淫羊藿总黄酮对荷瘤小鼠细胞免疫及红细胞免疫功能的影响
作者：
单位：郝炳华 陶 明 何立端 薛晚利李选社 孟晓军 张京田(公共卫生学院卫生微生物与免疫学教研室 西安 710061)
关键词：淫羊藿总黄酮；荷瘤小鼠；淋巴细胞转化率；红细胞C3b受体花环；红细胞免疫复合物花环
西安医科大学学报/990308 郝炳华 陶明 何立端 薛晚利 李选社 孟晓军
摘要 为研究淫羊藿总黄酮对荷瘤小鼠细胞免疫及红细胞免疫功能的影响，检测了腹腔巨噬细胞吞噬功能、淋巴细胞转化率、红细胞C3b受体花环率和免疫复合物花环率。结果表明，EFT能显著增加荷瘤小鼠巨噬细胞吞噬功能、淋巴细胞转化率和脾体比值，能显著增加红细胞C3b受体花环率并降低红细胞免疫复合物花环率。提示EFT能增加荷瘤小鼠的细胞免疫功能和红细胞免疫功能，在一定程度上可以抑制肿瘤细胞的生长。
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EFFECT OF EPIMEDIUM FLAVONE TOTAL (EFT) ON
CELLULAR AND ERYTHROCYTIC IMMUNOFUNCTION
OF EHRLICH ASCITES CANCER(EAC) BEARING MICE
Hao Binghua,Tao Ming, He Liduan et al
(Department of Publi Health Microbiology and Immunology,Faculty of Preventive Medicine)
Abstract We studied effect of Epimedium Flavone Total(EFT) on the immunofunction of mice was burdened with Ehrlich Ascites Cancer (EAC) ,and tested the lymphocyte transformation rate, erythrocyto-C3b receptor rossette rate,erythrocyto-immunocomplexs rossette rate,phagocytosis of macrophagocyte in peritoneal cavity. The results showed that EFT could increase phagocytosis activity of macrophagocyte (P<0.05),promote lymphocyte transformation rate (P<0.05) and increase the sero-antibody level meanly (P<0.05),while low-dosage group could increase Plaque Forming Cell( PFC) significantly (P<0.05)，raise the ratio value of spleen to body(P<0.05) of EAC-bearing mice.So we say that EFT might be enhance burdened mice′s immunofunction. Lowdosage could improve sero-antibody level.Effect on regulating cellular immunofunction are related to dosage.EFT may be inhibit the growth of EAC cells to some degree.
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Key words Epimedium Flavone Total(EFT);burdened-tumor mice;lymphocyte transformation rate;erythrocyto-C3b receptor rossette rate,erythrocytic immune complexs rossette rate
淫羊藿又名仙灵脾，传统医学认为其具有补肾壮阳、强筋骨、祛风湿等作用。现代研究发现，淫羊藿具有调节机体免疫功能、抗癌、抗衰老等作用[1]。其有效成分为淫羊藿甙类黄酮化合物及多糖。王天然[2]等研究发现淫羊藿总黄酮(Epimedium flavone total, EFT)是淫羊藿中促进免疫功能的有效成分，它具有增强正常小鼠细胞免疫及体液免疫的作用，对抗环磷酰胺的抑制抗体生成作用，可提高巨噬细胞吞噬活性。为探讨EFT对荷瘤小鼠免疫功能的调节作用，本文就EFT对荷瘤小鼠细胞免疫和红细胞免疫功能的影响进行了初步研究。
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材料与方法
1 实验动物 昆明种雄性健康成年小鼠，体重18～22g，本校实验动物中心提供。
2 EFT的提取 EFT从朝鲜淫羊藿中提取，用生理盐水分别配成40g/L和4g/L两个浓度，4℃冰箱保存备用。
3 艾氏腹水瘤细胞株 由中国科学院上海细胞生物学研究所提供。
4 试剂 ConA(Sigma公司)，MTT(Serva公司)，PRMI-1640(GBIOCO公司)，冻干酵母菌制剂(陕西省人民医院红细胞免疫室提供)，健康绵羊红细胞(sRBC)、补体及小牛血清等均由本室自备。
5 动物分组及处理 将24只荷瘤小鼠随机分为3组，分别为荷瘤对照组、低剂量给药组和高剂量给药组。对照组用生理盐水0.5ml/只，两给药组分别用不同浓度的EFT(1000mg/kg和100mg/kg)连续灌胃10d，其中第6天用2%的sRBC 0.5ml/只对所有小鼠行腹腔注射免疫，第11天剪鼠尾取血进行红细胞免疫功能测定，眼球后取血，脱臼处死，无菌取出脾脏，制成1×107/ml单个脾细胞悬液备用。
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6 实验方法 腹腔巨噬细胞吞噬功能测定[3]，淋巴细胞转化试验[4]，红细胞C3b受体花环及免疫复合物花环[5]。 7 统计学处理 结果用均数±标准误表示，显著性检验采用方差分析和t检验。
结果
1 淫羊藿总黄酮对细胞免疫功能的影响 与荷瘤对照组巨噬细胞吞噬率相比，不同剂量EFT给药组均显著增高(P<0.01)，随着给药剂量的增加，吞噬率增加。与荷瘤对照组ConA刺激的淋巴细胞转化试验吸光值(A值)相比，给药组A值均显著高于对照组(P<0.05;P<0.01)，不同给药组之间差异不显著，结果见表1。
表1 EFT对荷瘤小鼠巨噬细胞吞噬率和淋巴细胞转化率的影响 (
±
) 组 别
, 百拇医药
n
巨噬细胞吞噬率
(%)
淋巴细胞转化率
(λ=292nm)
荷瘤对照组
7
15.4±2.47
0.540±0.071
低剂量给药组
8
23.2±3.03**
, http://www.100md.com
0.673±0.055**
高剂量给药组
8
28.1±1.20**
0.683±0.076**
注：与荷瘤对照组相比 *P<0.05,**P<0.01
表2 EFT对荷瘤小鼠RBC-C3bR花环率和IC花环率的影响(±) 组 别
, http://www.100md.com n
RBC-C3bR花环率
(%)
RBC-IC花环率
(%)
荷瘤对照组
7
12.68±1.18
8.98±1.25
低剂量给药组
8
15.15±1.36**
, 百拇医药
6.35±0.91*
高剂量给药组
8
20.45±2.05**
8.81±1.07
注：与荷瘤对照组相比*P<0.05,**P<0.01
2 淫羊藿总黄酮对红细胞免疫功能的影响 与荷瘤对照组红细胞C3b受体(RBC-C3bR)花环率相比，不同EFT给药组的RBC-C3bR花环率均显著增加(P<0.05,P<0.01)，且随着给药剂量的增加而增加；低剂量EFT给药组红细胞免疫复合物(RBC-IC)花环率明显低于荷瘤对照组(P<0.05)，高剂量EFT给药组RBC-IC花环率略低于荷瘤对照组，差异不显著，结果见表2。
, 百拇医药
3 淫羊藿总黄酮对肿瘤生长的抑制作用 EFT给药组小鼠脾重(mg)与体重(g)之比值均显著高于荷瘤对照组(P<0.05;P<0.01)；随着EFT给药剂量的增加，抑瘤率也呈增加的趋势，结果见表3。
表3 EFT对荷瘤小鼠脾体比和抑瘤率(TGI)的影响 组 别
n
脾重/体重(mg/kg)
TGI(%)
荷瘤对照组
7
3.45±0.51
-
低剂量给药组
, 百拇医药
8
4.85±0.96*
14.18
高剂量给药组
8
6.42±1.83**
29.06
注：与荷瘤对照组相比较*P<0.05,**P<0.01
讨论
机体抗肿瘤免疫机制十分复杂，大量资料已经证实，单核巨噬细胞系统及其释放的多种细胞因子具有重要作用，提高肿瘤局部的巨噬细胞数量和活力是增强机体抗肿瘤能力的一个重要方面。耿排力[5]等研究发现，淫羊藿可使“阳虚”小鼠的抗体形成、细胞功能趋于恢复，增强体液免疫功能。章岳山[6]等研究发现荷瘤小鼠RBC-C3bR花环率明显低于正常，认为检测红细胞免疫功能对肿瘤的诊疗及判断预后具有参考价值。
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本研究发现EFT能显著提高腹腔巨噬细胞的吞噬功能和T淋巴细胞的转化率，且随着给药剂量的增加，其作用显著增加。提示EFT可促进巨噬细胞的非特异性杀伤肿瘤细胞作用和特异性T淋巴细胞的细胞毒作用，对荷瘤小鼠低下的细胞免疫功能具有一定的恢复作用。
EFT可显著提高小鼠的RBC-C3bR花环率，同时低剂量的EFT还能显著降低RBC-IC花环率，高剂量组EFT对RBC-IC花环率的作用不明显。提示低剂量的EFT可明显减少机体循环免疫复合物，高剂量的EFT对机体循环免疫复合物的清除作用意义不大。
不同剂量的EFT均可显著增加荷瘤小鼠的脾体比值，且随剂量的增加而增加。同时随着给药量的增加，对肿瘤组织生长的抑制作用增加。提示EFT在促进荷瘤小鼠细胞免疫功能的恢复、抑制肿瘤生长中可能具有一定的意义。
综上所述，EFT对荷瘤小鼠低下的细胞免疫功能和红细胞免疫功能具有一定的恢复作用。可增强荷瘤小鼠巨噬细胞的吞噬功能、改善红细胞免疫功能，一定程度上可抑制肿瘤细胞的生长。用EFT作为肿瘤患者的辅助治疗药物可能具有一定的应用前景。有关EFT对机体的免疫调节机制有待深入研究。
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参考文献
1 周仲贵.淫羊藿的作用.时珍国药研究，1991；2(2)∶87
2 王天然，邢善田，周金黄.淫羊藿总黄酮促进免疫功能的实验.中成药研究，1987；(2)∶27
3 董晓慧，鲍德虎，王建安等.多抗甲素对小鼠腹腔巨噬细胞的作用.西安医科大学学报，1995；16(3)∶292
4 李翠玲，崔正言，李淑贞等.MTT比色分析法的改进及初步应用.上海免疫学杂志，1996；16(5)∶306
5 刘景田，李宝麟，党小军.红细胞免疫检测方法：红细胞酵母花环法的改变.西安医科大学学报，1993；14(3)∶280
6 耿排力，杨贵贞.温阳药及其有效成分对阳虚动物模型某些免疫功能的影响.中医杂志，1983；24(3)∶61
7 章岳山，李树铭，匡希文等.荷瘤小鼠红细胞免疫功能观察.中华微生物学与免疫学杂志，1997；17(1)∶60
(1999-03-03收稿 1999-04-11修回), 百拇医药
单位：郝炳华 陶 明 何立端 薛晚利李选社 孟晓军 张京田(公共卫生学院卫生微生物与免疫学教研室 西安 710061)
关键词：淫羊藿总黄酮；荷瘤小鼠；淋巴细胞转化率；红细胞C3b受体花环；红细胞免疫复合物花环
西安医科大学学报/990308 郝炳华 陶明 何立端 薛晚利 李选社 孟晓军
摘要 为研究淫羊藿总黄酮对荷瘤小鼠细胞免疫及红细胞免疫功能的影响，检测了腹腔巨噬细胞吞噬功能、淋巴细胞转化率、红细胞C3b受体花环率和免疫复合物花环率。结果表明，EFT能显著增加荷瘤小鼠巨噬细胞吞噬功能、淋巴细胞转化率和脾体比值，能显著增加红细胞C3b受体花环率并降低红细胞免疫复合物花环率。提示EFT能增加荷瘤小鼠的细胞免疫功能和红细胞免疫功能，在一定程度上可以抑制肿瘤细胞的生长。
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EFFECT OF EPIMEDIUM FLAVONE TOTAL (EFT) ON
CELLULAR AND ERYTHROCYTIC IMMUNOFUNCTION
OF EHRLICH ASCITES CANCER(EAC) BEARING MICE
Hao Binghua,Tao Ming, He Liduan et al
(Department of Publi Health Microbiology and Immunology,Faculty of Preventive Medicine)
Abstract We studied effect of Epimedium Flavone Total(EFT) on the immunofunction of mice was burdened with Ehrlich Ascites Cancer (EAC) ,and tested the lymphocyte transformation rate, erythrocyto-C3b receptor rossette rate,erythrocyto-immunocomplexs rossette rate,phagocytosis of macrophagocyte in peritoneal cavity. The results showed that EFT could increase phagocytosis activity of macrophagocyte (P<0.05),promote lymphocyte transformation rate (P<0.05) and increase the sero-antibody level meanly (P<0.05),while low-dosage group could increase Plaque Forming Cell( PFC) significantly (P<0.05)，raise the ratio value of spleen to body(P<0.05) of EAC-bearing mice.So we say that EFT might be enhance burdened mice′s immunofunction. Lowdosage could improve sero-antibody level.Effect on regulating cellular immunofunction are related to dosage.EFT may be inhibit the growth of EAC cells to some degree.
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Key words Epimedium Flavone Total(EFT);burdened-tumor mice;lymphocyte transformation rate;erythrocyto-C3b receptor rossette rate,erythrocytic immune complexs rossette rate
淫羊藿又名仙灵脾，传统医学认为其具有补肾壮阳、强筋骨、祛风湿等作用。现代研究发现，淫羊藿具有调节机体免疫功能、抗癌、抗衰老等作用[1]。其有效成分为淫羊藿甙类黄酮化合物及多糖。王天然[2]等研究发现淫羊藿总黄酮(Epimedium flavone total, EFT)是淫羊藿中促进免疫功能的有效成分，它具有增强正常小鼠细胞免疫及体液免疫的作用，对抗环磷酰胺的抑制抗体生成作用，可提高巨噬细胞吞噬活性。为探讨EFT对荷瘤小鼠免疫功能的调节作用，本文就EFT对荷瘤小鼠细胞免疫和红细胞免疫功能的影响进行了初步研究。
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材料与方法
1 实验动物 昆明种雄性健康成年小鼠，体重18～22g，本校实验动物中心提供。
2 EFT的提取 EFT从朝鲜淫羊藿中提取，用生理盐水分别配成40g/L和4g/L两个浓度，4℃冰箱保存备用。
3 艾氏腹水瘤细胞株 由中国科学院上海细胞生物学研究所提供。
4 试剂 ConA(Sigma公司)，MTT(Serva公司)，PRMI-1640(GBIOCO公司)，冻干酵母菌制剂(陕西省人民医院红细胞免疫室提供)，健康绵羊红细胞(sRBC)、补体及小牛血清等均由本室自备。
5 动物分组及处理 将24只荷瘤小鼠随机分为3组，分别为荷瘤对照组、低剂量给药组和高剂量给药组。对照组用生理盐水0.5ml/只，两给药组分别用不同浓度的EFT(1000mg/kg和100mg/kg)连续灌胃10d，其中第6天用2%的sRBC 0.5ml/只对所有小鼠行腹腔注射免疫，第11天剪鼠尾取血进行红细胞免疫功能测定，眼球后取血，脱臼处死，无菌取出脾脏，制成1×107/ml单个脾细胞悬液备用。
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6 实验方法 腹腔巨噬细胞吞噬功能测定[3]，淋巴细胞转化试验[4]，红细胞C3b受体花环及免疫复合物花环[5]。 7 统计学处理 结果用均数±标准误表示，显著性检验采用方差分析和t检验。
结果
1 淫羊藿总黄酮对细胞免疫功能的影响 与荷瘤对照组巨噬细胞吞噬率相比，不同剂量EFT给药组均显著增高(P<0.01)，随着给药剂量的增加，吞噬率增加。与荷瘤对照组ConA刺激的淋巴细胞转化试验吸光值(A值)相比，给药组A值均显著高于对照组(P<0.05;P<0.01)，不同给药组之间差异不显著，结果见表1。
表1 EFT对荷瘤小鼠巨噬细胞吞噬率和淋巴细胞转化率的影响 (
±) 组 别, 百拇医药
n
巨噬细胞吞噬率
(%)
淋巴细胞转化率
(λ=292nm)
荷瘤对照组
7
15.4±2.47
0.540±0.071
低剂量给药组
8
23.2±3.03**
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0.673±0.055**
高剂量给药组
8
28.1±1.20**
0.683±0.076**
注：与荷瘤对照组相比 *P<0.05,**P<0.01
表2 EFT对荷瘤小鼠RBC-C3bR花环率和IC花环率的影响(
±) 组 别, http://www.100md.com n
RBC-C3bR花环率
(%)
RBC-IC花环率
(%)
荷瘤对照组
7
12.68±1.18
8.98±1.25
低剂量给药组
8
15.15±1.36**
, 百拇医药
6.35±0.91*
高剂量给药组
8
20.45±2.05**
8.81±1.07
注：与荷瘤对照组相比*P<0.05,**P<0.01
2 淫羊藿总黄酮对红细胞免疫功能的影响 与荷瘤对照组红细胞C3b受体(RBC-C3bR)花环率相比，不同EFT给药组的RBC-C3bR花环率均显著增加(P<0.05,P<0.01)，且随着给药剂量的增加而增加；低剂量EFT给药组红细胞免疫复合物(RBC-IC)花环率明显低于荷瘤对照组(P<0.05)，高剂量EFT给药组RBC-IC花环率略低于荷瘤对照组，差异不显著，结果见表2。
, 百拇医药
3 淫羊藿总黄酮对肿瘤生长的抑制作用 EFT给药组小鼠脾重(mg)与体重(g)之比值均显著高于荷瘤对照组(P<0.05;P<0.01)；随着EFT给药剂量的增加，抑瘤率也呈增加的趋势，结果见表3。
表3 EFT对荷瘤小鼠脾体比和抑瘤率(TGI)的影响 组 别
n
脾重/体重(mg/kg)
TGI(%)
荷瘤对照组
7
3.45±0.51
-
低剂量给药组
, 百拇医药
8
4.85±0.96*
14.18
高剂量给药组
8
6.42±1.83**
29.06
注：与荷瘤对照组相比较*P<0.05,**P<0.01
讨论
机体抗肿瘤免疫机制十分复杂，大量资料已经证实，单核巨噬细胞系统及其释放的多种细胞因子具有重要作用，提高肿瘤局部的巨噬细胞数量和活力是增强机体抗肿瘤能力的一个重要方面。耿排力[5]等研究发现，淫羊藿可使“阳虚”小鼠的抗体形成、细胞功能趋于恢复，增强体液免疫功能。章岳山[6]等研究发现荷瘤小鼠RBC-C3bR花环率明显低于正常，认为检测红细胞免疫功能对肿瘤的诊疗及判断预后具有参考价值。
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本研究发现EFT能显著提高腹腔巨噬细胞的吞噬功能和T淋巴细胞的转化率，且随着给药剂量的增加，其作用显著增加。提示EFT可促进巨噬细胞的非特异性杀伤肿瘤细胞作用和特异性T淋巴细胞的细胞毒作用，对荷瘤小鼠低下的细胞免疫功能具有一定的恢复作用。
EFT可显著提高小鼠的RBC-C3bR花环率，同时低剂量的EFT还能显著降低RBC-IC花环率，高剂量组EFT对RBC-IC花环率的作用不明显。提示低剂量的EFT可明显减少机体循环免疫复合物，高剂量的EFT对机体循环免疫复合物的清除作用意义不大。
不同剂量的EFT均可显著增加荷瘤小鼠的脾体比值，且随剂量的增加而增加。同时随着给药量的增加，对肿瘤组织生长的抑制作用增加。提示EFT在促进荷瘤小鼠细胞免疫功能的恢复、抑制肿瘤生长中可能具有一定的意义。
综上所述，EFT对荷瘤小鼠低下的细胞免疫功能和红细胞免疫功能具有一定的恢复作用。可增强荷瘤小鼠巨噬细胞的吞噬功能、改善红细胞免疫功能，一定程度上可抑制肿瘤细胞的生长。用EFT作为肿瘤患者的辅助治疗药物可能具有一定的应用前景。有关EFT对机体的免疫调节机制有待深入研究。
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参考文献
1 周仲贵.淫羊藿的作用.时珍国药研究，1991；2(2)∶87
2 王天然，邢善田，周金黄.淫羊藿总黄酮促进免疫功能的实验.中成药研究，1987；(2)∶27
3 董晓慧，鲍德虎，王建安等.多抗甲素对小鼠腹腔巨噬细胞的作用.西安医科大学学报，1995；16(3)∶292
4 李翠玲，崔正言，李淑贞等.MTT比色分析法的改进及初步应用.上海免疫学杂志，1996；16(5)∶306
5 刘景田，李宝麟，党小军.红细胞免疫检测方法：红细胞酵母花环法的改变.西安医科大学学报，1993；14(3)∶280
6 耿排力，杨贵贞.温阳药及其有效成分对阳虚动物模型某些免疫功能的影响.中医杂志，1983；24(3)∶61
7 章岳山，李树铭，匡希文等.荷瘤小鼠红细胞免疫功能观察.中华微生物学与免疫学杂志，1997；17(1)∶60
(1999-03-03收稿 1999-04-11修回), 百拇医药