毛细管电泳同时测定尿中肌酐和尿酸
作者：周小棉 邹 晓 王毅超
单位：第一军医大学南方医院检验科，广州，501515
关键词：肌酐；尿酸；毛细管电泳
毛细管电泳同时测定尿中肌酐和尿酸 摘要：目的 建立高效毛细管电泳测定肌酐和尿酸的新方法。方法 选择pH 7.2、120mmol/L SDS、30mmol/L磷酸盐缓冲液作胶束电动毛细管电泳运行液，利用外标法定量，检测波光235 nm，同时测定尿肌酐和尿酸； 非涂渍毛细管21cm×50mm (1,d)；电压10kV，自动进样2s，电泳6min。结果 肌酐和尿酸的线性范围分别为7000～27.030m mol/L，3000～40.625m mol/L，最低检测限分别为9.190m mol/L和20.310m mol/L。建立了直接测定尿肌酐和尿酸两者浓度的毛细管电泳方法。本法的日内和日间变异系数都小于4.5%。肌酐和尿酸的平均回收率分别为102.7%和99.6%。内生化合物和常用药物对此方法无干扰。结论 该方法线性范围宽，无需作样品稀释，简单、快速、可应用于临床样品检测。
, 百拇医药
中图分类号: R446.12
Simultaneous determination of creatinine and uric acid in human urine by high-performance capillary electrophoresis
Zhou Xiaomian, Zou Xiao, Wang Yichao
Department of Medical Laboratory, Nanfang Hospital, First Military Medical University, Guangzhou, 510515
Abstract: Objective To develop a new method for simultaneous determination of creatinine and uric acid in human urine using capillary electrophoresis (CE). Methods Using pH7.2, 120 mmol/L SDS, 30 mmol/L phosphate buffer as electrophoresis buffer, uncoated fused-silica capillary 21 cm×50 m m (i.d.) creatinine and uric acid were detected at the voltage of 10 kV at 235 nm, running time of 6 min, automatic injection by pressure. Results The linear concentration of creatinine and uric acid were 7000～27.030 m mol/L, 3 000～40.625 m mol/L, respectively. The average recoveries of creatinine and uric acid at different levels were found to be 102.27% (n = 9) and 101.45% (n = 9), respectively. The lowest detection limit was 9.19 m mol/L for creatinine and 20.7 m mol/L for uric acid. The precision studies of the assay both within one day and between days produced CV values less than 4.5%. Endogenous chemicals and commonly-used drugs showed no interference with this chromatographic procedure. Conclusion CE, which can simultaneously determine creatinine and uric acid in human urine, is simple and rapid to perform.
, 百拇医药
Key words: creatinine; uric acid; urine; capillary electrophoresis
我们用外标法建立了直接测定尿中肌酐和尿酸浓度的胶束动电毛细管电泳方法，方法稳定、简单、快速。方法如下:
1 材料与方法
1.1 仪器 BioFocus-3000自动毛细管电泳分析仪(美国Bio-RAD公司产品)，具有二极管阵列的可见紫外多波长扫描系统。自动与手动数据处理系统。最大电压30 kV 。非涂渍毛细管长度21cm，内径 50mm，河北永年光导纤维厂产品。
1.2 试剂
1.2.1 电泳缓冲液 pH7.2、120mmol/L SDS、30mmol/L磷酸盐缓冲液，配制：32.68g SDS、1.31g NaH2PO4.2H2O、7.73g Na2HPO4.12H2O加去离子水至1000ml。SDS (Bio-RAD公司产品) 电泳纯级，其它试剂均为分析纯。
, 百拇医药
1.2.2 肌酐标准储备液 精确称取肌酐(Fluka公司产品)79.17mg，加适量去离子水溶解，然后再加水至100ml容量瓶中定容，即得7000m mol/L肌酐标准液储备液，此液置4℃保存。
1.2.3 尿酸标准储备液 取30mg碳酸锂(AR)，溶解在40ml蒸溜水中，加热至60 ℃，使其完全溶解。精确称取尿酸50.45mg，溶解于热碳酸锂溶液中。冷却至室温，移入100ml容量瓶中，用去离子水稀释至刻度100ml，贮存在棕色瓶中。此液浓度为3000mmol/L。
1.2.4肌酐尿酸标准应用液 分别精确吸收肌酐和尿酸储备各5ml，混匀，然后用去离子水倍比稀释成如下浓度：7000、3500、1750、875、432.5、216.25、108.125、54.0625、27.031m mol/L ；3000、1500、750、375、162.5、81.25、40.625、20.312、10.156mmol/L 。其它试剂均为分析纯，广州化学试剂厂生产。
, 百拇医药
1.3 测定方法 取尿样本100ml左右放置于样品杯中(样品经3000r/min离心10min，取上清)。设置如下电泳条件：以pH7.2、120mmol/L SDS、30mmol/L磷酸盐缓冲液作电泳运行液，紫外检测波长235nm、电压10kV，尿样直接自动压力进样2s(2p.s.i.sec，1p.s.I = 6894.76Pa) ，毛细管温度20℃。为了获得较好的重复性，每次运行之间用去离子水冲洗1min，然后用1mol/L NaOH冲洗2min，再用缓冲液冲洗2min。制标准曲线，以峰面积为横坐标，以浓度为纵坐标，以外标法定量。
2 结果
2.1 测定波长选择 配制一定浓度的肌酐水溶液和尿酸溶液在岛津UV-3000分光光度计作光谱扫描，在近235nm处肌酐和尿酸都有吸收峰。
2.2 标准曲线制作 用标准曲线应用液进行电泳分析；以峰面积(
)对肌酐、尿酸浓度C(Y)作图。结果肌酐在7000～27.03mmol/L, 尿酸在3000～40.625mmol/L范围内呈线性。
, 百拇医药
2.3 重复性测定 重复性测定按参考文献[1]，毛细管电泳重复性测定可用样本的迁移时间表示。肌酐和尿酸在上述条件下其平均迁移时间分别为2.46 min和4.52 min (n=25，CV <3.0%)
2.4 精密度 表1为测定尿样品日内和日间的变异系数均小于4.5%。
表1 方法的精密度
Tab. 1 The precision of the method
Item
Within one day(n=10)
Between days (n=5)
Mean±SD
, 百拇医药
CV (%)
Mean±SD
CV (%)
Creatinine (m mol/L)
216.5±6.39
2.95
218.2±8.03
3.68
Uric acid (m mol/L)
325.0±11.90
3.72
330.4±14.80
, 百拇医药
4.48
2.5 回收试验 于混匀尿中加入高、中、低三个不同浓度的肌酐(885、220、55 m mol/L)和尿酸(750、325、81.25mmol/L)，按前述方法操作，分别测定3次，其肌酐回收率分别为99.3%、101.5%、104.6%，尿酸回收率100.8%、99.4%、98.7%。
2.6 对比实验 取30份含高、中、低水平的肌酐和尿酸尿，在Olympus UV-800全自动生化分析仪上用碱性苦味酸法(珠海亚利生物工程有限公司试剂)，尿酸酶偶联过氧化物酶(λ=520 nm)法(元生物科技股份有限公司)测定肌酐和尿酸含量(X)，结果与毛细管电泳法(Y)测定的结果对比，并进行线性回归分析，其方程分别为Y=1.00X+89.56(r=0.995)，Y=0.963X+25.46 (r=0.989).
2.7 最低检测限 以信噪比为5作为最低检测限，肌酐为9.19mmol/L，尿酸为20.31mmol/L。
, 百拇医药
2.8 干扰试验 上述条件下，尿中内源性物质和临床常用Vit C、VitB2等药物不干扰肌酐和尿酸的测定。
3 讨论
有关电压、温度、进样压力及进样量等因素对峰的影响和条件选择参见文献[2]。
我们用磷酸缓冲液，并加入表面活性剂SDS建立胶束动电毛细管电泳方法使得分离测定血清中尿酸和肌酐省去了去蛋白质步骤，操作更为方便，分离效果好。将此法应用于尿中肌酐、尿酸测定，效果满意，同时由于SDS作用，克服了少数样品中蛋白的干扰。另外，该方法其线性范围宽，所以无需作尿样品稀释，克服了化学方法的不足，其结果可靠、操作简单、快速，可应用于临床样品检测。
作者简介：周小棉，男，1964年出生；1992年毕业于重庆医科大学检验系；硕士；电话：85187124
参考文献
1 王 磊，陈农，张玉奎. 高效毛细管电泳迁移重复性的考察. 色谱，1993, 11(4)：207
2 周小棉，刘建成，张蒙恩等. 碘普罗胺非离子造影剂的胶束动电毛细管电泳分析. 药物分析杂志，1997, 17(2)：93
(收稿日期：1998-07-25), 百拇医药
单位：第一军医大学南方医院检验科，广州，501515
关键词：肌酐；尿酸；毛细管电泳
毛细管电泳同时测定尿中肌酐和尿酸 摘要：目的 建立高效毛细管电泳测定肌酐和尿酸的新方法。方法 选择pH 7.2、120mmol/L SDS、30mmol/L磷酸盐缓冲液作胶束电动毛细管电泳运行液，利用外标法定量，检测波光235 nm，同时测定尿肌酐和尿酸； 非涂渍毛细管21cm×50mm (1,d)；电压10kV，自动进样2s，电泳6min。结果 肌酐和尿酸的线性范围分别为7000～27.030m mol/L，3000～40.625m mol/L，最低检测限分别为9.190m mol/L和20.310m mol/L。建立了直接测定尿肌酐和尿酸两者浓度的毛细管电泳方法。本法的日内和日间变异系数都小于4.5%。肌酐和尿酸的平均回收率分别为102.7%和99.6%。内生化合物和常用药物对此方法无干扰。结论 该方法线性范围宽，无需作样品稀释，简单、快速、可应用于临床样品检测。
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中图分类号: R446.12
Simultaneous determination of creatinine and uric acid in human urine by high-performance capillary electrophoresis
Zhou Xiaomian, Zou Xiao, Wang Yichao
Department of Medical Laboratory, Nanfang Hospital, First Military Medical University, Guangzhou, 510515
Abstract: Objective To develop a new method for simultaneous determination of creatinine and uric acid in human urine using capillary electrophoresis (CE). Methods Using pH7.2, 120 mmol/L SDS, 30 mmol/L phosphate buffer as electrophoresis buffer, uncoated fused-silica capillary 21 cm×50 m m (i.d.) creatinine and uric acid were detected at the voltage of 10 kV at 235 nm, running time of 6 min, automatic injection by pressure. Results The linear concentration of creatinine and uric acid were 7000～27.030 m mol/L, 3 000～40.625 m mol/L, respectively. The average recoveries of creatinine and uric acid at different levels were found to be 102.27% (n = 9) and 101.45% (n = 9), respectively. The lowest detection limit was 9.19 m mol/L for creatinine and 20.7 m mol/L for uric acid. The precision studies of the assay both within one day and between days produced CV values less than 4.5%. Endogenous chemicals and commonly-used drugs showed no interference with this chromatographic procedure. Conclusion CE, which can simultaneously determine creatinine and uric acid in human urine, is simple and rapid to perform.
, 百拇医药
Key words: creatinine; uric acid; urine; capillary electrophoresis
我们用外标法建立了直接测定尿中肌酐和尿酸浓度的胶束动电毛细管电泳方法，方法稳定、简单、快速。方法如下:
1 材料与方法
1.1 仪器 BioFocus-3000自动毛细管电泳分析仪(美国Bio-RAD公司产品)，具有二极管阵列的可见紫外多波长扫描系统。自动与手动数据处理系统。最大电压30 kV 。非涂渍毛细管长度21cm，内径 50mm，河北永年光导纤维厂产品。
1.2 试剂
1.2.1 电泳缓冲液 pH7.2、120mmol/L SDS、30mmol/L磷酸盐缓冲液，配制：32.68g SDS、1.31g NaH2PO4.2H2O、7.73g Na2HPO4.12H2O加去离子水至1000ml。SDS (Bio-RAD公司产品) 电泳纯级，其它试剂均为分析纯。
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1.2.2 肌酐标准储备液 精确称取肌酐(Fluka公司产品)79.17mg，加适量去离子水溶解，然后再加水至100ml容量瓶中定容，即得7000m mol/L肌酐标准液储备液，此液置4℃保存。
1.2.3 尿酸标准储备液 取30mg碳酸锂(AR)，溶解在40ml蒸溜水中，加热至60 ℃，使其完全溶解。精确称取尿酸50.45mg，溶解于热碳酸锂溶液中。冷却至室温，移入100ml容量瓶中，用去离子水稀释至刻度100ml，贮存在棕色瓶中。此液浓度为3000mmol/L。
1.2.4肌酐尿酸标准应用液 分别精确吸收肌酐和尿酸储备各5ml，混匀，然后用去离子水倍比稀释成如下浓度：7000、3500、1750、875、432.5、216.25、108.125、54.0625、27.031m mol/L ；3000、1500、750、375、162.5、81.25、40.625、20.312、10.156mmol/L 。其它试剂均为分析纯，广州化学试剂厂生产。
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1.3 测定方法 取尿样本100ml左右放置于样品杯中(样品经3000r/min离心10min，取上清)。设置如下电泳条件：以pH7.2、120mmol/L SDS、30mmol/L磷酸盐缓冲液作电泳运行液，紫外检测波长235nm、电压10kV，尿样直接自动压力进样2s(2p.s.i.sec，1p.s.I = 6894.76Pa) ，毛细管温度20℃。为了获得较好的重复性，每次运行之间用去离子水冲洗1min，然后用1mol/L NaOH冲洗2min，再用缓冲液冲洗2min。制标准曲线，以峰面积为横坐标，以浓度为纵坐标，以外标法定量。
2 结果
2.1 测定波长选择 配制一定浓度的肌酐水溶液和尿酸溶液在岛津UV-3000分光光度计作光谱扫描，在近235nm处肌酐和尿酸都有吸收峰。
2.2 标准曲线制作 用标准曲线应用液进行电泳分析；以峰面积(
)对肌酐、尿酸浓度C(Y)作图。结果肌酐在7000～27.03mmol/L, 尿酸在3000～40.625mmol/L范围内呈线性。, 百拇医药
2.3 重复性测定 重复性测定按参考文献[1]，毛细管电泳重复性测定可用样本的迁移时间表示。肌酐和尿酸在上述条件下其平均迁移时间分别为2.46 min和4.52 min (n=25，CV <3.0%)
2.4 精密度 表1为测定尿样品日内和日间的变异系数均小于4.5%。
表1 方法的精密度
Tab. 1 The precision of the method
Item
Within one day(n=10)
Between days (n=5)
Mean±SD
, 百拇医药
CV (%)
Mean±SD
CV (%)
Creatinine (m mol/L)
216.5±6.39
2.95
218.2±8.03
3.68
Uric acid (m mol/L)
325.0±11.90
3.72
330.4±14.80
, 百拇医药
4.48
2.5 回收试验 于混匀尿中加入高、中、低三个不同浓度的肌酐(885、220、55 m mol/L)和尿酸(750、325、81.25mmol/L)，按前述方法操作，分别测定3次，其肌酐回收率分别为99.3%、101.5%、104.6%，尿酸回收率100.8%、99.4%、98.7%。
2.6 对比实验 取30份含高、中、低水平的肌酐和尿酸尿，在Olympus UV-800全自动生化分析仪上用碱性苦味酸法(珠海亚利生物工程有限公司试剂)，尿酸酶偶联过氧化物酶(λ=520 nm)法(元生物科技股份有限公司)测定肌酐和尿酸含量(X)，结果与毛细管电泳法(Y)测定的结果对比，并进行线性回归分析，其方程分别为Y=1.00X+89.56(r=0.995)，Y=0.963X+25.46 (r=0.989).
2.7 最低检测限 以信噪比为5作为最低检测限，肌酐为9.19mmol/L，尿酸为20.31mmol/L。
, 百拇医药
2.8 干扰试验 上述条件下，尿中内源性物质和临床常用Vit C、VitB2等药物不干扰肌酐和尿酸的测定。
3 讨论
有关电压、温度、进样压力及进样量等因素对峰的影响和条件选择参见文献[2]。
我们用磷酸缓冲液，并加入表面活性剂SDS建立胶束动电毛细管电泳方法使得分离测定血清中尿酸和肌酐省去了去蛋白质步骤，操作更为方便，分离效果好。将此法应用于尿中肌酐、尿酸测定，效果满意，同时由于SDS作用，克服了少数样品中蛋白的干扰。另外，该方法其线性范围宽，所以无需作尿样品稀释，克服了化学方法的不足，其结果可靠、操作简单、快速，可应用于临床样品检测。
作者简介：周小棉，男，1964年出生；1992年毕业于重庆医科大学检验系；硕士；电话：85187124
参考文献
1 王 磊，陈农，张玉奎. 高效毛细管电泳迁移重复性的考察. 色谱，1993, 11(4)：207
2 周小棉，刘建成，张蒙恩等. 碘普罗胺非离子造影剂的胶束动电毛细管电泳分析. 药物分析杂志，1997, 17(2)：93
(收稿日期：1998-07-25), 百拇医药