宫川棘口吸虫虫卵、尾蚴及成虫体被超微结构的扫描电镜观察
作者：陈欣 黄晓红
单位：陈 欣 福建教育学院生化系(福州 350001)；黄晓红 福建省寄生虫病研究所
关键词：宫川棘口吸虫；体被超微结构；扫描电镜
福建医科大学学报990325 目的 观察宫川棘口吸虫虫卵、尾蚴及成虫的体被超微结构，为其分类及其生物学特性的进一步认识提供资料。 方法 通过实验感染的方式维持生活史循环，主要采用扫描电子显微镜观察虫体形态，光学显微镜观察发育过程。 结果 虫卵前端有卵盖、末端有皱褶增厚部分；尾蚴的口吸盘周围对称分布着有纤毛的乳突，有或无纤毛的凹陷及小孔；具纤毛的乳突在虫体的其余部分也有发现，可能起感觉器的作用。 结论 尾蚴的体被具有分泌、排泄功能；尾蚴尾部有鳍，有助于尾蚴在水中活动。
Scanning Electron Microscopic Observations of the Eggs,Cercariae and Adults of Echinostoma Miyagawai
, 百拇医药
Chen Xin1, Huang Xiaohong2
(1. Department of Biochemistry, Fujian Provincial Education College, Fuzhou, 350001
(2. Fujian Provincial Institute of Parasite Diseases, Fuzhou, 350001)
Objective To observe the tegumental ultrastructure of egg,cercariae and the adults of Echinostoma Miyagawai may provide information for its taxonomic studies and its biological characteristic. Methods To preserve life history cycle by experimental infection. E.Miyagawai′s body examined mainly by using scanning electron microscopy and its developed process by using optical microcopy. Results There is egg cover before insect egg and is wrinkled increase part behind it. The nipples having cilium,sanken having or not cilium and little holes are distributed symmetrically around the oral sucker of cercariae. The nipples having cilium are discovered in the rest,which may have sense function. Conclusion The cercariae′s tegumental has secreted and excreted function. The tail bin of it was described,which can help it working in the water.
, 百拇医药
Key words Echinostoma miyagawai; tegumental ultrastructure; scanning electron microscopy
宫川棘口吸虫(Echinostoma miyagawai Ishii,1932)隶属于复殖目棘口科棘口属，是家禽的常见寄生虫，偶见人体感染的报道。关于其与棘口属另几种吸虫的分类地位问题，学者们的观点具有较大的分歧，有的认为是同物异名，有的认为是各自独立的虫种[1]。而体被结构是这类吸虫分类的重要依据之一，本文对宫川棘口吸虫虫卵、尾蚴和成虫的体表超微结构进行扫描电镜观察。
1 材料和方法
1.1 宫川棘口吸虫虫体采自福州台江农贸市场的家鸭盲肠。中间宿主静水椎实螺(Lymnaea stagnalis)、小土蜗(Galba pervia)、扁卷螺(Planorbis corneus)等均为实验室中从螺卵孵化培养而成。终末宿主系购自市场的雏鸭，经连续3天粪检阴性者。
, http://www.100md.com
1.2 尾蚴用中性红活体染色，观察腺体细胞。
1.3 扫描电镜的样品处理 0.1 mol/L磷酸缓冲液(pH 7.4)配制的2.5%戊二醛固定，以缓冲液冲洗，50%～100%酒精逐级脱水，醋酸异戊酯置换，液态CO2零界点干燥，虫体用导电胶粘在铜样品台上，喷金。JSM-35CF型扫描电镜观察。
2 结 果
2.1 体被超微结构
2.1.1 虫卵 虫卵前端有卵盖，表面一般光滑，后端有皱褶加厚，卵内毛蚴成熟时，破卵盖而出(图1)。
图1 虫卵卵盖脱落
2.1.2 尾蚴 经中性红活体染色，在光学显微镜下，可见尾蚴有6个穿刺腺细胞，开口于口吸盘的顶端背面。在其两侧及口吸盘下，还有若干食道旁腺细胞。扫描电镜观察，口吸盘围口部肌肉呈块状突起，其上对称分布着一些陷窝和小孔，大部分陷窝中都各有一条纤毛伸出，块状突起之间还对称分布着一些底座圆形、中央有纤毛的乳突(图2)。在口吸盘之后是头冠，头冠上有37枚头棘，它们能在口吸盘肌肉的牵引下被动伸缩。头棘与口吸盘之间及虫体的其他部分体被也分布着具纤毛的乳突，但以口吸盘周围居多。尾蚴体部体被呈环状皱褶，褶缝中有规律地分布着一排排的体棘，体棘单生，呈倒三角形(图3)。尾蚴的尾部有两条纵向的沟，尾鳍从其中一条沟中伸出，它始自体部与尾部的连接处，终至尾长的3/4处，前部较窄，后部较宽，略呈波浪型。
, 百拇医药
图2 尾蚴口吸盘上的陷窝、小孔及有纤毛的乳突
图3 尾蚴头棘(内缩)体棘及乳突
2.1.3 成虫 体型较大，呈长叶形。口吸盘与腹吸盘之间两侧向腹面卷曲成凹陷。口吸盘周围及其与头棘之间分布着一些鹅卵石状的乳突。其头棘为37枚，腹角棘各5枚，分两排，上排3枚，下排2枚，侧棘各6枚，背棘共15枚，分上下两排，各有7枚和8枚。头棘亦可在肌肉的牵引下伸缩。体棘在腹面分布较多，始自头冠后，终至虫体体长的3/4位置，以口腹吸盘之间最为密集、粗大且末端尖锐，腹吸盘后的体棘末端较圆滑，且越来越稀疏，越来越钝(图4)。背面体棘的分布视虫龄不同有所差异，在较小的虫体中，分布较多(图5)，但在较大的虫体中仅分布在头冠后的两侧，并逐渐减少，随后是光滑的体表。阴茎表皮无棘(图6)。
, 百拇医药
图4 成虫腹吸盘后的体棘
图5 成虫体背部的体棘分布(虫龄15日)
图6 成虫腹吸盘前的阴囊中伸出的阴茎
2.2 本虫生活史中较少见的现象 在进行生活史观察时，先后3次见到雷蚴体内有囊蚴存在。尾蚴的体外结囊现象是将一只阳性的小土蜗放在一个干净的指形瓶内，观察到大批尾蚴释放出来，加入3只椎实螺做第二中间宿主,次日移去螺蛳，将瓶内残渣吸到一干净的载玻片上用光学显微镜观察时，发现在残渣中除了死亡的尾蚴外，还有3个活的囊蚴，提示本虫的尾蚴偶而也会在中间宿主体外脱去尾部，分泌成囊物质，形成囊蚴。
囊蚴寄生的主要部位是围心腔，但当侵入螺体的尾蚴数量非常多时，它有时也在螺的消化腺部位结囊。先后两次在从螺体内分离囊蚴团的时候，发现有30多只囊蚴自动脱囊。
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3 讨 论
本文关于宫川棘口吸虫虫卵、尾蚴和成虫体被超微结构的扫描电镜观察及生活史中少见现象的描述，为此虫的分类和进一步认识生物学的特性提供了资料。
棘口吸虫具有一些其他吸虫所缺乏的特征，如发达的头冠、头棘、体棘、口吸盘和腹吸盘，这与其适应小肠内的生活环境有直接的关系，它们必须有发达的附着器官，以抗衡小肠的剧烈蠕动。迄今，所有蠕虫的各类乳突的功能都是推测的，它们可能是机械的、电流的、接触的和化学的感受器，起着定向、摄食和对宿主环境的判断功能。有纤毛的乳突通常被描述为接受接触、电流和化学刺激的功能[2,3]，本实验在尾蚴中观察到的乳突可能也具有这种功能。无纤毛的陷窝和小孔可能具有分泌和排泄功能，与用中性红活体染色的尾蚴对照，这些小孔有可能是穿刺腺细胞和食道旁腺细胞的开口。成虫口吸盘周围的鹅卵石似的乳突可能具有触觉的功能。
关于雷蚴体内有囊蚴存在的现象，笔者认为有两种可能：一是雷蚴体内发育的尾蚴没有逸出母体，而是直接在雷蚴体内成囊。Mohandas在研究Kerala的淡水中的尾蚴时，曾发现某种棘口吸虫的尾蚴在雷蚴体内形成囊蚴的现象[4]。二是尾蚴从雷蚴体内逸出后，雷蚴在摄食过程中又吞入其周围环境中的尾蚴。Koie在扫描电镜观察Mesorchis denticulatus棘口吸虫时，观察并拍摄到雷蚴吞入尾蚴的现象，甚至有的尾蚴体表已覆盖了一层成囊物质[5]。在宫川棘口吸虫中雷蚴体内有囊蚴的现象未见报道。
, 百拇医药
Mohandas观察到一未定种的棘口吸虫尾蚴在玻片上成囊的现象[4]，可佐证笔者观察到的尾蚴体外成囊现象，提示宫川棘口吸虫不全需要第二中间宿主。
棘口科吸虫种类繁多，分类较混乱,目前对其体被超微结构的扫描观察较少，国内只见有关圆圃棘口吸虫、日本棘隙吸虫和藐小棘隙吸虫的研究报告[3,6,7]，国外的有关报道也很少[8]。这些报道认为头棘、体棘、乳突、尾鳍等在不同的种间分布可能不同。若能将与宫川棘口吸虫相近的种类一一进行扫描电镜观察，再互相比较，将更有分类学意义。
参考文献
1 陈心陶. 中国动物志—扁形动物门,吸虫纲,复殖目(一). 北京：科学出版社， 1985：357
2 Smales LR,Blankespoor HD. Echinostoma revolutum(Froelich,1802) Looss, 1899 and Isthmiophora melis(Schrank,1788) Luhe, 1909(Echinostomatinae,Diegenea):Scanning electron microscopy of the tegumental surfaces. J Helminth, 1984;58:87
, 百拇医药
3 吴维铎，肖 祥，吕大兵，等. 藐小棘隙吸虫体被超微结构的扫描电镜观察. 中国寄生虫学与寄生虫病杂志, 1997；15(4)：205
4 Mohandas A. Studies on the freshwater cercariae of Kerala Ⅶ.Echinostomatid cercariae. Proc Indian Acad Sci, 1981;90:433
5 Koie M. Scanning electron microscopy of rediae,cercariae,metacercariae and adults of Mesorchis denticulatus(Rudolphi,1802) (Trematoda,Echinostomatidae). Parasitol Res, 1987;73:50
6 安春丽，陈殿学，陈新秋，等. 圆圃棘口吸虫扫描电镜观察. 中国人兽共患病杂志， 1996；12(6)：41
7 林金祥，程由注. 日本棘隙吸虫成虫扫描电镜观察. 福建医药杂志， 1987；9：21
8 Krejci KG,Fried B. Light and scanning electron microscopic observations of the eggs, daughter rediae, cercariae, and encysted metacercariae of Echinostoma trivolvis and E.caproni. Parasitpl Res, 1994;80:42
(收稿：1999-05-25 修回：1999-09-01), http://www.100md.com
单位：陈 欣 福建教育学院生化系(福州 350001)；黄晓红 福建省寄生虫病研究所
关键词：宫川棘口吸虫；体被超微结构；扫描电镜
福建医科大学学报990325 目的 观察宫川棘口吸虫虫卵、尾蚴及成虫的体被超微结构，为其分类及其生物学特性的进一步认识提供资料。 方法 通过实验感染的方式维持生活史循环，主要采用扫描电子显微镜观察虫体形态，光学显微镜观察发育过程。 结果 虫卵前端有卵盖、末端有皱褶增厚部分；尾蚴的口吸盘周围对称分布着有纤毛的乳突，有或无纤毛的凹陷及小孔；具纤毛的乳突在虫体的其余部分也有发现，可能起感觉器的作用。 结论 尾蚴的体被具有分泌、排泄功能；尾蚴尾部有鳍，有助于尾蚴在水中活动。
Scanning Electron Microscopic Observations of the Eggs,Cercariae and Adults of Echinostoma Miyagawai
, 百拇医药
Chen Xin1, Huang Xiaohong2
(1. Department of Biochemistry, Fujian Provincial Education College, Fuzhou, 350001
(2. Fujian Provincial Institute of Parasite Diseases, Fuzhou, 350001)
Objective To observe the tegumental ultrastructure of egg,cercariae and the adults of Echinostoma Miyagawai may provide information for its taxonomic studies and its biological characteristic. Methods To preserve life history cycle by experimental infection. E.Miyagawai′s body examined mainly by using scanning electron microscopy and its developed process by using optical microcopy. Results There is egg cover before insect egg and is wrinkled increase part behind it. The nipples having cilium,sanken having or not cilium and little holes are distributed symmetrically around the oral sucker of cercariae. The nipples having cilium are discovered in the rest,which may have sense function. Conclusion The cercariae′s tegumental has secreted and excreted function. The tail bin of it was described,which can help it working in the water.
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Key words Echinostoma miyagawai; tegumental ultrastructure; scanning electron microscopy
宫川棘口吸虫(Echinostoma miyagawai Ishii,1932)隶属于复殖目棘口科棘口属，是家禽的常见寄生虫，偶见人体感染的报道。关于其与棘口属另几种吸虫的分类地位问题，学者们的观点具有较大的分歧，有的认为是同物异名，有的认为是各自独立的虫种[1]。而体被结构是这类吸虫分类的重要依据之一，本文对宫川棘口吸虫虫卵、尾蚴和成虫的体表超微结构进行扫描电镜观察。
1 材料和方法
1.1 宫川棘口吸虫虫体采自福州台江农贸市场的家鸭盲肠。中间宿主静水椎实螺(Lymnaea stagnalis)、小土蜗(Galba pervia)、扁卷螺(Planorbis corneus)等均为实验室中从螺卵孵化培养而成。终末宿主系购自市场的雏鸭，经连续3天粪检阴性者。
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1.2 尾蚴用中性红活体染色，观察腺体细胞。
1.3 扫描电镜的样品处理 0.1 mol/L磷酸缓冲液(pH 7.4)配制的2.5%戊二醛固定，以缓冲液冲洗，50%～100%酒精逐级脱水，醋酸异戊酯置换，液态CO2零界点干燥，虫体用导电胶粘在铜样品台上，喷金。JSM-35CF型扫描电镜观察。
2 结 果
2.1 体被超微结构
2.1.1 虫卵 虫卵前端有卵盖，表面一般光滑，后端有皱褶加厚，卵内毛蚴成熟时，破卵盖而出(图1)。
图1 虫卵卵盖脱落
2.1.2 尾蚴 经中性红活体染色，在光学显微镜下，可见尾蚴有6个穿刺腺细胞，开口于口吸盘的顶端背面。在其两侧及口吸盘下，还有若干食道旁腺细胞。扫描电镜观察，口吸盘围口部肌肉呈块状突起，其上对称分布着一些陷窝和小孔，大部分陷窝中都各有一条纤毛伸出，块状突起之间还对称分布着一些底座圆形、中央有纤毛的乳突(图2)。在口吸盘之后是头冠，头冠上有37枚头棘，它们能在口吸盘肌肉的牵引下被动伸缩。头棘与口吸盘之间及虫体的其他部分体被也分布着具纤毛的乳突，但以口吸盘周围居多。尾蚴体部体被呈环状皱褶，褶缝中有规律地分布着一排排的体棘，体棘单生，呈倒三角形(图3)。尾蚴的尾部有两条纵向的沟，尾鳍从其中一条沟中伸出，它始自体部与尾部的连接处，终至尾长的3/4处，前部较窄，后部较宽，略呈波浪型。
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图2 尾蚴口吸盘上的陷窝、小孔及有纤毛的乳突
图3 尾蚴头棘(内缩)体棘及乳突
2.1.3 成虫 体型较大，呈长叶形。口吸盘与腹吸盘之间两侧向腹面卷曲成凹陷。口吸盘周围及其与头棘之间分布着一些鹅卵石状的乳突。其头棘为37枚，腹角棘各5枚，分两排，上排3枚，下排2枚，侧棘各6枚，背棘共15枚，分上下两排，各有7枚和8枚。头棘亦可在肌肉的牵引下伸缩。体棘在腹面分布较多，始自头冠后，终至虫体体长的3/4位置，以口腹吸盘之间最为密集、粗大且末端尖锐，腹吸盘后的体棘末端较圆滑，且越来越稀疏，越来越钝(图4)。背面体棘的分布视虫龄不同有所差异，在较小的虫体中，分布较多(图5)，但在较大的虫体中仅分布在头冠后的两侧，并逐渐减少，随后是光滑的体表。阴茎表皮无棘(图6)。
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图4 成虫腹吸盘后的体棘
图5 成虫体背部的体棘分布(虫龄15日)
图6 成虫腹吸盘前的阴囊中伸出的阴茎
2.2 本虫生活史中较少见的现象 在进行生活史观察时，先后3次见到雷蚴体内有囊蚴存在。尾蚴的体外结囊现象是将一只阳性的小土蜗放在一个干净的指形瓶内，观察到大批尾蚴释放出来，加入3只椎实螺做第二中间宿主,次日移去螺蛳，将瓶内残渣吸到一干净的载玻片上用光学显微镜观察时，发现在残渣中除了死亡的尾蚴外，还有3个活的囊蚴，提示本虫的尾蚴偶而也会在中间宿主体外脱去尾部，分泌成囊物质，形成囊蚴。
囊蚴寄生的主要部位是围心腔，但当侵入螺体的尾蚴数量非常多时，它有时也在螺的消化腺部位结囊。先后两次在从螺体内分离囊蚴团的时候，发现有30多只囊蚴自动脱囊。
, http://www.100md.com
3 讨 论
本文关于宫川棘口吸虫虫卵、尾蚴和成虫体被超微结构的扫描电镜观察及生活史中少见现象的描述，为此虫的分类和进一步认识生物学的特性提供了资料。
棘口吸虫具有一些其他吸虫所缺乏的特征，如发达的头冠、头棘、体棘、口吸盘和腹吸盘，这与其适应小肠内的生活环境有直接的关系，它们必须有发达的附着器官，以抗衡小肠的剧烈蠕动。迄今，所有蠕虫的各类乳突的功能都是推测的，它们可能是机械的、电流的、接触的和化学的感受器，起着定向、摄食和对宿主环境的判断功能。有纤毛的乳突通常被描述为接受接触、电流和化学刺激的功能[2,3]，本实验在尾蚴中观察到的乳突可能也具有这种功能。无纤毛的陷窝和小孔可能具有分泌和排泄功能，与用中性红活体染色的尾蚴对照，这些小孔有可能是穿刺腺细胞和食道旁腺细胞的开口。成虫口吸盘周围的鹅卵石似的乳突可能具有触觉的功能。
关于雷蚴体内有囊蚴存在的现象，笔者认为有两种可能：一是雷蚴体内发育的尾蚴没有逸出母体，而是直接在雷蚴体内成囊。Mohandas在研究Kerala的淡水中的尾蚴时，曾发现某种棘口吸虫的尾蚴在雷蚴体内形成囊蚴的现象[4]。二是尾蚴从雷蚴体内逸出后，雷蚴在摄食过程中又吞入其周围环境中的尾蚴。Koie在扫描电镜观察Mesorchis denticulatus棘口吸虫时，观察并拍摄到雷蚴吞入尾蚴的现象，甚至有的尾蚴体表已覆盖了一层成囊物质[5]。在宫川棘口吸虫中雷蚴体内有囊蚴的现象未见报道。
, 百拇医药
Mohandas观察到一未定种的棘口吸虫尾蚴在玻片上成囊的现象[4]，可佐证笔者观察到的尾蚴体外成囊现象，提示宫川棘口吸虫不全需要第二中间宿主。
棘口科吸虫种类繁多，分类较混乱,目前对其体被超微结构的扫描观察较少，国内只见有关圆圃棘口吸虫、日本棘隙吸虫和藐小棘隙吸虫的研究报告[3,6,7]，国外的有关报道也很少[8]。这些报道认为头棘、体棘、乳突、尾鳍等在不同的种间分布可能不同。若能将与宫川棘口吸虫相近的种类一一进行扫描电镜观察，再互相比较，将更有分类学意义。
参考文献
1 陈心陶. 中国动物志—扁形动物门,吸虫纲,复殖目(一). 北京：科学出版社， 1985：357
2 Smales LR,Blankespoor HD. Echinostoma revolutum(Froelich,1802) Looss, 1899 and Isthmiophora melis(Schrank,1788) Luhe, 1909(Echinostomatinae,Diegenea):Scanning electron microscopy of the tegumental surfaces. J Helminth, 1984;58:87
, 百拇医药
3 吴维铎，肖 祥，吕大兵，等. 藐小棘隙吸虫体被超微结构的扫描电镜观察. 中国寄生虫学与寄生虫病杂志, 1997；15(4)：205
4 Mohandas A. Studies on the freshwater cercariae of Kerala Ⅶ.Echinostomatid cercariae. Proc Indian Acad Sci, 1981;90:433
5 Koie M. Scanning electron microscopy of rediae,cercariae,metacercariae and adults of Mesorchis denticulatus(Rudolphi,1802) (Trematoda,Echinostomatidae). Parasitol Res, 1987;73:50
6 安春丽，陈殿学，陈新秋，等. 圆圃棘口吸虫扫描电镜观察. 中国人兽共患病杂志， 1996；12(6)：41
7 林金祥，程由注. 日本棘隙吸虫成虫扫描电镜观察. 福建医药杂志， 1987；9：21
8 Krejci KG,Fried B. Light and scanning electron microscopic observations of the eggs, daughter rediae, cercariae, and encysted metacercariae of Echinostoma trivolvis and E.caproni. Parasitpl Res, 1994;80:42
(收稿：1999-05-25 修回：1999-09-01), http://www.100md.com