脑缺血大鼠血浆及脑组织内皮素-1含量的变化
作者：吴苏宁 梅元武 孙圣刚
单位：同济医科大学附属协和医院神经内科，武汉 430022
关键词：脑缺血；血浆；脑组织；内皮素-1
中国老年学杂志/990325 摘 要 目的 研究脑缺血大鼠血浆及脑组织ET-1含量的变化。方法 采用双侧颈总动脉结扎法建立大鼠脑缺血模型，用RIA法测定脑缺血大鼠血浆及脑组织ET-1含量。结果 脑缺血大鼠血浆及脑组织ET-1含量明显升高。结论 ET参与脑缺血的病理生理过程，ET升高可能是脑缺血的一个重要因素。
研究表明，在蛛网膜下腔出血患者中，血浆内皮素-1(ET-1)含量升高，加重脑血管痉挛，脑缺血时，血浆ET含量，亦增加，但脑缺血时脑组织ET含量的变化报道很少。本研究通过测定脑缺血大鼠血浆及脑组织ET-1的含量，探讨ET与脑缺血的关系。
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1 材料与方法
1.1 动物与分组 雄性成年Wistar大鼠16只，体重200～250g，由同济医科大学实验动物中心提供，随机分为脑缺血组和假手术组，各8只。
1.2 动物模型制作 采用双侧颈总动脉结扎法，用5%水合氯醛34mg/100g，腹腔麻醉。脑缺血组，颈部正中切开分离，用4号丝线结扎双侧颈总动脉；假手术组，麻醉、颈部切开分离后不结扎颈总动脉。
1.3 实验方法 在脑缺血及假手术模型制作成功后24h，快速腹腔静脉取血2ml及断头取脑，取血2ml注入含10%EDTA-Na230μl和抑肽酶40μl的试管中，混匀，4℃3000r/min离心10min，分离血浆，-70℃保存。断头后取前脑100mg，放入0.1mol/LHAc1ml，在100℃水浴中煮沸10min，匀浆，4℃3000r/min离心15min，取上清液-70℃保存备用。
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1.4 ET-1测定 使用中国科技大学研制的GC-1200r放免计数器，ET试剂盒由东亚免疫技术研究所提供，采用非平衡法，严格按说明书进行操作。
1.5 统计方法 数据以
±s表示，两组比较采用t检验。
2 结果与讨论
脑缺血组与假手术组相比，脑缺血组血浆及脑组织ET-1含量显著升高(P<0.01)，见表1。
ET不仅存在于神经系统的一些内皮细胞中，也广泛分布于神经细胞内。研究表明，ET的合成过程为前内皮素原在特异性肽酶水解下形成大ET前体，后者经ET转换酶形成高活性ET。ET的合成和分泌是在mRNA转录和翻译水平上进行的，受多种化学或物理因素的调节。在正常情况下，ET的产生与降解处于动态平衡，且浓度较低，不产生病理作用。Willette等〔1〕研究认为一过性脑缺血造成ET合成和利用急剧增加。Wu等〔2〕用斑点杂交技术证明，脑皮质和尾状核在缺血6hET-1mRNA表达增强，缺血24h达到高峰，至72h维持在高水平。因此认为，局部缺血的脑组织在缺血期间ET-1基因表达呈显著的进行性增强。本实验结果与Willette及Wu等研究观点基本一致。提示ET参与脑缺血的病理生理过程，ET升高可能成为脑缺血的一个重要因素。脑缺血时ET升高的原因还不十分清楚，可能与下列因素有关〔3〕：(1)急性脑梗塞时躯体应激反应使全身血管内皮产生ET-1非特异性升高。(2)在脑梗塞区不仅有神经元的损害，还有局部血管的损害，引起受累脑微血管内皮细胞产生ET-1和ET-1漏出增加。(3)缺氧刺激ET-1合成和释放。(4)缺血区凝血酶增加可诱导ET释放。
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表1 两组血浆及脑组织ET-1含量(
±s) 组别
血浆
脑组织
n
ET-1(pg/ml)
n
ET-1(pg/ml)
假手术组
8
90.38±23.32
6
, 百拇医药
9.65±1.83
脑缺血组
8
142.75±30.231)
6
20.89±2.301)
与假手术组比较：1)P<0.01
ET激发神经细胞信息传递的机制，目前认为可能通过两种信号传递系统〔4〕。一是激活电压的L型Ca2+通道，使胞浆内Ca2+增高。二是通过与其特异性受体结合后激活磷脂酶C(PLC)，PLC水解磷脂酰肌醇产生三磷酸肌醇脂(IP3)，四磷酸肌醇脂(IP4)和二酰甘油(DAG)，其中IP3和IP4可促进细胞外Ca2+内流和细胞内内质网的Ca2+释放至胞浆，而DAG又可激活蛋白激酶C(PKC)，Ca2+升高和PKC激活可引起血管收缩。动物实验还发现，经脑池或静脉给予ET-1可以引起严重而持久的血管痉挛，持续时间达72h〔5〕。静脉注射ET-1将减少脑血流，导致脑梗塞的发生〔6〕。ET除通过血管收缩加重局部缺血外，可能直接作用于神经元或神经胶质诱发中风发作。因此，脑缺血时ET升高可以直接或间接造成神经细胞的损害，应引起重视，拮抗脑缺血时升高的ET应作为治疗缺血性脑血管病的一个重要措施。
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作者简介：吴苏宁，男，33岁，主治医师，硕士，研究方向：脑血管疾病
3 参考文献
1 Willette RN，Ohlstein EH，Pullen M et al.Transient forebrain ischemia alters acutely endothelin receptor density and immunoreactivity in gerbil brain.Life Sci，1993；52(1)：35
2 Wu W，Kuang P,Li Z.Changes of endothelin-1 gene expression in rat brains during ischemia reperfusion .Chin Med Sci J，1996；11：228
3 Ziv I，Fleminger G，Dyaldetti R et al.Increased plasma endothelin-1 in acute stroke.Stroke，1992；23：1014
, 百拇医药
4 Greenberg DA，Chan J,Sampson HA et al.Endothelins and the nervous system.Neurology，1992；42(1)：25
5 Kobayashi H，Hayashi M,Kobayashi S et al.Effect of endothelin on the canine basilar artery.Neurosurery，1990；27：357
6 Reid JL，Dawson D,Macrao IM.Endothelin,cerebral ischemia and infarction.Clin Exp Hypertens，1995；17：399
〔1998-09-21收稿 1999-01-14修回〕, 百拇医药
单位：同济医科大学附属协和医院神经内科，武汉 430022
关键词：脑缺血；血浆；脑组织；内皮素-1
中国老年学杂志/990325 摘 要 目的 研究脑缺血大鼠血浆及脑组织ET-1含量的变化。方法 采用双侧颈总动脉结扎法建立大鼠脑缺血模型，用RIA法测定脑缺血大鼠血浆及脑组织ET-1含量。结果 脑缺血大鼠血浆及脑组织ET-1含量明显升高。结论 ET参与脑缺血的病理生理过程，ET升高可能是脑缺血的一个重要因素。
研究表明，在蛛网膜下腔出血患者中，血浆内皮素-1(ET-1)含量升高，加重脑血管痉挛，脑缺血时，血浆ET含量，亦增加，但脑缺血时脑组织ET含量的变化报道很少。本研究通过测定脑缺血大鼠血浆及脑组织ET-1的含量，探讨ET与脑缺血的关系。
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1 材料与方法
1.1 动物与分组 雄性成年Wistar大鼠16只，体重200～250g，由同济医科大学实验动物中心提供，随机分为脑缺血组和假手术组，各8只。
1.2 动物模型制作 采用双侧颈总动脉结扎法，用5%水合氯醛34mg/100g，腹腔麻醉。脑缺血组，颈部正中切开分离，用4号丝线结扎双侧颈总动脉；假手术组，麻醉、颈部切开分离后不结扎颈总动脉。
1.3 实验方法 在脑缺血及假手术模型制作成功后24h，快速腹腔静脉取血2ml及断头取脑，取血2ml注入含10%EDTA-Na230μl和抑肽酶40μl的试管中，混匀，4℃3000r/min离心10min，分离血浆，-70℃保存。断头后取前脑100mg，放入0.1mol/LHAc1ml，在100℃水浴中煮沸10min，匀浆，4℃3000r/min离心15min，取上清液-70℃保存备用。
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1.4 ET-1测定 使用中国科技大学研制的GC-1200r放免计数器，ET试剂盒由东亚免疫技术研究所提供，采用非平衡法，严格按说明书进行操作。
1.5 统计方法 数据以
±s表示，两组比较采用t检验。2 结果与讨论
脑缺血组与假手术组相比，脑缺血组血浆及脑组织ET-1含量显著升高(P<0.01)，见表1。
ET不仅存在于神经系统的一些内皮细胞中，也广泛分布于神经细胞内。研究表明，ET的合成过程为前内皮素原在特异性肽酶水解下形成大ET前体，后者经ET转换酶形成高活性ET。ET的合成和分泌是在mRNA转录和翻译水平上进行的，受多种化学或物理因素的调节。在正常情况下，ET的产生与降解处于动态平衡，且浓度较低，不产生病理作用。Willette等〔1〕研究认为一过性脑缺血造成ET合成和利用急剧增加。Wu等〔2〕用斑点杂交技术证明，脑皮质和尾状核在缺血6hET-1mRNA表达增强，缺血24h达到高峰，至72h维持在高水平。因此认为，局部缺血的脑组织在缺血期间ET-1基因表达呈显著的进行性增强。本实验结果与Willette及Wu等研究观点基本一致。提示ET参与脑缺血的病理生理过程，ET升高可能成为脑缺血的一个重要因素。脑缺血时ET升高的原因还不十分清楚，可能与下列因素有关〔3〕：(1)急性脑梗塞时躯体应激反应使全身血管内皮产生ET-1非特异性升高。(2)在脑梗塞区不仅有神经元的损害，还有局部血管的损害，引起受累脑微血管内皮细胞产生ET-1和ET-1漏出增加。(3)缺氧刺激ET-1合成和释放。(4)缺血区凝血酶增加可诱导ET释放。
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表1 两组血浆及脑组织ET-1含量(
±s) 组别血浆
脑组织
n
ET-1(pg/ml)
n
ET-1(pg/ml)
假手术组
8
90.38±23.32
6
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9.65±1.83
脑缺血组
8
142.75±30.231)
6
20.89±2.301)
与假手术组比较：1)P<0.01
ET激发神经细胞信息传递的机制，目前认为可能通过两种信号传递系统〔4〕。一是激活电压的L型Ca2+通道，使胞浆内Ca2+增高。二是通过与其特异性受体结合后激活磷脂酶C(PLC)，PLC水解磷脂酰肌醇产生三磷酸肌醇脂(IP3)，四磷酸肌醇脂(IP4)和二酰甘油(DAG)，其中IP3和IP4可促进细胞外Ca2+内流和细胞内内质网的Ca2+释放至胞浆，而DAG又可激活蛋白激酶C(PKC)，Ca2+升高和PKC激活可引起血管收缩。动物实验还发现，经脑池或静脉给予ET-1可以引起严重而持久的血管痉挛，持续时间达72h〔5〕。静脉注射ET-1将减少脑血流，导致脑梗塞的发生〔6〕。ET除通过血管收缩加重局部缺血外，可能直接作用于神经元或神经胶质诱发中风发作。因此，脑缺血时ET升高可以直接或间接造成神经细胞的损害，应引起重视，拮抗脑缺血时升高的ET应作为治疗缺血性脑血管病的一个重要措施。
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作者简介：吴苏宁，男，33岁，主治医师，硕士，研究方向：脑血管疾病
3 参考文献
1 Willette RN，Ohlstein EH，Pullen M et al.Transient forebrain ischemia alters acutely endothelin receptor density and immunoreactivity in gerbil brain.Life Sci，1993；52(1)：35
2 Wu W，Kuang P,Li Z.Changes of endothelin-1 gene expression in rat brains during ischemia reperfusion .Chin Med Sci J，1996；11：228
3 Ziv I，Fleminger G，Dyaldetti R et al.Increased plasma endothelin-1 in acute stroke.Stroke，1992；23：1014
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4 Greenberg DA，Chan J,Sampson HA et al.Endothelins and the nervous system.Neurology，1992；42(1)：25
5 Kobayashi H，Hayashi M,Kobayashi S et al.Effect of endothelin on the canine basilar artery.Neurosurery，1990；27：357
6 Reid JL，Dawson D,Macrao IM.Endothelin,cerebral ischemia and infarction.Clin Exp Hypertens，1995；17：399
〔1998-09-21收稿 1999-01-14修回〕, 百拇医药