔注射麻醉后，电凝闭双侧椎动脉，24h后，动物完全清醒状态下，Ⅱ、Ⅲ组结扎双侧颈总动脉20min，Ⅲ组剪断结扎线，使血流再通60min，Ⅰ组不凝闭、结扎血管，余手术过程同Ⅱ组，届时断头取脑取血。
实验成功判断：结扎双侧颈总动脉后，动物出现意识障碍，四肢瘫，直立反射及翻正反射消失为实验成功，弃去不成功动物。
1.2 ANP测定
1.2.1 标本采集 血浆标本：断头取躯干血置于加入EDTA-Na2及抑肽酶的试管中混匀，离心分离血浆，置于-20℃冰箱保存待测，丘脑下部标本制备采用陈泮藻报道的方法〔3〕。
1.2.2 ANP放免测定 ANP放免试剂盒由北京北方免疫试剂研究所提供。试剂配制及操作严格按说明书进行。用西安二六二厂生产的自动γ-免疫计数器测定，其值采用Ln-Longet线性回归运算。试剂盒批内变异系数<6.8%，批间变异系数<13.0%，平均回收率为95.0%～99.0%。
, 百拇医药
1.3 统计学处理 数据以
±s表示，各组间比较用t检验。2 结 果
单纯脑缺血组丘脑下部ANP含量较假手术，对照组升高1倍以上，再灌注后，其含量进一步增多，但与单纯缺血组比较无统计学差异。血浆ANP在单纯缺血组及再灌注组均呈增加趋势，但各组间比较无统计学差异，结果见表1。
表1 各组血浆、丘脑下部ANP含量(
±s) 分组n
血浆ANP(ng/g)
丘脑下部ANP(ng/g.wet.wt)
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Ⅰ
6
353.61±41.10
2.11±0.29
Ⅱ
6
397.01±63.42
5.32±0.961)
Ⅲ
6
405.62±61.01
5.71±0.942)
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血浆各组比较P>0.05，丘部下部：1)Ⅰ、Ⅱ组比较P<0.001，2)Ⅱ、Ⅲ组比较P>0.05
3 讨 论
血浆ANP是一种具有强大的排钠、利尿、舒张血管、降低血压作用的活性肽，心房细胞合成的ANP是血浆ANP的主要来源。脑内具有独立的ANP系统，并广泛参与中枢神经对多种生理功能的调解过程。脑内ANP的合成部位主要集中于下丘脑与心血管活动和水盐代谢调节有关的脑区〔4〕，提示其作用与外周是协同的。ANP免疫活性神经元对第三脑室前区(AV3V)的心血管活动调整中枢呈抑制效应，并能抑制交感神经、兴奋副交感神经，间接调整血管活性。
脑内血管紧张素Ⅱ(AⅡ)的分布与ANP相似，ANP对AⅡ的分泌，AⅡ的血管收缩作用等均具有抑制功能，AⅡ增加又能刺激ANP的分泌〔2〕。AⅡ对精氨酸加压素(AVP)的释放有刺激作用，目前认为〔5〕，ANP和AVP是一对相互拮抗又相互协调的与体内水盐代谢调节有关的激素调节系统，AVP可以刺激ANP的释放，而ANP对AⅡ以及其他各种原因引起的AVP释放有抑制作用。通过上述途径，ANP参与水盐代谢及血管舒缩活动的调节。脑血管上皮细胞上ANP受体的存在进一步证明，ANP参与脑血管舒缩活动和脑血流量的调节。根据脉络膜上皮细胞上存在ANP受体推测，ANP可能参与脑脊液分泌的调节，间接调节颅内压，动物实验亦证明了这一推论，脑室内投入ANP证明可抑制脑脊液生成，抑制实验性脑水肿时脑组织中水钠的增加。
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本实验表明，脑缺血后，丘脑下部ANP含量升高，对减轻脑水肿、减少脑脊液产生、舒张脑血管、增加脑血流量具有良性作用，并间接减轻脑缺血水肿后继发的钙离子、自由基以及血管舒缩物质如前列环素——血栓烷A2之间平衡失调所造成的组织损伤，故有利于疾病的恢复。曾有动物实验证明，ANP尚可特异地作用于血脑屏障，增加脑微血管和脉络丛上皮细胞鸟苷酸环化酶的活性。
脑缺血再灌注后，丘脑下部ANP含量增加的机制包括如下方面：(1)急性脑缺血缺氧的应激反应，使交感神经兴奋，AVP分泌增多，刺激ANP分泌增加。(2)丘脑下部因缺血缺氧所致的功能紊乱及由此继发脑水肿对ANP分泌的刺激。(3)脑缺血后，内皮素产生增加对ANP分泌的刺激。(4)脑缺血后各种代谢产物的刺激使ANP增加。脑缺血再灌注后，脑水肿进一步加重，组织损伤进一步明显，代谢产物堆积进一步增加，丘脑下部ANP含量虽有增加趋势但与单纯缺血组比较却无明显差别，其机制不明，可能与丘脑下部复杂的生理生化调节有关，有待进一步探讨。
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脑缺血及再灌注后，血浆中ANP含量变化不明显，与一些临床报道不一致，但这一结果进一步说明中枢神经系统存在独立的ANP系统，血浆ANP含量变化不能反映中枢神经系统疾病及程度。
作者简介：于挺敏，女，37岁，副教授，从事脑血管病研究
4 参考文献
1 王景周.ANP与脑和脑血管病.国外医学*神经精神疾病分册，1991；1：37
2 Pulsinelli WA.A new model of bilateral in the unanesthetiged rat hemisperic ischemia.Stroke，1979；102：267
3 陈泮藻，郑秋莆，李振甲 et al.心钠素快速免疫分析.中华核医学杂志，1986；6(3)：147
4 马丽云，杨旭东，张墨玲 et al.肾上腺切除对大鼠下丘脑心钠素含量的影响.中华内分泌代谢杂志，1992；4：226
5 祁金顺.心房利钠因子和脑.国外医学*内分泌分册，1989(2)：63
〔1998-07-01收稿 1998-12-01修回〕, 百拇医药