两所医院绿脓杆菌耐药小质粒同源性分析
作者：丁亚 肖红 周吉军
单位：第三军医大学预防医学系军队流行病学教研室 重庆，400038
关键词：绿脓杆菌；医院内感染；药物耐受性；质粒
Homological analysis of small antibiotic resistance plasmids from two hospitalsHomological analysis of small antibiotic resistance plasmids from two hospitals
提要 目的：研究分析2所医院院内感染绿脓杆菌耐药小质粒同源性。方法：46株耐药绿脓杆菌样本来自两个医院，其中甲院34株，乙院12株。发现甲院有10株(29.4%)携带质粒，乙院有4株带有质粒(33.3%)。运用质粒转导技术和限制性内切酶谱分析。结果：8株(甲院6株，乙院2株)被证实为小耐药质粒，其中又有5株质粒(3.4 kb或3.6 kb)可诱导氯霉素耐药性，2株(2.5 kb)可诱导卡那霉素耐药性，另有1株(4.5 kb)可诱导对四环素耐药性。结论：推测2所医院部分耐药绿脓杆菌的小耐药质粒可能具有同源性，且又有所变异。
, 百拇医药
中图法分类号 R378.991
医院内感染菌株存在广泛的耐药性，耐药性的产生与抗生素的非正常使用及R质粒有关。本研究对来自2所相距2 km的医院的绿脓杆菌耐药小质粒进行了同源性分析。
1 材料与方法
1.1 菌株采集
耐药绿脓杆菌来自相距约2 km的2所教学医院的不同院内感染病人(取自痰或血标本)。其中甲院34株，乙院12株，且分别具有一定抗生素耐药性。
1.2 质粒的检测、提取纯化、浓缩
用Birnbiom法[1，2]检测、提取质粒DNA，水饱和酚/氯仿分别纯化质粒DNA，用丁醇抽提浓缩法[3]浓缩所提取质粒DNA。
, 百拇医药
1.3 质粒转化实验
以大肠杆菌JM103为受体菌，将所获质粒转化至JM103中，培养观察其是否获得耐药性[4]。
1.4 质粒的限制性内切酶谱分析
针对所获质粒，HindⅢ，EcoRⅠ，PstⅠ等酶分别进行酶切，利用限制性内切酶图谱进行质粒同源性鉴定。
2 结果
在甲院34株样本中，发现有10株带有质粒(29.4%)，乙院12株样本中，有4株带有质粒(33.3%)。通过质粒转化实验，共发现8株小质粒(甲院6株，乙院2株)，即仅诱导对单一某种抗生素的耐药性。这8株小质粒研究结果见表1。其中有5株(1，2，3，4，8号)被证实可诱导氯霉素耐药性，另有1株(6号)可诱导对四环素的耐药性。
, 百拇医药
表1 8种耐药小质粒酶切片段谱及耐药性
质粒
大小
HindⅢ
EcoRⅠ
PstⅠ
耐药性
(kb)
(kb)
(kb)
(kb)
1
3.4
, 百拇医药
2.1,0.8,0.5
1.8,0.7,0.6,0.3
1.6,1.4,0.4
氯霉素
2
3.4
2.1,0.8,0.5
1.8,0.7,0.6,0.3
1.6,1.4,0.4
氯霉素
3
3.4
, 百拇医药
2.1,0.8,0.5
1.8,0.7,0.6,0.3
1.6,1.4,0.4
氯霉素
4
3.4
2.1,0.8,0.5
1.8,0.7,0.6,0.3
1.6,1.4,0.4
氯霉素
5
2.5
, 百拇医药
1.5,1.0
1.2,0.8,0.5
1.7,1.8
卡那霉素
6
4.2
2.6,1.2,0.4
2.0,1.5,0.7
1.6,1.3,0.8,0.5
四环素
7
2.5
, 百拇医药
1.5,1.0
1.2,0.8,0.5
1.7,1.8
卡那霉素
8
3.6
2.1,1.0,0.5
1.8,0.9,0.6,0.3
1.6,1.4,0.4,0.2
氯霉素
注：1～6号质粒来源于甲院，7、8号质粒来源于乙院。
3 讨论
, 百拇医药
经质粒限制性内切酶谱分析，可诱导氯霉素耐药性的5株小质粒，其中1～4号均来自甲院，大小均为3.4 kb，其HindⅢ，EcoRⅠ，PstⅠ 3种内切酶酶切谱完全相同，故具有同源性。而8号来自乙院，大小为3.6 kb，其3种酶切谱与1～4号近似，又考虑到其诱导相似耐药性，故推测具同源性，但它们之间存在变异至于如何变异如何区别野生株或变异株，还有待进一步研究。同样，可诱导卡那霉素耐药性的2株质粒(5，7号)，虽来自不同医院，但均为2.5 kb，且3种内切酶酶切谱完全一致，显示2所医院的绿脓杆菌耐药小质粒部分具有同源性，支持R质粒是细菌耐药性传递的重要途径的观点[5]。
作者简介：丁亚，女，32岁，助理实验师
参考文献
1 Birnbiom H C, Doly J. Arapid alkaline extraction procedure for screening recombinant plasmid DNA. Nucleic Acids Res,1979，7(6):1513
, 百拇医药
2 卢圣主栋编.现代分子生物学技术.北京：中国医学科学院北京协和医学音像出版社，1992.2～70
3 蔡文琴，王伯主编.实用免疫细胞化学与核酸分子杂交技术.成都：四川科学技术出版社，1994.479～494
4 Mikio K. Polypyrimidine/polypurine sequence in plasmid DNA enhances formation of dimer molecules in Escherichia Coli. Molecular Biology Reports,1993，18(1):83
5 Quentmeier A, Grant W. Transfer and expression of degradative and antibiotic resistance plasmids in acidophilic bacteria. Appl Environ Microbiol,1994，60(3):973
(收稿：1998-03-23；修回：1998-09-14), http://www.100md.com
单位：第三军医大学预防医学系军队流行病学教研室 重庆，400038
关键词：绿脓杆菌；医院内感染；药物耐受性；质粒
Homological analysis of small antibiotic resistance plasmids from two hospitalsHomological analysis of small antibiotic resistance plasmids from two hospitals
提要 目的：研究分析2所医院院内感染绿脓杆菌耐药小质粒同源性。方法：46株耐药绿脓杆菌样本来自两个医院，其中甲院34株，乙院12株。发现甲院有10株(29.4%)携带质粒，乙院有4株带有质粒(33.3%)。运用质粒转导技术和限制性内切酶谱分析。结果：8株(甲院6株，乙院2株)被证实为小耐药质粒，其中又有5株质粒(3.4 kb或3.6 kb)可诱导氯霉素耐药性，2株(2.5 kb)可诱导卡那霉素耐药性，另有1株(4.5 kb)可诱导对四环素耐药性。结论：推测2所医院部分耐药绿脓杆菌的小耐药质粒可能具有同源性，且又有所变异。
, 百拇医药
中图法分类号 R378.991
医院内感染菌株存在广泛的耐药性，耐药性的产生与抗生素的非正常使用及R质粒有关。本研究对来自2所相距2 km的医院的绿脓杆菌耐药小质粒进行了同源性分析。
1 材料与方法
1.1 菌株采集
耐药绿脓杆菌来自相距约2 km的2所教学医院的不同院内感染病人(取自痰或血标本)。其中甲院34株，乙院12株，且分别具有一定抗生素耐药性。
1.2 质粒的检测、提取纯化、浓缩
用Birnbiom法[1，2]检测、提取质粒DNA，水饱和酚/氯仿分别纯化质粒DNA，用丁醇抽提浓缩法[3]浓缩所提取质粒DNA。
, 百拇医药
1.3 质粒转化实验
以大肠杆菌JM103为受体菌，将所获质粒转化至JM103中，培养观察其是否获得耐药性[4]。
1.4 质粒的限制性内切酶谱分析
针对所获质粒，HindⅢ，EcoRⅠ，PstⅠ等酶分别进行酶切，利用限制性内切酶图谱进行质粒同源性鉴定。
2 结果
在甲院34株样本中，发现有10株带有质粒(29.4%)，乙院12株样本中，有4株带有质粒(33.3%)。通过质粒转化实验，共发现8株小质粒(甲院6株，乙院2株)，即仅诱导对单一某种抗生素的耐药性。这8株小质粒研究结果见表1。其中有5株(1，2，3，4，8号)被证实可诱导氯霉素耐药性，另有1株(6号)可诱导对四环素的耐药性。
, 百拇医药
表1 8种耐药小质粒酶切片段谱及耐药性
质粒
大小
HindⅢ
EcoRⅠ
PstⅠ
耐药性
(kb)
(kb)
(kb)
(kb)
1
3.4
, 百拇医药
2.1,0.8,0.5
1.8,0.7,0.6,0.3
1.6,1.4,0.4
氯霉素
2
3.4
2.1,0.8,0.5
1.8,0.7,0.6,0.3
1.6,1.4,0.4
氯霉素
3
3.4
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2.1,0.8,0.5
1.8,0.7,0.6,0.3
1.6,1.4,0.4
氯霉素
4
3.4
2.1,0.8,0.5
1.8,0.7,0.6,0.3
1.6,1.4,0.4
氯霉素
5
2.5
, 百拇医药
1.5,1.0
1.2,0.8,0.5
1.7,1.8
卡那霉素
6
4.2
2.6,1.2,0.4
2.0,1.5,0.7
1.6,1.3,0.8,0.5
四环素
7
2.5
, 百拇医药
1.5,1.0
1.2,0.8,0.5
1.7,1.8
卡那霉素
8
3.6
2.1,1.0,0.5
1.8,0.9,0.6,0.3
1.6,1.4,0.4,0.2
氯霉素
注：1～6号质粒来源于甲院，7、8号质粒来源于乙院。
3 讨论
, 百拇医药
经质粒限制性内切酶谱分析，可诱导氯霉素耐药性的5株小质粒，其中1～4号均来自甲院，大小均为3.4 kb，其HindⅢ，EcoRⅠ，PstⅠ 3种内切酶酶切谱完全相同，故具有同源性。而8号来自乙院，大小为3.6 kb，其3种酶切谱与1～4号近似，又考虑到其诱导相似耐药性，故推测具同源性，但它们之间存在变异至于如何变异如何区别野生株或变异株，还有待进一步研究。同样，可诱导卡那霉素耐药性的2株质粒(5，7号)，虽来自不同医院，但均为2.5 kb，且3种内切酶酶切谱完全一致，显示2所医院的绿脓杆菌耐药小质粒部分具有同源性，支持R质粒是细菌耐药性传递的重要途径的观点[5]。
作者简介：丁亚，女，32岁，助理实验师
参考文献
1 Birnbiom H C, Doly J. Arapid alkaline extraction procedure for screening recombinant plasmid DNA. Nucleic Acids Res,1979，7(6):1513
, 百拇医药
2 卢圣主栋编.现代分子生物学技术.北京：中国医学科学院北京协和医学音像出版社，1992.2～70
3 蔡文琴，王伯主编.实用免疫细胞化学与核酸分子杂交技术.成都：四川科学技术出版社，1994.479～494
4 Mikio K. Polypyrimidine/polypurine sequence in plasmid DNA enhances formation of dimer molecules in Escherichia Coli. Molecular Biology Reports,1993，18(1):83
5 Quentmeier A, Grant W. Transfer and expression of degradative and antibiotic resistance plasmids in acidophilic bacteria. Appl Environ Microbiol,1994，60(3):973
(收稿：1998-03-23；修回：1998-09-14), http://www.100md.com