熟地提取液对衰老模型小鼠脑组织NOS、NO、SOD和LPO的影响1
作者：张鹏霞 曲凤玉2 欧 芹 魏晓东 白 晶3 白书阁
单位：佳木斯大学医学院生化教研室，佳木斯 154002
关键词：熟地提取液；NOS；NO；SOD；LPO
中国老年学杂志/990328 摘 要 目的 探讨熟地不同溶媒提取液抗衰老的机制。方法 观察小鼠脑组织中一氧化氮合酶(NOS)、一氧化氮(NO)、超氧化物歧化酶(SOD)和过氧化脂质(LPO)的随龄变化，并观察了熟地的氯仿及乙醇提取液对上述指标的影响。结果 熟地的氯仿及乙醇提取液均能明显提高D-半乳糖致衰老模型小鼠脑组织中NOS和SOD的活性，使NO含量增加，LPO含量无明显降低。结论 熟地氯仿提取液具有延缓衰老的作用。
熟地具有抗老延年之功效，但其作用机制尚不清，据报道，熟地有降低小鼠脑线粒体单胺氧化酶(MAO)活性的作用〔1〕，可增加体内GSH-Px的活性，降低LPO含量，具有一定的抗自由基作用〔2〕。但有关熟地可能的有效成分及其对SOD及脑组织中NO和NOS的影响，目前国内外尚未见报道。本实验观察了不同溶媒熟地提取液对D-半乳糖致衰老小鼠脑组织SOD、NOS活性及LPO、NO含量的影响。
, 百拇医药
1 材料与方法
1.1 动物及分组 实验动物为昆明种小鼠(白求恩医科大学实验动物部提供)54只，其中青年组(2月龄)12只，体重18～22g；中年组(5～6月龄)42只，体重25～28g，随机分为中年组、模型组、氯仿提液组、乙醇提液组。常规饲料饲养。模型组每日皮下注射D-半乳糖100mg/kg体重；氯仿提取液组和乙醇提取液组除按模型组给药外，同时分别灌服氯仿提取液和乙醇提取液，在连续用药30d后，两提取液生药浓度达到10g/kg。断头处死，迅速取脑组织，用冷生理盐水冲洗后备用。
1.2 样品与试剂 由佳木斯医药采购供应站提供熟地生药，热空气烘干，粗粉，生药重(g)与氯仿(ml)按1∶5比例浸泡，热提取3次，合并提取液，回收氯仿，挥干药材，得氯仿提取液。然后用95%乙醇热提取3次，合并提取液，回收乙醇，得乙醇提取液，将两种提取液分别用蒸馏水稀释至生药浓度为0.7g/ml溶液，冷藏备用。NO、NOS、SOD、LPO测定试剂盒由南京建成生物工程研究所提供。
, 百拇医药
1.3 实验方法和指标测定 将脑组织制成10%和1%的匀浆，NO的测定采用硝酸还原酶法：NOS活性测定采用NOS催化L-Arg和分子氧反应生成NO，NO与亲核性物质生成有色化合物，比色测定OD值；SOD活性测定采用黄嘌呤氧化酶法，LPO含量的测定采用硫代巴比妥比色法。
1.4 统计学处理 采用spssforwindows6.0统计软件处理。
2 结 果
小鼠脑组织中NOS、SOD活性在中年期前随龄升高，而在中年期以后，则表现为随龄下降，NO含量在中年期明显高于青年期，但在老年则明显下降。LPO则表现为随龄增高(P<0.01)；各给药组小鼠脑组织中NO含量明显高于衰老模型组(P<0.01)；NOS活性和SOD活性明显升高(P<0.01)；氯仿组LPO含量降低，较乙醇组明显，但无统计学意义(P>0.05)详见表1。
, http://www.100md.com 表1 各组小鼠脑组织NO含量、NOS活性、SOD活性
LPO含量比较(
±s) 组别
n
NO
(μmol/L匀浆)
NOS
(u/ml匀浆)
SOD
(Nu/ml)
LPO
(nmol/ml匀浆)
, http://www.100md.com
青年对照组
12
1.77±0.12
2.88±0.391)
2.92±0.48
20.62±2.62
中年对照组
12
4.06±0.511)
6.31±0.341)
3.29±0.401)
, http://www.100md.com
25.16±3.291)
衰老模型组
12
1.28±0.391)
1.54±0.231)
2.08±0.411)
33.23±3.831)
氯仿提液组
9
2.29±0.392)
, 百拇医药
2.78±0.392)
4.00±0.482)
29.48±4.70
乙醇提液组
9
2.59±0.602)
2.91±0.212)
3.61±0.742)
31.83±5.63
注：1)与青年组比较P<0.01，2)与模型组比较P<0.01
, 百拇医药
3 讨 论
D-半乳糖是国内外众多学者研究后提出的一种“早衰老”动物模型，其各项指标均已具备老年小鼠的特征，我们以往的实验也充分证明了它是稳定、可靠的衰老模型。众多的实验研究〔3～5〕已表明衰老的自由基学说在衰老机制研究中愈来愈显示出重要性，NOS在大鼠多种组织中分布，并影响组织中NO的含量〔6〕，NO本身是一种自由基，它可与O÷2或过氧亚硝基阴离子(ONOO-)反应，质子化后迅速分解为NO和NO2；NO又是一种内皮衍化舒张因子(EDRP)，在许多方面发挥其生理作用。而LPO是自由基对不饱和脂肪酸引发的脂质过氧化物作用的最终产物，它的含量与SOD、NOS活性及NO含量有着密切的关系。本文结果提示老年期小鼠脑组织中NOS活性下降，使脑中NO含量降低，可导致巨噬细胞吞噬能力下降；使有活性的鸟苷酸环化酶含量降低，调节多种代谢的能力减弱，进一步加速衰老。SOD活性的下降，使体内重要的抗氧化防御系统功能下降，造成活性氧的蓄积，细胞受自由基攻击而损害。
, http://www.100md.com
本文结果也表明，熟地的氯仿和乙醇提取液均能明显地提高D-半乳糖诱导的衰老小鼠脑组织中SOD和NOS活性，提示二者可通过增强SOD活性而提高机体对自由基清除的能力，减少自由基的损害而延缓衰老，同时由于NOS活性的提高，使NO的生成量增多，充分发挥NO的生理作用而延缓衰老。熟地含有甙类，主要是环烯醚萜甙，还含有梓醇，生物碱、糖和多种氨基酸以及锌、锰等微量元素。实验结果提示氯仿提取物较乙醇提取物效果更佳，因其更能有效地增强脑组织中SOD活性(P<0.01)，减少脑中LPO的生成量，降低小鼠脑组织中脂褐素的生成，发挥脑组织的正常功能具有非常重要意义。
1 黑龙江省自然科学基金资助课题(题号199818)
2 佳木斯大学医学院药学系
3 佳木斯大学图书馆
作者简介：张鹏霞，女，33岁，讲师，从事衰老机制及中药抗衰老研究
, 百拇医药
4 参考文献
1 曹 凯，刘永平，李素婷et al.熟地、菊花、山药、牛膝等四大怀药对小鼠脑线粒体单胺氧化酶活性的影响.中国老年学杂志，1998；18(2)：102
2 曹 凯，刘永平，李素婷 et al.四种中药对小鼠脑组织谷胱甘肽过氧化物酶活性和脂质过氧化物含量的影响.中国中西医结合杂志，1993；13(特集)：82
3 Rose MR.Evolutionary Biology of Aging.Oxford UK:Oxford Univ Press，1991：5-9
4 吕维善主编.现代老年医学.长沙：湖南科学技术出版社，1984：53-58
5 曹 凯，杨鹤梅，刘永平.血清过氧化脂质含量与衰老和肿瘤关系的研究.老年学杂志，1989；9(51)：30
〔1998-09-01收稿 1999-03-01修回〕, 百拇医药(张鹏霞 曲凤玉2 欧 芹 魏晓东 白 晶3 白书阁)
单位：佳木斯大学医学院生化教研室，佳木斯 154002
关键词：熟地提取液；NOS；NO；SOD；LPO
中国老年学杂志/990328 摘 要 目的 探讨熟地不同溶媒提取液抗衰老的机制。方法 观察小鼠脑组织中一氧化氮合酶(NOS)、一氧化氮(NO)、超氧化物歧化酶(SOD)和过氧化脂质(LPO)的随龄变化，并观察了熟地的氯仿及乙醇提取液对上述指标的影响。结果 熟地的氯仿及乙醇提取液均能明显提高D-半乳糖致衰老模型小鼠脑组织中NOS和SOD的活性，使NO含量增加，LPO含量无明显降低。结论 熟地氯仿提取液具有延缓衰老的作用。
熟地具有抗老延年之功效，但其作用机制尚不清，据报道，熟地有降低小鼠脑线粒体单胺氧化酶(MAO)活性的作用〔1〕，可增加体内GSH-Px的活性，降低LPO含量，具有一定的抗自由基作用〔2〕。但有关熟地可能的有效成分及其对SOD及脑组织中NO和NOS的影响，目前国内外尚未见报道。本实验观察了不同溶媒熟地提取液对D-半乳糖致衰老小鼠脑组织SOD、NOS活性及LPO、NO含量的影响。
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1 材料与方法
1.1 动物及分组 实验动物为昆明种小鼠(白求恩医科大学实验动物部提供)54只，其中青年组(2月龄)12只，体重18～22g；中年组(5～6月龄)42只，体重25～28g，随机分为中年组、模型组、氯仿提液组、乙醇提液组。常规饲料饲养。模型组每日皮下注射D-半乳糖100mg/kg体重；氯仿提取液组和乙醇提取液组除按模型组给药外，同时分别灌服氯仿提取液和乙醇提取液，在连续用药30d后，两提取液生药浓度达到10g/kg。断头处死，迅速取脑组织，用冷生理盐水冲洗后备用。
1.2 样品与试剂 由佳木斯医药采购供应站提供熟地生药，热空气烘干，粗粉，生药重(g)与氯仿(ml)按1∶5比例浸泡，热提取3次，合并提取液，回收氯仿，挥干药材，得氯仿提取液。然后用95%乙醇热提取3次，合并提取液，回收乙醇，得乙醇提取液，将两种提取液分别用蒸馏水稀释至生药浓度为0.7g/ml溶液，冷藏备用。NO、NOS、SOD、LPO测定试剂盒由南京建成生物工程研究所提供。
, 百拇医药
1.3 实验方法和指标测定 将脑组织制成10%和1%的匀浆，NO的测定采用硝酸还原酶法：NOS活性测定采用NOS催化L-Arg和分子氧反应生成NO，NO与亲核性物质生成有色化合物，比色测定OD值；SOD活性测定采用黄嘌呤氧化酶法，LPO含量的测定采用硫代巴比妥比色法。
1.4 统计学处理 采用spssforwindows6.0统计软件处理。
2 结 果
小鼠脑组织中NOS、SOD活性在中年期前随龄升高，而在中年期以后，则表现为随龄下降，NO含量在中年期明显高于青年期，但在老年则明显下降。LPO则表现为随龄增高(P<0.01)；各给药组小鼠脑组织中NO含量明显高于衰老模型组(P<0.01)；NOS活性和SOD活性明显升高(P<0.01)；氯仿组LPO含量降低，较乙醇组明显，但无统计学意义(P>0.05)详见表1。
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LPO含量比较(
±s) 组别n
NO
(μmol/L匀浆)
NOS
(u/ml匀浆)
SOD
(Nu/ml)
LPO
(nmol/ml匀浆)
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青年对照组
12
1.77±0.12
2.88±0.391)
2.92±0.48
20.62±2.62
中年对照组
12
4.06±0.511)
6.31±0.341)
3.29±0.401)
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25.16±3.291)
衰老模型组
12
1.28±0.391)
1.54±0.231)
2.08±0.411)
33.23±3.831)
氯仿提液组
9
2.29±0.392)
, 百拇医药
2.78±0.392)
4.00±0.482)
29.48±4.70
乙醇提液组
9
2.59±0.602)
2.91±0.212)
3.61±0.742)
31.83±5.63
注：1)与青年组比较P<0.01，2)与模型组比较P<0.01
, 百拇医药
3 讨 论
D-半乳糖是国内外众多学者研究后提出的一种“早衰老”动物模型，其各项指标均已具备老年小鼠的特征，我们以往的实验也充分证明了它是稳定、可靠的衰老模型。众多的实验研究〔3～5〕已表明衰老的自由基学说在衰老机制研究中愈来愈显示出重要性，NOS在大鼠多种组织中分布，并影响组织中NO的含量〔6〕，NO本身是一种自由基，它可与O÷2或过氧亚硝基阴离子(ONOO-)反应，质子化后迅速分解为NO和NO2；NO又是一种内皮衍化舒张因子(EDRP)，在许多方面发挥其生理作用。而LPO是自由基对不饱和脂肪酸引发的脂质过氧化物作用的最终产物，它的含量与SOD、NOS活性及NO含量有着密切的关系。本文结果提示老年期小鼠脑组织中NOS活性下降，使脑中NO含量降低，可导致巨噬细胞吞噬能力下降；使有活性的鸟苷酸环化酶含量降低，调节多种代谢的能力减弱，进一步加速衰老。SOD活性的下降，使体内重要的抗氧化防御系统功能下降，造成活性氧的蓄积，细胞受自由基攻击而损害。
, http://www.100md.com
本文结果也表明，熟地的氯仿和乙醇提取液均能明显地提高D-半乳糖诱导的衰老小鼠脑组织中SOD和NOS活性，提示二者可通过增强SOD活性而提高机体对自由基清除的能力，减少自由基的损害而延缓衰老，同时由于NOS活性的提高，使NO的生成量增多，充分发挥NO的生理作用而延缓衰老。熟地含有甙类，主要是环烯醚萜甙，还含有梓醇，生物碱、糖和多种氨基酸以及锌、锰等微量元素。实验结果提示氯仿提取物较乙醇提取物效果更佳，因其更能有效地增强脑组织中SOD活性(P<0.01)，减少脑中LPO的生成量，降低小鼠脑组织中脂褐素的生成，发挥脑组织的正常功能具有非常重要意义。
1 黑龙江省自然科学基金资助课题(题号199818)
2 佳木斯大学医学院药学系
3 佳木斯大学图书馆
作者简介：张鹏霞，女，33岁，讲师，从事衰老机制及中药抗衰老研究
, 百拇医药
4 参考文献
1 曹 凯，刘永平，李素婷et al.熟地、菊花、山药、牛膝等四大怀药对小鼠脑线粒体单胺氧化酶活性的影响.中国老年学杂志，1998；18(2)：102
2 曹 凯，刘永平，李素婷 et al.四种中药对小鼠脑组织谷胱甘肽过氧化物酶活性和脂质过氧化物含量的影响.中国中西医结合杂志，1993；13(特集)：82
3 Rose MR.Evolutionary Biology of Aging.Oxford UK:Oxford Univ Press，1991：5-9
4 吕维善主编.现代老年医学.长沙：湖南科学技术出版社，1984：53-58
5 曹 凯，杨鹤梅，刘永平.血清过氧化脂质含量与衰老和肿瘤关系的研究.老年学杂志，1989；9(51)：30
〔1998-09-01收稿 1999-03-01修回〕, 百拇医药(张鹏霞 曲凤玉2 欧 芹 魏晓东 白 晶3 白书阁)