恶性黑色素瘤TIL细胞免疫过继疗法途径的探讨
作者：唐佩福 曲国番 王玉学 李平波 周国辉 刘辉
单位：唐佩福 曲国番 王玉学(哈尔滨医科大学第三临床医学院)；李平波(黑龙江省医院)；周国辉(刘辉北安市人民医院)
关键词：
黑龙江医学990303 Adoptive Immunotherapy Pathway of the Malignent
Melanoma with TIL Cell
Tang Peifu et al
The Third Affiliated Hospital of Harbin Medical University
Abstract This paper had reported that 8 patients who suffere d from malignent melanoma had received TIL cell injection at primary and matasta sis focuses,and the satisfied result was obtained due to TIL cell had higher ant i-tumor specificity than LAK cell whether under microscope or in clinical aspect s.
, 百拇医药
Key words malignent melanoma,TIL cell,adoptive immunotherapy.
八十年代后期以癌免疫过继疗法为主的肿瘤生物治疗取得了突破性的进展。LAK细胞在实验 室及临床应用中均取得了满意和肯定的疗效。但是LAK细胞本身并没有特异性，它对自体、同种异体都有杀伤作用。为了解决这一问题，我们在LAK细胞研究的基础上，成功的从肿瘤组织中获得了TIL细胞(肿瘤侵润淋巴细胞)，并将其应用于恶性黑色素瘤的治疗，取得了满意的疗效。
1 材料和方法
1.1 选择我院1997年入院治疗的晚期恶性黑色素瘤病人8例，8例病人均伴随着皮下及区域淋巴结转移。
1.2 TIL细胞的提取和培养，采用手术切除的恶性黑色素瘤新鲜标本(转移的淋巴节)，去掉正常和坏死的组织，用HANK氏液洗涤二次，剪成碎块，在含0.01%透明质酸酶、0.1%胶原酶(TV型)和0.002%DNA酶(SIGMA公司)的RPMI1640的培养液中连续磁力搅拌3～4h。稀释后纱网过滤。细胞经离心后在HANKS液中洗涤，稀释成一定浓度，经密度梯度离心后，将TIL细胞置于RPMI1640完全培养液中配成一定浓度，37度温箱中传代培养。
, 百拇医药
1.3 细胞的毒性实验采用4hCR释放实验。
1.4 免疫过继治疗TIL细胞传代培养三周后，细胞计数可达到3×109左右。离心、洗涤、收集细胞，用生理盐水20ml，白细胞介素2(20万u)，制备成细胞悬液，并分期注射于肿瘤原发病灶及皮下转移病灶周围。
2 结果
TIL细胞均来源于转移的淋巴结，每次培养的细胸计数平均在3×109左右。TIL细胞的局部注射次数，最高6次，最低2次。临床观察发现，8例病人中，其原发病灶和转移病灶均有不同程度的缩小，有2例病人皮下的转移病灶完全消退。电镜及光镜下对照观察未经TIL细胞注射的肿瘤标本发现，经注射TIL细胞的肿瘤标本中，可见到大量的坏死组织，周围组织中有丰富的淋巴细胞浸润，淋巴细胞伸出尾足与肿瘤细胞密切接触，部分淋巴细胞甚至侵入肿瘤细胞内，肿瘤细胞表现出不同程度的溶解性坏死和凋零坏死。
, http://www.100md.com
3 讨论
恶性黑色素瘤是一种恶性度极高的肿瘤。发病早期便可以侵犯血管和淋巴管双重途径转移。由于缺乏有效的治疗措施，恶性黑色素瘤的预后差、死亡率较高。近几年来，肿瘤的生物治疗，尤其是LAK细胞的出现，给一些临床较难治疗的肿瘤病人带来了希望。LAK细胞无论在实验室，还是在临床应用中，均取得了满意和肯定的疗效。然而，LAK细胞的无特异性和较低的细胞毒力，为其广泛的临床应用带来了严重的障碍。TIL细胞来源于肿瘤组织，实验已经证明其抗肿瘤活性是LAK细胞的50～100倍，而且具有抗肿瘤的特异性和前体细胞来源丰富等特征，是目前公认最为有效的免疫过继细胞。本实验应用8例晚期恶性黑色素瘤病人的淋巴结，提取、培养、制备成TIL细胞悬液，并将其注射于肿瘤原发病灶和转移病灶周围，临床观察发现，肿瘤明显缩小，甚至完全消退。实践证明，TIL细胞的临床应用不仅有效，而且安全、可靠。如果能制备出大量的TIL细胞悬液，通过静脉回输来治疗转移的尤其是肝、肺等脏器转移的病人，必定会为尚无根本治疗方法的晚期恶生黑色素瘤病人开辟新的治疗作径。
参考文献
〔1〕Rosenberg.S.A.New Engl.J.Med 1987;316.889-897
〔2〕Chouaibs.Proc.Natl.Acad.Sci.U.S.A 1988;85∶6875-6879
〔3〕Rosenberg.SA.etal.Sci.U.S.A 1989;19∶1318-1321
(收稿日期：1998-12-10), 百拇医药
单位：唐佩福 曲国番 王玉学(哈尔滨医科大学第三临床医学院)；李平波(黑龙江省医院)；周国辉(刘辉北安市人民医院)
关键词：
黑龙江医学990303 Adoptive Immunotherapy Pathway of the Malignent
Melanoma with TIL Cell
Tang Peifu et al
The Third Affiliated Hospital of Harbin Medical University
Abstract This paper had reported that 8 patients who suffere d from malignent melanoma had received TIL cell injection at primary and matasta sis focuses,and the satisfied result was obtained due to TIL cell had higher ant i-tumor specificity than LAK cell whether under microscope or in clinical aspect s.
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Key words malignent melanoma,TIL cell,adoptive immunotherapy.
八十年代后期以癌免疫过继疗法为主的肿瘤生物治疗取得了突破性的进展。LAK细胞在实验 室及临床应用中均取得了满意和肯定的疗效。但是LAK细胞本身并没有特异性，它对自体、同种异体都有杀伤作用。为了解决这一问题，我们在LAK细胞研究的基础上，成功的从肿瘤组织中获得了TIL细胞(肿瘤侵润淋巴细胞)，并将其应用于恶性黑色素瘤的治疗，取得了满意的疗效。
1 材料和方法
1.1 选择我院1997年入院治疗的晚期恶性黑色素瘤病人8例，8例病人均伴随着皮下及区域淋巴结转移。
1.2 TIL细胞的提取和培养，采用手术切除的恶性黑色素瘤新鲜标本(转移的淋巴节)，去掉正常和坏死的组织，用HANK氏液洗涤二次，剪成碎块，在含0.01%透明质酸酶、0.1%胶原酶(TV型)和0.002%DNA酶(SIGMA公司)的RPMI1640的培养液中连续磁力搅拌3～4h。稀释后纱网过滤。细胞经离心后在HANKS液中洗涤，稀释成一定浓度，经密度梯度离心后，将TIL细胞置于RPMI1640完全培养液中配成一定浓度，37度温箱中传代培养。
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1.3 细胞的毒性实验采用4hCR释放实验。
1.4 免疫过继治疗TIL细胞传代培养三周后，细胞计数可达到3×109左右。离心、洗涤、收集细胞，用生理盐水20ml，白细胞介素2(20万u)，制备成细胞悬液，并分期注射于肿瘤原发病灶及皮下转移病灶周围。
2 结果
TIL细胞均来源于转移的淋巴结，每次培养的细胸计数平均在3×109左右。TIL细胞的局部注射次数，最高6次，最低2次。临床观察发现，8例病人中，其原发病灶和转移病灶均有不同程度的缩小，有2例病人皮下的转移病灶完全消退。电镜及光镜下对照观察未经TIL细胞注射的肿瘤标本发现，经注射TIL细胞的肿瘤标本中，可见到大量的坏死组织，周围组织中有丰富的淋巴细胞浸润，淋巴细胞伸出尾足与肿瘤细胞密切接触，部分淋巴细胞甚至侵入肿瘤细胞内，肿瘤细胞表现出不同程度的溶解性坏死和凋零坏死。
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3 讨论
恶性黑色素瘤是一种恶性度极高的肿瘤。发病早期便可以侵犯血管和淋巴管双重途径转移。由于缺乏有效的治疗措施，恶性黑色素瘤的预后差、死亡率较高。近几年来，肿瘤的生物治疗，尤其是LAK细胞的出现，给一些临床较难治疗的肿瘤病人带来了希望。LAK细胞无论在实验室，还是在临床应用中，均取得了满意和肯定的疗效。然而，LAK细胞的无特异性和较低的细胞毒力，为其广泛的临床应用带来了严重的障碍。TIL细胞来源于肿瘤组织，实验已经证明其抗肿瘤活性是LAK细胞的50～100倍，而且具有抗肿瘤的特异性和前体细胞来源丰富等特征，是目前公认最为有效的免疫过继细胞。本实验应用8例晚期恶性黑色素瘤病人的淋巴结，提取、培养、制备成TIL细胞悬液，并将其注射于肿瘤原发病灶和转移病灶周围，临床观察发现，肿瘤明显缩小，甚至完全消退。实践证明，TIL细胞的临床应用不仅有效，而且安全、可靠。如果能制备出大量的TIL细胞悬液，通过静脉回输来治疗转移的尤其是肝、肺等脏器转移的病人，必定会为尚无根本治疗方法的晚期恶生黑色素瘤病人开辟新的治疗作径。
参考文献
〔1〕Rosenberg.S.A.New Engl.J.Med 1987;316.889-897
〔2〕Chouaibs.Proc.Natl.Acad.Sci.U.S.A 1988;85∶6875-6879
〔3〕Rosenberg.SA.etal.Sci.U.S.A 1989;19∶1318-1321
(收稿日期：1998-12-10), 百拇医药