PCR技术检测支原体感染412例分析
作者：潘玉武 孟晓燕 王延平 指导 王殿卿
单位：黑龙江省电力医院
关键词：
黑龙江医学990358 肺炎支原体(MyeoPlasmaPnevmomia,MP)感染是儿科较常见的一种感染性疾病，近年来其发病率有增高趋势。目前虽然有各种DNA探针和检测抗原的ELISA方法，但由于条件的限制，MP感染的诊断仍主要依靠人工培养方法和血清学方法，但它们都缺乏早期、快速、特异性强、灵敏度高等特点。因此，CecileBernet等人建立了PCR方法来检测MPDNA，该方法具有灵敏度高、特异性强和反应迅速等特点，优于其它各种方法。本文也采用了PCR方法来检测MPDNA。现报道如下。
1 材料和方法
1.1 标本来源。
我院儿科门诊1997-04～1998-02就医患儿，男338例，女332例。年龄3～14岁。用咽试子取患儿咽后壁分泌物作为标本。
1.2 仪器和试剂。
美国PE公司DNAThermaCy-cler480型扩增仪；试剂为北京医科大学人民医学院引航医学生物技术研究所提供试剂盒。
1.3 方法。
(1)模板DNA制备：取患儿咽试子置于内盛生理盐水的Eppendoff管中，洗涤收集沉淀，加入DNA裂解液，以加热煮沸法制备DNA模板。(2)PCR反应：它包括模板DNA、Tag聚合酶、DNTPS、引物及PCR缓冲液和适量灭菌的双蒸馏水，反应前加石蜡油覆盖，防止蒸发。PCR反应程序，置反应管于93℃预变性2min，以94℃30S、55℃30S、72℃60S，扩增35个循环。
2 结果
检测患儿670例中，确诊Mp412例(占61.49%)，其中3～4岁235例(占58.5%)，5～7岁144例(35.5%)，8～14岁33例(占8.01%)。确诊MP的这些患儿临床表现均为：(1)发烧、持续性咳嗽。(2)白细胞数大多正常或稍减低。(3)应用青霉素和先锋霉素无效。
3 讨论
本文用PCR技术对670例患儿咽试子标本进行了分析，检出肺炎支原体感染者412例，证实了该方法在临床应用的可行性。结果表明：本方法具有极高的特异性和灵敏度，可以在感染早期检测肺炎支原体，具有早期诊断特点。PCR技术试验整个操作过程在8～10h内完成，而人工培养技术需1～2周，并且人工培养常存在污染问题，影响结果判定。PCR技术由于其引物具有极高的特异性，不存在交叉反应现象，克服了人工培养的不足，因此PCR技术是检测肺炎支原体感染的有效方法。
(收稿日期：1998-07-23), 百拇医药
单位：黑龙江省电力医院
关键词：
黑龙江医学990358 肺炎支原体(MyeoPlasmaPnevmomia,MP)感染是儿科较常见的一种感染性疾病，近年来其发病率有增高趋势。目前虽然有各种DNA探针和检测抗原的ELISA方法，但由于条件的限制，MP感染的诊断仍主要依靠人工培养方法和血清学方法，但它们都缺乏早期、快速、特异性强、灵敏度高等特点。因此，CecileBernet等人建立了PCR方法来检测MPDNA，该方法具有灵敏度高、特异性强和反应迅速等特点，优于其它各种方法。本文也采用了PCR方法来检测MPDNA。现报道如下。
1 材料和方法
1.1 标本来源。
我院儿科门诊1997-04～1998-02就医患儿，男338例，女332例。年龄3～14岁。用咽试子取患儿咽后壁分泌物作为标本。
1.2 仪器和试剂。
美国PE公司DNAThermaCy-cler480型扩增仪；试剂为北京医科大学人民医学院引航医学生物技术研究所提供试剂盒。
1.3 方法。
(1)模板DNA制备：取患儿咽试子置于内盛生理盐水的Eppendoff管中，洗涤收集沉淀，加入DNA裂解液，以加热煮沸法制备DNA模板。(2)PCR反应：它包括模板DNA、Tag聚合酶、DNTPS、引物及PCR缓冲液和适量灭菌的双蒸馏水，反应前加石蜡油覆盖，防止蒸发。PCR反应程序，置反应管于93℃预变性2min，以94℃30S、55℃30S、72℃60S，扩增35个循环。
2 结果
检测患儿670例中，确诊Mp412例(占61.49%)，其中3～4岁235例(占58.5%)，5～7岁144例(35.5%)，8～14岁33例(占8.01%)。确诊MP的这些患儿临床表现均为：(1)发烧、持续性咳嗽。(2)白细胞数大多正常或稍减低。(3)应用青霉素和先锋霉素无效。
3 讨论
本文用PCR技术对670例患儿咽试子标本进行了分析，检出肺炎支原体感染者412例，证实了该方法在临床应用的可行性。结果表明：本方法具有极高的特异性和灵敏度，可以在感染早期检测肺炎支原体，具有早期诊断特点。PCR技术试验整个操作过程在8～10h内完成，而人工培养技术需1～2周，并且人工培养常存在污染问题，影响结果判定。PCR技术由于其引物具有极高的特异性，不存在交叉反应现象，克服了人工培养的不足，因此PCR技术是检测肺炎支原体感染的有效方法。
(收稿日期：1998-07-23), 百拇医药