抗凋亡基因bcl-2在早期胃癌和癌前病变中的表达
作者：王康敏 李秀林 黄莺 苏宝山 陈晓黎
单位：王康敏 李秀林 黄 莺 苏宝山 陈晓黎(第二临床医学院病理科 西安 710004)
关键词：bcl-2；癌前病变；早期胃癌；凋亡；免疫组化
西安医科大学学报/990328 摘要 应用免疫组化SP法对32例早期胃癌及癌旁粘膜和24例慢性萎缩性胃炎中bcl-2的表达同时进行检测，结果癌旁和慢性萎缩性胃炎中不典型增生、单纯增生、腺体扩张和癌旁肠化均显示bcl-2高表达，与癌无显著差异(P>0.05)，应视作癌前病变。bcl-2在癌前病变和早期胃癌中的表达显著高于周围正常粘膜(P<0.01)，提示bcl-2高表达是胃癌发生的早期事件，在胃癌发生上起着重要作用，可作为胃癌早期诊断的可靠指标。
EXPRESSION OF ANTI-APOPTOSIS GENE bcl-2 IN
, http://www.100md.com
EARLY STAGE GASTRIC CARCINOMA AND
PRECANCEROUS LESIONS
Wang Kangmin, Li Xiulin, Huang Ying et al
(Department of Pathology, Second Affiliated Hospital)
Abstract To evaluate the relationship of anti-apoptosis gene bcl-2 with the occurence and development of gastric carcinoma, specimens of 32 cases of early stage gastric carcionoma and their paracancerous mucosa as well as 24 cases of chronic atrophical gastritis were detected with immunohistochemical SP techhique.The results showed that dysplasia ,simple hyperplasia, glandular distention and paracancerous metaplasia from mucosa of paracancerous tissues and chronic atrophical gastritis all had high bcl-2 expression rate and had no difference contrast with that of gastric carcinoma (P>0.05), which indicated that they should be regarded as precancerous lesions.Compared with normal mucosa surrouding ,the expression rates of early stage carcinoma and precancerous lesions were significantly higher (P<0.01).These implies the anti-apoptosis gene bcl-2 enhancing expression may be the early event of carcinogenesis; may play an important role in the occcurence and progress of gastric carcinoma and may be a reliable marker to predicting the early stage gastric carcinoma.
, 百拇医药
Key words bcl-2;precancerous lesion;early stage gastric carcinoma;apoptosis;immunohistochemistry
bcl-2是细胞凋亡的抑制基因，已知其表达异常与某些肿瘤的发生、转移、预后及耐药性的产生有关[1]。但对有关癌前病变的研究报导很少。我们采用免疫组化SP法研究了bcl-2在早期胃癌和癌前病变中的表达，以探讨其在胃癌发生中的作用，加深对胃癌前病变的认识。
材料和方法
材料 选择我院病理科收集的早期胃癌标本32例。标本均按全国胃癌协作组规范取材诊断。每例选取癌及癌旁2 cm以内之切片1～2块，另取慢性萎缩性胃炎(Chronic atrophic gastritis, CAG)粘膜24例。标本均经10%福尔马林固定，石蜡包埋切片，片厚4～5 μm。
, http://www.100md.com
方法 采用免疫组化SP法。bcl-2鼠抗人单克隆抗体为丹麦公司产品，SP试剂盒为Zymed公司产品。设阳、阴性对照，结果判定标准：所有细胞无着色或少数细胞浅黄色为阴性(-)，以细胞局灶性或弥漫性着色为阳性，浅黄色(+)，棕黄色(++)，棕褐色(
)。统计学处理采用秩和检验。
结果
1 组织病理学观察 胃癌32例，均为早期胃癌，其中粘膜内癌25例，侵及粘膜下7例；分化型癌(分化Ⅰ、Ⅱ级)20例，低分化型和粘液细胞癌12例。癌旁胃粘膜中伴有不典型增生9例，腺体增生而无明显异型即单纯增生14例，腺体扩张7例，程度不同肠上皮化生(简称肠化)18例。CAG24例，粘膜内见不典型增生7例，单纯增生8例，腺体扩张6例，肠上皮化生16例。
2 免疫组化检测 在癌旁和CAG正常上皮中除个别病例少数细胞着淡黄色外，其他细胞均无着色，因此视为阴性。
, 百拇医药
bcl-2在早期胃癌和癌前病变中的表达见附表。在早期胃癌中的阳性表达率78.1%，在癌旁不典型增生、单纯增生、腺体扩张和肠上皮化生中的表达率为88.9%、85.7%、100%、83.3%(见图1、2)。癌和癌前病变阳性表达率与正常上皮比较均有显著性差异(P<0.01)。癌前病变与癌比较，其阳性表达率虽高，但无明显差异(P>0.05)。附表 胃癌癌旁组织和慢性萎缩性胃炎不同病变中bcl-2的表达 分组
胃癌及癌旁组织
慢性萎缩性胃炎
n
-
+
++
, 百拇医药
阳性数
%
n
-
+
++
阳性数
%
胃癌
32
7
14
, 百拇医药 10
1
25
78.1
不典型增生
9
1
2
4
2
8
88.9
7
1
, http://www.100md.com
2
3
1
6
85.7
单纯增生
14
2
6
5
1
12
85.7
8
, 百拇医药
1
4
3
0
7
87.5
腺体扩张
7
0
3
2
2
7
100.0
, 百拇医药
6
1
2
2
1
5
83.3
肠化
18
3
6
4
5
15
, http://www.100md.com
83.3
16
13
3
0
0
3
18.7
正常上皮
26
26
0
0
24
, 百拇医药
24
0
0
图1 扩张腺体中显示bcl-2阳性表达 SP法×100
图2 癌旁肠化中显示bcl-2阳性表达SP法×200
bcl-2在CAG粘膜内不典型增生、单纯增生、腺体扩张的阳性表达率分别为85.7%、87.5%、83.3%，与癌旁同类病变比较无显著差异(P>0.05)，但CAG肠化组bcl-2阳性表达率18.7%，显著低于癌旁肠化组(P<0.01)。
讨论
, 百拇医药
bcl-2基因被认为是唯一通过阻止细胞凋亡而在肿瘤发生上起着重要作用的肿瘤基因。bcl-2蛋白定位于线粒体、内质网和核膜上。其过度表达是通过t(14∶18)染色体易位首先发现在滤泡性淋巴瘤中[2，3]。近年来发现bcl-2在一些上皮性肿瘤中也有表达，如鼻咽癌、胃肠癌、子宫内膜癌等[3～5]。而在癌前病变与癌关系的研究报导甚少。本研究中bcl-2在癌旁和CAG不典型增生、单纯增生、腺体扩张中均为高表达，而在癌组织中有所降低，与生秀杰等报导的结果一致[5]。提示bcl-2抑制凋亡是胃癌发生的早期事件，其阳性表达可在细胞形态学改变之前出现。
李秀林等用MGd-1及MG7两株抗原标记了癌旁肠化和非癌胃粘膜肠化，结果在约半数癌旁肠化病理中呈阳性反应，而在非癌胃粘膜肠化病例中均呈阴性反应。Skinner等用8种肿瘤标记物观察了胃癌癌周肠化及非癌肠化病变。结果认为肠化有两型，一型与胃癌关系密切，另一型与胃癌无明显关系[6]。本研究中癌旁肠化bcl-2阳性表达率(83.3%)显著高于CAG肠化(18.7%)，与以上结果相同，进一步说明这两种肠化是性质不同的两种病变。
, 百拇医药
传统观念将肠化、CAG作为癌前病变。本文中腺体不典型增生、单纯增生、腺体扩张和癌旁肠化均显示bcl-2高表达，表明这些病变与bcl-2抗凋亡有关，且与癌无显著差异，可能为癌发生的早期改变。同时，我们在HE切片中也观察到癌旁肠化、腺体扩张、单纯增生、不典型增生与早期胃癌之间的过渡性改变，提示这些病变是胃癌发生的组织形态学基础，应视作癌前病变，早期治疗。这一结果加深了对胃癌前病变和癌形成的分子生物学基础的认识，提示bcl-2可作为早期胃癌和癌前病变诊断的可靠指标。
本研究中bcl-2在胃粘膜正常上皮、各型癌前病变和早期胃癌中的不同表达，表明bcl-2基因在胃粘膜上皮癌变中起着重要作用。其机理可能不是加速细胞有丝分裂，而是通过抑制细胞死亡、延长细胞寿命而使细胞数量增多导致肿瘤发生的[7]，这些有待于我们做更进一步的研究。
参考文献
1 何凤田，朱锡华.bcl-2与疾病.国外医学生理.病理科学与临床分册，1998；18(3)∶230
, http://www.100md.com
2 Hockenbery D,Nuniez G,Milliman C et al.Bcl-2 is an inner mitochendral membrane protein that blocks programmed cell death. Nature, 1990;348(22)∶334
3 Lai fa sheu, Ann chen, Ching-liang meng et al.Analysis of bcl-2 expression in normal ,inflammed dysplastic nasopharyngeal epithelia ,and nasopharyngeal carcinoma.Human Pathology, 1997;28(5)∶556
4 MP Bronner, C Culin ,J C Reed et al.The bcl-2 protoonogene ant the gastrointestinal epithelial tumor progression model.Am J Pathol,1995;146(1)∶20
, http://www.100md.com
5 生秀杰，宋和存，何秀琴.抗凋亡基因bcl-2在子宫内膜癌的表达及意义.中华肿瘤杂志，1998；20(5)∶365
6 李秀林，苏宝山.39例早期胃癌的免疫组化及粘液组化观察.西安医科大学学报，1993；14(4)∶327
7 Mcdonell TJ,Deanc N,Platt F et al.bcl-2 immunoglobulin transgenic mice demonstrate extended B cell survival and follicular lymphoproliferation.Cell ,1989;57(1)∶78
(1998-12-30收稿 1999-03-04修回), http://www.100md.com
单位：王康敏 李秀林 黄 莺 苏宝山 陈晓黎(第二临床医学院病理科 西安 710004)
关键词：bcl-2；癌前病变；早期胃癌；凋亡；免疫组化
西安医科大学学报/990328 摘要 应用免疫组化SP法对32例早期胃癌及癌旁粘膜和24例慢性萎缩性胃炎中bcl-2的表达同时进行检测，结果癌旁和慢性萎缩性胃炎中不典型增生、单纯增生、腺体扩张和癌旁肠化均显示bcl-2高表达，与癌无显著差异(P>0.05)，应视作癌前病变。bcl-2在癌前病变和早期胃癌中的表达显著高于周围正常粘膜(P<0.01)，提示bcl-2高表达是胃癌发生的早期事件，在胃癌发生上起着重要作用，可作为胃癌早期诊断的可靠指标。
EXPRESSION OF ANTI-APOPTOSIS GENE bcl-2 IN
, http://www.100md.com
EARLY STAGE GASTRIC CARCINOMA AND
PRECANCEROUS LESIONS
Wang Kangmin, Li Xiulin, Huang Ying et al
(Department of Pathology, Second Affiliated Hospital)
Abstract To evaluate the relationship of anti-apoptosis gene bcl-2 with the occurence and development of gastric carcinoma, specimens of 32 cases of early stage gastric carcionoma and their paracancerous mucosa as well as 24 cases of chronic atrophical gastritis were detected with immunohistochemical SP techhique.The results showed that dysplasia ,simple hyperplasia, glandular distention and paracancerous metaplasia from mucosa of paracancerous tissues and chronic atrophical gastritis all had high bcl-2 expression rate and had no difference contrast with that of gastric carcinoma (P>0.05), which indicated that they should be regarded as precancerous lesions.Compared with normal mucosa surrouding ,the expression rates of early stage carcinoma and precancerous lesions were significantly higher (P<0.01).These implies the anti-apoptosis gene bcl-2 enhancing expression may be the early event of carcinogenesis; may play an important role in the occcurence and progress of gastric carcinoma and may be a reliable marker to predicting the early stage gastric carcinoma.
, 百拇医药
Key words bcl-2;precancerous lesion;early stage gastric carcinoma;apoptosis;immunohistochemistry
bcl-2是细胞凋亡的抑制基因，已知其表达异常与某些肿瘤的发生、转移、预后及耐药性的产生有关[1]。但对有关癌前病变的研究报导很少。我们采用免疫组化SP法研究了bcl-2在早期胃癌和癌前病变中的表达，以探讨其在胃癌发生中的作用，加深对胃癌前病变的认识。
材料和方法
材料 选择我院病理科收集的早期胃癌标本32例。标本均按全国胃癌协作组规范取材诊断。每例选取癌及癌旁2 cm以内之切片1～2块，另取慢性萎缩性胃炎(Chronic atrophic gastritis, CAG)粘膜24例。标本均经10%福尔马林固定，石蜡包埋切片，片厚4～5 μm。
, http://www.100md.com
方法 采用免疫组化SP法。bcl-2鼠抗人单克隆抗体为丹麦公司产品，SP试剂盒为Zymed公司产品。设阳、阴性对照，结果判定标准：所有细胞无着色或少数细胞浅黄色为阴性(-)，以细胞局灶性或弥漫性着色为阳性，浅黄色(+)，棕黄色(++)，棕褐色(
)。统计学处理采用秩和检验。结果
1 组织病理学观察 胃癌32例，均为早期胃癌，其中粘膜内癌25例，侵及粘膜下7例；分化型癌(分化Ⅰ、Ⅱ级)20例，低分化型和粘液细胞癌12例。癌旁胃粘膜中伴有不典型增生9例，腺体增生而无明显异型即单纯增生14例，腺体扩张7例，程度不同肠上皮化生(简称肠化)18例。CAG24例，粘膜内见不典型增生7例，单纯增生8例，腺体扩张6例，肠上皮化生16例。
2 免疫组化检测 在癌旁和CAG正常上皮中除个别病例少数细胞着淡黄色外，其他细胞均无着色，因此视为阴性。
, 百拇医药
bcl-2在早期胃癌和癌前病变中的表达见附表。在早期胃癌中的阳性表达率78.1%，在癌旁不典型增生、单纯增生、腺体扩张和肠上皮化生中的表达率为88.9%、85.7%、100%、83.3%(见图1、2)。癌和癌前病变阳性表达率与正常上皮比较均有显著性差异(P<0.01)。癌前病变与癌比较，其阳性表达率虽高，但无明显差异(P>0.05)。附表 胃癌癌旁组织和慢性萎缩性胃炎不同病变中bcl-2的表达 分组
胃癌及癌旁组织
慢性萎缩性胃炎
n
-
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, 百拇医药
阳性数
%
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阳性数
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胃癌
32
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, 百拇医药 10
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78.1
不典型增生
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, http://www.100md.com
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单纯增生
14
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腺体扩张
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, 百拇医药
6
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2
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肠化
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, http://www.100md.com
83.3
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18.7
正常上皮
26
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24
, 百拇医药
24
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图1 扩张腺体中显示bcl-2阳性表达 SP法×100
图2 癌旁肠化中显示bcl-2阳性表达SP法×200
bcl-2在CAG粘膜内不典型增生、单纯增生、腺体扩张的阳性表达率分别为85.7%、87.5%、83.3%，与癌旁同类病变比较无显著差异(P>0.05)，但CAG肠化组bcl-2阳性表达率18.7%，显著低于癌旁肠化组(P<0.01)。
讨论
, 百拇医药
bcl-2基因被认为是唯一通过阻止细胞凋亡而在肿瘤发生上起着重要作用的肿瘤基因。bcl-2蛋白定位于线粒体、内质网和核膜上。其过度表达是通过t(14∶18)染色体易位首先发现在滤泡性淋巴瘤中[2，3]。近年来发现bcl-2在一些上皮性肿瘤中也有表达，如鼻咽癌、胃肠癌、子宫内膜癌等[3～5]。而在癌前病变与癌关系的研究报导甚少。本研究中bcl-2在癌旁和CAG不典型增生、单纯增生、腺体扩张中均为高表达，而在癌组织中有所降低，与生秀杰等报导的结果一致[5]。提示bcl-2抑制凋亡是胃癌发生的早期事件，其阳性表达可在细胞形态学改变之前出现。
李秀林等用MGd-1及MG7两株抗原标记了癌旁肠化和非癌胃粘膜肠化，结果在约半数癌旁肠化病理中呈阳性反应，而在非癌胃粘膜肠化病例中均呈阴性反应。Skinner等用8种肿瘤标记物观察了胃癌癌周肠化及非癌肠化病变。结果认为肠化有两型，一型与胃癌关系密切，另一型与胃癌无明显关系[6]。本研究中癌旁肠化bcl-2阳性表达率(83.3%)显著高于CAG肠化(18.7%)，与以上结果相同，进一步说明这两种肠化是性质不同的两种病变。
, 百拇医药
传统观念将肠化、CAG作为癌前病变。本文中腺体不典型增生、单纯增生、腺体扩张和癌旁肠化均显示bcl-2高表达，表明这些病变与bcl-2抗凋亡有关，且与癌无显著差异，可能为癌发生的早期改变。同时，我们在HE切片中也观察到癌旁肠化、腺体扩张、单纯增生、不典型增生与早期胃癌之间的过渡性改变，提示这些病变是胃癌发生的组织形态学基础，应视作癌前病变，早期治疗。这一结果加深了对胃癌前病变和癌形成的分子生物学基础的认识，提示bcl-2可作为早期胃癌和癌前病变诊断的可靠指标。
本研究中bcl-2在胃粘膜正常上皮、各型癌前病变和早期胃癌中的不同表达，表明bcl-2基因在胃粘膜上皮癌变中起着重要作用。其机理可能不是加速细胞有丝分裂，而是通过抑制细胞死亡、延长细胞寿命而使细胞数量增多导致肿瘤发生的[7]，这些有待于我们做更进一步的研究。
参考文献
1 何凤田，朱锡华.bcl-2与疾病.国外医学生理.病理科学与临床分册，1998；18(3)∶230
, http://www.100md.com
2 Hockenbery D,Nuniez G,Milliman C et al.Bcl-2 is an inner mitochendral membrane protein that blocks programmed cell death. Nature, 1990;348(22)∶334
3 Lai fa sheu, Ann chen, Ching-liang meng et al.Analysis of bcl-2 expression in normal ,inflammed dysplastic nasopharyngeal epithelia ,and nasopharyngeal carcinoma.Human Pathology, 1997;28(5)∶556
4 MP Bronner, C Culin ,J C Reed et al.The bcl-2 protoonogene ant the gastrointestinal epithelial tumor progression model.Am J Pathol,1995;146(1)∶20
, http://www.100md.com
5 生秀杰，宋和存，何秀琴.抗凋亡基因bcl-2在子宫内膜癌的表达及意义.中华肿瘤杂志，1998；20(5)∶365
6 李秀林，苏宝山.39例早期胃癌的免疫组化及粘液组化观察.西安医科大学学报，1993；14(4)∶327
7 Mcdonell TJ,Deanc N,Platt F et al.bcl-2 immunoglobulin transgenic mice demonstrate extended B cell survival and follicular lymphoproliferation.Cell ,1989;57(1)∶78
(1998-12-30收稿 1999-03-04修回), http://www.100md.com