人恶性卵巢上皮肿瘤p53基因5～8外显子突变的研究
作者：马艳 曾宪端
单位：湖南衡阳医学院附一院(422000)
关键词：卵巢肿瘤；p53基因
中国现代医学杂志990314 为探明p53基因突变与恶性卵巢上皮肿瘤发生发展的关系，采用PCR-SSCP法对40例恶性卵巢上皮肿瘤及30例良性卵巢上皮肿瘤(对照)的p53基因第5～8外显子突变情况进行了检测。结果显示：恶性卵巢上皮肿瘤p53基因5～8外显子点突变率为30%，而30例良性卵巢上皮肿瘤中未发现p53基因突变。结论：在卵巢良性肿瘤向恶性转化过程中，p53基因突变可能起着重要作用。
分类号 R737.31
野生型p53基因是一种抑癌基因，而p53基因突变已被发现是与人类恶性肿瘤有关的最常见的基因异常[1]。p53基因的结构和功能较清楚，它由11个外显子和10个内含子组成，其98%的突变集中在5～8外显子内，即117～142，171～181，230～258，270～280密码子区域。有文献报道，PCR-SSCP分析检测基因突变的准确性为90%～100%[2]。因此，我们采用该方法对40例恶性卵巢上皮肿瘤p53基因的5～8外显子突变进行检测，并以30例良性卵巢上皮肿瘤作对照，以探讨p53基因突变与恶性卵巢上皮肿瘤发生发展的关系。
, 百拇医药
1 资料与方法
1.1 样本来源及分组
标本取自我院及衡阳市妇幼保健院1994年1月～1996年12月存档的病理石蜡包埋组织，并由两位病理学专家复核确诊。恶性上皮肿瘤组(实验组)40例，其中浆液性癌20例，粘液性癌20例。并取同期良性上皮肿瘤30例作对照组。在恶性肿瘤中，组织分化Ⅰ级9例，Ⅱ级14例，Ⅲ级17例。
1.2 组织DNA提取
石蜡组织→切片3～5cm→二甲苯脱蜡→酒精脱二甲苯→DNA抽提，蛋白酶K消化→乙醇沉淀→组织DNA。
1.3 PCR-SSCP
p53基因5～8外显子引物序列来自文献[3]，由衡阳医学院分子生物中心合成。
, http://www.100md.com
反应总体积为50μl，各反应成分浓度参考卢圣栋[4]，模板DNA 0.2μg，4种底物(dATP、dGTP、dCTP、dTTP)各200μmol/L，2个引物各0.25μmol/L，明胶100μg/ml，MgCl2 1.5mmol/L，Tris.d(pH 8.4)50mol/L，将上述成分混合均匀后放入95℃水浴5min，冷却至4℃，加Taq DNA聚合酶2.5u，封上20μl 石蜡油，进行循环扩增，循环参数：94℃变性40s，55℃退火40s，72℃延伸90s，循环30次。取产物于6%聚丙烯酰胺凝胶电泳，溴化乙淀染色显带，紫外线光下观察带型。
1.4 统计学方法
采用χ2检验(四格表、分割四格表及确切概率法)，当P≤0.05时，认为差异有显著性。
2 结果
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30例卵巢良性上皮肿瘤未发现p53点突变。在恶性卵巢上皮肿瘤中，p535～8外显子突变12例，占30%(12/40)，经χ2检验差异有显著性(P<0.01)(见表1)。在不同组织学分级中，p53突变频率有一定的差异。但经χ2检验此差异无显著性(P>0.05)(见表2)。
表1 恶性卵巢上皮肿瘤组织p53基因点突变 分组
p53基因突变
无突变
合计
实验组
12
28
40
, 百拇医药
对照组
0
30
30
合 计
12
58
70
注：χ2＝10.8621 P<0.01
表2 不同组织学分级p53基因点突变 分级
p53基因突变
无突变
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合 计
Ⅰ级
2
7
9
Ⅱ级
6
8
14
Ⅲ级
4
13
17
合 计
, 百拇医药
12
28
40
注：χ2＝1.6594 P>0.05
3 讨论
p53基因作为一个抗癌基因，在防止细胞癌变中起着至关重要的作用。然而，当其在某些因素作用下发生变化而变为突变型p53基因时，便不再具有抗癌活性，反而对细胞的癌变过程有一定的促进作用。在基因的众多改变中，点突变是使此类抗癌基因变为致癌基因的重要原因。
p53基因点突变出现在许多肿瘤中，卵巢癌中亦多有报道，然其突变率各家看法有一定差异[5，6]。本文对恶性卵巢上皮肿瘤p53基因突变情况进行了检测，发现p53基因突变在该类肿瘤中发生率为30%(12/40)，明显高于良性肿瘤，经χ2检验差异有显著性(P<0.01)。
, 百拇医药
卵巢上皮性肿瘤从良性到恶性的发展过程中，p53基因突变起了一定的作用。尽管目前对突变型p53基因在致癌过程中的哪个环节上的作用尚不能绝对肯定，但在多基因相互作用学说中，突变型p53基因致细胞癌变已为人们所接受。
p53基因突变是否受到组织学分化程度的影响，尚有争议。组织学分化的好坏，与癌症临床过程有相当密切的关系，但该种组织学分化对p53基因突变影响如何呢?本研究对不同组织学分级的肿瘤组织p53基因突变进行了研究。结果表明，组织分化程度不同，其瘤组织p53基因突变情况亦有不同，但此种差异在组织学分级之间无显著意义(P>0.05)。因而认为，p53基因突变与肿瘤组织学分级无关。
p53基因突变是否与其它因素有关?如肿瘤大小，有否转移，有否手术残留等，有待进一步研究。
参考文献
1 Hollsteir M,Sidronsky D,Vogelsten B,et al.p53 mutation in human Cancers.Science,1991;253:49
, 百拇医药
2 Soussi T,legrosy Y,LubinR,et al.Multifactorial analysis of p53 alternation in human cancer:a reuew.Lnt J Cancer,1994;57:1
3 Okamoto A,Sameshime Y.Frequest Allelil losses and mutation of the p53 Gere in Human Ovarian Cancer.Cancer Res,1991;51(19):5171～5176
4 卢圣栋.现代分子生物学技术.北京：北京教育出版社，1993：409
5 Sandes CA. p53 Mutation is associated with progression in follicular lymphomas.Blood,1993;82(7):1994：1
6 Yosure K. Aberrattens of the p53 Tumor suppressor gere in Human non-small cell careinomas of the lung.Cancer Res,1992；52:4799～4801
1998-09-08收稿
, 百拇医药
单位：湖南衡阳医学院附一院(422000)
关键词：卵巢肿瘤；p53基因
中国现代医学杂志990314 为探明p53基因突变与恶性卵巢上皮肿瘤发生发展的关系，采用PCR-SSCP法对40例恶性卵巢上皮肿瘤及30例良性卵巢上皮肿瘤(对照)的p53基因第5～8外显子突变情况进行了检测。结果显示：恶性卵巢上皮肿瘤p53基因5～8外显子点突变率为30%，而30例良性卵巢上皮肿瘤中未发现p53基因突变。结论：在卵巢良性肿瘤向恶性转化过程中，p53基因突变可能起着重要作用。
分类号 R737.31
野生型p53基因是一种抑癌基因，而p53基因突变已被发现是与人类恶性肿瘤有关的最常见的基因异常[1]。p53基因的结构和功能较清楚，它由11个外显子和10个内含子组成，其98%的突变集中在5～8外显子内，即117～142，171～181，230～258，270～280密码子区域。有文献报道，PCR-SSCP分析检测基因突变的准确性为90%～100%[2]。因此，我们采用该方法对40例恶性卵巢上皮肿瘤p53基因的5～8外显子突变进行检测，并以30例良性卵巢上皮肿瘤作对照，以探讨p53基因突变与恶性卵巢上皮肿瘤发生发展的关系。
, 百拇医药
1 资料与方法
1.1 样本来源及分组
标本取自我院及衡阳市妇幼保健院1994年1月～1996年12月存档的病理石蜡包埋组织，并由两位病理学专家复核确诊。恶性上皮肿瘤组(实验组)40例，其中浆液性癌20例，粘液性癌20例。并取同期良性上皮肿瘤30例作对照组。在恶性肿瘤中，组织分化Ⅰ级9例，Ⅱ级14例，Ⅲ级17例。
1.2 组织DNA提取
石蜡组织→切片3～5cm→二甲苯脱蜡→酒精脱二甲苯→DNA抽提，蛋白酶K消化→乙醇沉淀→组织DNA。
1.3 PCR-SSCP
p53基因5～8外显子引物序列来自文献[3]，由衡阳医学院分子生物中心合成。
, http://www.100md.com
反应总体积为50μl，各反应成分浓度参考卢圣栋[4]，模板DNA 0.2μg，4种底物(dATP、dGTP、dCTP、dTTP)各200μmol/L，2个引物各0.25μmol/L，明胶100μg/ml，MgCl2 1.5mmol/L，Tris.d(pH 8.4)50mol/L，将上述成分混合均匀后放入95℃水浴5min，冷却至4℃，加Taq DNA聚合酶2.5u，封上20μl 石蜡油，进行循环扩增，循环参数：94℃变性40s，55℃退火40s，72℃延伸90s，循环30次。取产物于6%聚丙烯酰胺凝胶电泳，溴化乙淀染色显带，紫外线光下观察带型。
1.4 统计学方法
采用χ2检验(四格表、分割四格表及确切概率法)，当P≤0.05时，认为差异有显著性。
2 结果
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30例卵巢良性上皮肿瘤未发现p53点突变。在恶性卵巢上皮肿瘤中，p535～8外显子突变12例，占30%(12/40)，经χ2检验差异有显著性(P<0.01)(见表1)。在不同组织学分级中，p53突变频率有一定的差异。但经χ2检验此差异无显著性(P>0.05)(见表2)。
表1 恶性卵巢上皮肿瘤组织p53基因点突变 分组
p53基因突变
无突变
合计
实验组
12
28
40
, 百拇医药
对照组
0
30
30
合 计
12
58
70
注：χ2＝10.8621 P<0.01
表2 不同组织学分级p53基因点突变 分级
p53基因突变
无突变
, http://www.100md.com
合 计
Ⅰ级
2
7
9
Ⅱ级
6
8
14
Ⅲ级
4
13
17
合 计
, 百拇医药
12
28
40
注：χ2＝1.6594 P>0.05
3 讨论
p53基因作为一个抗癌基因，在防止细胞癌变中起着至关重要的作用。然而，当其在某些因素作用下发生变化而变为突变型p53基因时，便不再具有抗癌活性，反而对细胞的癌变过程有一定的促进作用。在基因的众多改变中，点突变是使此类抗癌基因变为致癌基因的重要原因。
p53基因点突变出现在许多肿瘤中，卵巢癌中亦多有报道，然其突变率各家看法有一定差异[5，6]。本文对恶性卵巢上皮肿瘤p53基因突变情况进行了检测，发现p53基因突变在该类肿瘤中发生率为30%(12/40)，明显高于良性肿瘤，经χ2检验差异有显著性(P<0.01)。
, 百拇医药
卵巢上皮性肿瘤从良性到恶性的发展过程中，p53基因突变起了一定的作用。尽管目前对突变型p53基因在致癌过程中的哪个环节上的作用尚不能绝对肯定，但在多基因相互作用学说中，突变型p53基因致细胞癌变已为人们所接受。
p53基因突变是否受到组织学分化程度的影响，尚有争议。组织学分化的好坏，与癌症临床过程有相当密切的关系，但该种组织学分化对p53基因突变影响如何呢?本研究对不同组织学分级的肿瘤组织p53基因突变进行了研究。结果表明，组织分化程度不同，其瘤组织p53基因突变情况亦有不同，但此种差异在组织学分级之间无显著意义(P>0.05)。因而认为，p53基因突变与肿瘤组织学分级无关。
p53基因突变是否与其它因素有关?如肿瘤大小，有否转移，有否手术残留等，有待进一步研究。
参考文献
1 Hollsteir M,Sidronsky D,Vogelsten B,et al.p53 mutation in human Cancers.Science,1991;253:49
, 百拇医药
2 Soussi T,legrosy Y,LubinR,et al.Multifactorial analysis of p53 alternation in human cancer:a reuew.Lnt J Cancer,1994;57:1
3 Okamoto A,Sameshime Y.Frequest Allelil losses and mutation of the p53 Gere in Human Ovarian Cancer.Cancer Res,1991;51(19):5171～5176
4 卢圣栋.现代分子生物学技术.北京：北京教育出版社，1993：409
5 Sandes CA. p53 Mutation is associated with progression in follicular lymphomas.Blood,1993;82(7):1994：1
6 Yosure K. Aberrattens of the p53 Tumor suppressor gere in Human non-small cell careinomas of the lung.Cancer Res,1992；52:4799～4801
1998-09-08收稿
, 百拇医药