多药耐药基因及相关蛋白基因在急性白血病中的表达
作者：赖永榕 马吉力 周建生 宁自觉 卢玉英 牛威林
单位：广西医科大学一附院血液科(南宁，530021)
关键词：急性白血病；多药耐药基因；多药耐药相关蛋白基因；多聚酶链反应
中图号
中图号：R733.71 文献标识码：A 文章编号：1000-467X(1999)03-0336-02
多药耐药基因(Multidrug resistance gene,mdr1)和多药耐药相关蛋白基因(Multidrug resistance—associated protein gene,MRP)的过度表达是引起急性白血病(AL)多药耐药(Multidrugresistance,MDR)发生的重要原因〔1〕。我们用逆转录—多聚酶链反应(RT-PCR)技术同时检测40例成人AL患者的mdr1和MRP的表达,并探讨它们与临床耐药的关系,现总结如下：
, http://www.100md.com
1 资料与方法
1.1 研究对象
40例病人均为我院住院病人,男28例,女12例，年龄16～61岁。其中急性髓细胞性白血病(AML)24例,急性淋巴细胞性白血病(ALL)16例。
1.2 RT-PCR方法
取病人骨髓标本,分离白细胞,用ATCG法提取总RNA。cDNA合成及PCR扩增方法参考文献〔2,3〕。PCR产物用8%聚丙烯酰胺凝胶电泳分析、银染法染色照相,相片在cs-930型薄层双波长色谱扫描仪上扫描定量，用mdr1(MRP)cDNA/β2-MGcDNA比值来表示mdr1(MRP)的表达水平。
1.3 统计处理
, 百拇医药
所有数据用PEMS医学统计软件包进行处理。
2 结果
2.1 耐药基因表达标准
2.1.1 mdr1的表达：以同时见到mdr1及β2-MG扩增带为阳性，以mdr1cDNA/β2-MGcDNA比值≤0.4为低表达,>0.4为高表达〔4〕。
2.1.2 MRP的表达：以同时见到MRP及β2-MG扩增带为阳性,以MRPcDNA/β2-MGcDNA的比值≤1为低表达,>1为高表达〔2〕。
2.2 AML与ALL的mdr1及MRP表达：(见表1)
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表1 AML与ALL的mdr1及MRP表达
病种
例数
阳性率(%)
表达水平(
±s)
24
mdr1
MRP
mdr1
, 百拇医药 MRP
AML
16
12(50.0)*
17(70.8)**
0.536±0.326Δ
0.489±0.426ΔΔ
ALL
7(43.8)*
12(75.0)**
0.643±0.140Δ
, 百拇医药
0.900±0.636ΔΔ
*x2=0.1504 P=0.6976 **x2=0.0836 P=0.7720
Δt'=0.9980 P>0.05ΔΔ t'=1.9509 P>0.05
2.3 耐药组与非耐药组间mdr1与MRP表达
按照临床耐药诊断标准〔2〕,我们将40例病人分成两组：耐药组27例,非耐药组13例。结果见表2。
表2 耐药组与非耐药组mdr1及MRP表达
组别
, http://www.100md.com
例数
mdr1(±s)
MRP(±s)
耐药组
27
0.680±0.273*
0.861±0.526**
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非耐药组
13
0.351±0.133*
0.184±0.108**
*t'=3.5311 P<0.05 **t="3.9930 P=0.0005
2.4 耐药标准的评价：
我们以mdr1及MRP高表达作为判断AL患者发生耐药的指标,根据临床耐药标准〔2〕，按《临床流行病学》中所述的方法分别计算阳性预测值、阴性预测值、准确性。结果见表3。
表3 耐药标准的评价
, http://www.100md.com
项目
mdr1>0.4
MRP>1
mdr1>0.4/MRP>1
阳性预测值(%)
85.7(12/14)
81.8(9/11)
100.0(6/6)
阴性预测值(%)
42.3(11/26)
41.4(12/29)
, http://www.100md.com
47.6(10/21)
准确性(%)
57.5(23/40)
52.5(21/40)
59.3(16/27)
3 讨论
3.1 AL患者mdr1和MRP表达
AML或ALL中mdr1及MRP基因的表达水平各家报道不同,多数人认为AML与ALL患者间mdr1及MRP的表达水平无明显差异〔5〕,但也有报道认为ALL患者mdr1及MRP的表达水平明显比AML患者高,并认为这是引起成人ALL患者化疗疗效不佳的原因之一〔6〕。我们的结果认为AML与ALL患者间mdr1及MRP基因的阳性率及表达水平无明显差异(P>0.05)。造成结果差异的原因可能与检测的方法及定量标准不同有关。
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3.2 AL患者mdr1及MRP表达与临床耐药的关系
临床资料显示,mdr1与MDR的相关性不容置疑。虽然MRP发现较晚,但已发现它与mdr1类似,对AL预后有负性影响.我们的结果发现临床耐药组中阳性患者mdr1及MRP的表达水平较非耐药组高(P<0.05)。说明mdr1和MRP的高表达与AL的临床耐药有关。
研究MDR的目的之一是为了更准确预测肿瘤耐药的发生,只有提高判断MDR的准确性,才能对于临床化疗药物的选择有帮助,而单一的检测手段判断MDR效果不理想,我们以mdr1和MRP同时高表达作为判断MDR的标准,用临床耐药标准对其进行评价,发现其阳性预测值、准确性都有所提高,与杨仁池报道一致〔2〕。
参考文献
, 百拇医药
1 Schneider E, Cowan KH, Bader H, et al. Increased expression of the multidrug resistance-associated protein gene in relapsed acute leukemia〔J〕. Blood，1995，85：186.
2 杨仁池,杨纯正,郝玉书，等.白血病多药耐药相关蛋白基因和多药耐药基因的表达及其临床意义〔J〕.中华血液学杂志，1996，17(2)：67.
3 Noonan K.E, Beck C, Holzmayer T.A, et al. Quantitative analysis of mdr1 gene expression in human tumors by polymerase chain reaction.〔J〕.Proc. Natl. Acad.Sci，1990，87(9)：7160.
4 浦津,刘海川,楼方定，等.急性白血病多药耐药基因表达的临床研究〔J〕.中华内科杂志，1995，34(10)：655.
5 杨仁池,杨纯正,郝玉书，等.急性白血病多药耐药相关蛋白基因表达及其免疫类型和FAB分型的关系〔J〕.中华血液学杂志，1996，17(7)：340.
6 董作仁,罗建民,徐文新，等.急性白血病患者多药耐药mdr1的表达及其临床意义〔J〕.中华肿瘤杂志，1997，19(1)：72.
收稿日期：1998-07-09；修回日期：1998-11-03, 百拇医药
单位：广西医科大学一附院血液科(南宁，530021)
关键词：急性白血病；多药耐药基因；多药耐药相关蛋白基因；多聚酶链反应
中图号
中图号：R733.71 文献标识码：A 文章编号：1000-467X(1999)03-0336-02
多药耐药基因(Multidrug resistance gene,mdr1)和多药耐药相关蛋白基因(Multidrug resistance—associated protein gene,MRP)的过度表达是引起急性白血病(AL)多药耐药(Multidrugresistance,MDR)发生的重要原因〔1〕。我们用逆转录—多聚酶链反应(RT-PCR)技术同时检测40例成人AL患者的mdr1和MRP的表达,并探讨它们与临床耐药的关系,现总结如下：
, http://www.100md.com
1 资料与方法
1.1 研究对象
40例病人均为我院住院病人,男28例,女12例，年龄16～61岁。其中急性髓细胞性白血病(AML)24例,急性淋巴细胞性白血病(ALL)16例。
1.2 RT-PCR方法
取病人骨髓标本,分离白细胞,用ATCG法提取总RNA。cDNA合成及PCR扩增方法参考文献〔2,3〕。PCR产物用8%聚丙烯酰胺凝胶电泳分析、银染法染色照相,相片在cs-930型薄层双波长色谱扫描仪上扫描定量，用mdr1(MRP)cDNA/β2-MGcDNA比值来表示mdr1(MRP)的表达水平。
1.3 统计处理
, 百拇医药
所有数据用PEMS医学统计软件包进行处理。
2 结果
2.1 耐药基因表达标准
2.1.1 mdr1的表达：以同时见到mdr1及β2-MG扩增带为阳性，以mdr1cDNA/β2-MGcDNA比值≤0.4为低表达,>0.4为高表达〔4〕。
2.1.2 MRP的表达：以同时见到MRP及β2-MG扩增带为阳性,以MRPcDNA/β2-MGcDNA的比值≤1为低表达,>1为高表达〔2〕。
2.2 AML与ALL的mdr1及MRP表达：(见表1)
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表1 AML与ALL的mdr1及MRP表达
病种
例数
阳性率(%)
表达水平(
±s)24
mdr1
MRP
mdr1
, 百拇医药 MRP
AML
16
12(50.0)*
17(70.8)**
0.536±0.326Δ
0.489±0.426ΔΔ
ALL
7(43.8)*
12(75.0)**
0.643±0.140Δ
, 百拇医药
0.900±0.636ΔΔ
*x2=0.1504 P=0.6976 **x2=0.0836 P=0.7720
Δt'=0.9980 P>0.05ΔΔ t'=1.9509 P>0.05
2.3 耐药组与非耐药组间mdr1与MRP表达
按照临床耐药诊断标准〔2〕,我们将40例病人分成两组：耐药组27例,非耐药组13例。结果见表2。
表2 耐药组与非耐药组mdr1及MRP表达
组别
, http://www.100md.com
例数
mdr1(
±s)MRP(
±s)耐药组
27
0.680±0.273*
0.861±0.526**
, http://www.100md.com
非耐药组
13
0.351±0.133*
0.184±0.108**
*t'=3.5311 P<0.05 **t="3.9930 P=0.0005
2.4 耐药标准的评价：
我们以mdr1及MRP高表达作为判断AL患者发生耐药的指标,根据临床耐药标准〔2〕，按《临床流行病学》中所述的方法分别计算阳性预测值、阴性预测值、准确性。结果见表3。
表3 耐药标准的评价
, http://www.100md.com
项目
mdr1>0.4
MRP>1
mdr1>0.4/MRP>1
阳性预测值(%)
85.7(12/14)
81.8(9/11)
100.0(6/6)
阴性预测值(%)
42.3(11/26)
41.4(12/29)
, http://www.100md.com
47.6(10/21)
准确性(%)
57.5(23/40)
52.5(21/40)
59.3(16/27)
3 讨论
3.1 AL患者mdr1和MRP表达
AML或ALL中mdr1及MRP基因的表达水平各家报道不同,多数人认为AML与ALL患者间mdr1及MRP的表达水平无明显差异〔5〕,但也有报道认为ALL患者mdr1及MRP的表达水平明显比AML患者高,并认为这是引起成人ALL患者化疗疗效不佳的原因之一〔6〕。我们的结果认为AML与ALL患者间mdr1及MRP基因的阳性率及表达水平无明显差异(P>0.05)。造成结果差异的原因可能与检测的方法及定量标准不同有关。
, http://www.100md.com
3.2 AL患者mdr1及MRP表达与临床耐药的关系
临床资料显示,mdr1与MDR的相关性不容置疑。虽然MRP发现较晚,但已发现它与mdr1类似,对AL预后有负性影响.我们的结果发现临床耐药组中阳性患者mdr1及MRP的表达水平较非耐药组高(P<0.05)。说明mdr1和MRP的高表达与AL的临床耐药有关。
研究MDR的目的之一是为了更准确预测肿瘤耐药的发生,只有提高判断MDR的准确性,才能对于临床化疗药物的选择有帮助,而单一的检测手段判断MDR效果不理想,我们以mdr1和MRP同时高表达作为判断MDR的标准,用临床耐药标准对其进行评价,发现其阳性预测值、准确性都有所提高,与杨仁池报道一致〔2〕。
参考文献
, 百拇医药
1 Schneider E, Cowan KH, Bader H, et al. Increased expression of the multidrug resistance-associated protein gene in relapsed acute leukemia〔J〕. Blood，1995，85：186.
2 杨仁池,杨纯正,郝玉书，等.白血病多药耐药相关蛋白基因和多药耐药基因的表达及其临床意义〔J〕.中华血液学杂志，1996，17(2)：67.
3 Noonan K.E, Beck C, Holzmayer T.A, et al. Quantitative analysis of mdr1 gene expression in human tumors by polymerase chain reaction.〔J〕.Proc. Natl. Acad.Sci，1990，87(9)：7160.
4 浦津,刘海川,楼方定，等.急性白血病多药耐药基因表达的临床研究〔J〕.中华内科杂志，1995，34(10)：655.
5 杨仁池,杨纯正,郝玉书，等.急性白血病多药耐药相关蛋白基因表达及其免疫类型和FAB分型的关系〔J〕.中华血液学杂志，1996，17(7)：340.
6 董作仁,罗建民,徐文新，等.急性白血病患者多药耐药mdr1的表达及其临床意义〔J〕.中华肿瘤杂志，1997，19(1)：72.
收稿日期：1998-07-09；修回日期：1998-11-03, 百拇医药