耳草属植物的化学研究Ⅷ.黄毛耳草化学成分的分离和鉴定
作者：彭江南 冯孝章 梁晓天
单位：彭江南 军事医学科学院放射医学研究所(北京100850)；冯孝章 梁晓天中国医学科学院药物研究所 中国协和医科大学
关键词：耳草属；黄花耳草；七叶内酯；异落叶松树脂醇；水仙苷
耳草属植物的化学研究 摘 要 从中药黄毛耳草Hedyotis chrysotricha中分离并鉴定出10个化合物，经鉴定为：咖啡酸(caffeic acid,Ⅰ)，东莨菪内酯(scopoletin，Ⅱ)，2，6-二甲氧基对苯醌(2，6-dimethoxy-1，4-benzoquinone,Ⅲ)，七叶内酯(aesculetin,Ⅳ)，异落叶松树脂醇(isolarisiresinol, Ⅴ)，β-谷甾醇(β-sitosterol, Ⅵ)，胡萝卜苷(daucosterol,Ⅶ)，异鼠李素-3-芸香糖苷(nicotiflorin,Ⅷ)，水仙苷(narcissin,Ⅸ)和芦丁(rutin,Ⅹ)。除Ⅱ和Ⅵ外均为首次从该植物中分得。
, 百拇医药
茜草科耳草属植物在我国有50多种，其中20多种药用〔1〕，大多为清热解毒类中药，用于治疗感冒，多种炎症及癌症。而对该属植物化学成分的报道较少，因此我们对该属3种药用植物硬毛耳草、牛白藤、黄毛耳草的化学成分进行了研究〔2～3〕。黄毛耳草Hedyotis chrysotricha的全草用作中药，又名石打穿，用于治疗病毒性肝炎、跌打损伤、小儿急性肾炎、风湿性关节炎、疮疔肿痛等疾病，民间用其全草治疗食道癌、肝癌、胃癌、腮腺癌，临床用于各种癌症〔1〕。前文报道从黄毛耳草中分离得到环烯醚萜和生物碱类化合物〔4～6〕，本文报道从黄毛耳草中分离鉴定的其它10个化合物：咖啡酸(caffeic acid,Ⅰ)，东莨菪内酯(scopoletin,Ⅱ)，2，6-二甲氧基对苯醌(2，6-dimethoxy-1，4-benzoquinone,Ⅲ)，七叶内酯(aesculetin,Ⅳ)，异落叶松树脂醇(isolarisiresinol,Ⅴ)，β-谷甾醇(β-sitosterol,Ⅵ)，胡萝卜甙(daucosrerol,Ⅶ)，异落叶松树脂醇(isolarisiresinol,Ⅴ)，β-谷甾醇(β-sitosterol,Ⅵ)，胡罗卜苷(aesculetin,Ⅶ)，异落叶松树脂醇(isolarisiresinol,Ⅴ)，β-谷甾醇(β-sitosterol,Ⅵ)，胡萝卜(daucosrerol,Ⅶ)，异鼠李素-3-芸香糖苷(nicotiflorin,Ⅷ)，水仙苷(narcissin,Ⅸ)，芦丁(rutin,Ⅹ)。以上化合物除东莨菪内酯、β-谷甾醇外均为首次从该植物得到。
, 百拇医药
1 仪器与试剂
熔点用Boetius显微熔点测定仪测定，温度计未校正。红外用Perkin-Elmer 683型红外光谱仪测定，紫外用Shimadzu UV-240型紫外光谱仪测定，质谱用JMS-DX 300型质谱仪测定，核磁用Bruker AM-500核磁共振仪测定。大孔树脂GDX-104型为天津试剂二厂产品；Sephadex LH-20为Pharmacia进口分装；柱层析及薄层层析硅胶为青岛海洋化工厂产品；试剂均为分析纯。
2 提取与分离
将黄毛耳草38 kg切碎，用95% EtOH回流提取两次，提取物用水10 L溶解，除去黑绿色不溶物，滤取底层的黄色沉淀为HC3部分；水液用Et2O萃取得乙醚提取物HC4部分；水液挥去Et2O后，通过大孔树脂柱，水洗液弃去，25% EtOH洗脱部分为HC1。95%EtOH洗脱部分为HC2。取HC1部分35 g，以450 g硅胶行减压柱层析，CHCl3-MeOH(99∶5～70∶30)梯度洗脱得到fr1～fr6。fr3通过Sephades LH-20处理，再经PTLC〔CHCl3-MeOH(9∶1〕得到Ⅰ。将HC2部分180 g拌硅藻土150 g，并以250 g硅藻土短柱层析，CHCl3-MeOH(96∶4)洗脱，得洗脱物35 g，此部分用250 g硅胶行VLC，CHCl3-MeOH(95∶5)洗脱得Frl,CHCl3-MeOH(90∶10)洗脱得Fr2和Fr3。Frl(5.8 g)用硅胶柱层析，CHCl3-Me2CO(9∶1)洗脱得化合物Ⅱ和Ⅲ。Fr2先用聚酰胺处理，50%EtOH洗脱部分再用硅胶柱层析，EtOAc-MeOH(96∶4)洗脱得化合物Ⅳ和Ⅴ。HC4用硅胶低压柱层析分离，CHCl3、CHCl3-MeOH梯度洗脱，CHCl3-MeOH(98∶2)洗脱得到化合物Ⅵ，CHCl3-MeOH(85∶15)洗脱得到化合物Ⅶ，HC3部分500 g，以聚酰胺柱层析，以CHCl3-MeOH(85∶15)洗脱，第3份以乙醇结晶得化合物Ⅷ，第4和5份合并后以乙醇结晶得到化合物Ⅸ，7和8份合并，甲醇结晶得化合物Ⅹ。
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3 鉴定
化合物Ⅰ：白色结晶，TLC上溴酚蓝试剂显黄色。UVλmaxnm：219，244，300(sh),329(MeOH)，EIMS m/z(%):180(55，M+)，163(M+-OH)，162(39)，145(17)，136(40)，135(34)，134(42)，117(17)，89(40)，77(11)。TLC与咖啡酸的Rf值相同，因而确定该化合物Ⅰ为咖啡酸。
化合物Ⅱ：无色针晶，mp 200℃～201℃，紫外灯下显亮蓝色荧光。UV、IR、EIMS数据与文献〔7〕的东莨菪内酯一致。
化合物Ⅲ：棕红色针晶，mp 210℃～215℃，UV、IR、EIMS数据与文献〔8〕报道的2，6-二甲氧基对苯醌一致。
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化合物Ⅳ：黄色针晶，mp 265℃～268℃，紫外灯下呈蓝色荧光。UVλEtOHmax nm：229，256，299，351。IRνKBrmax cm-1：3 205，1 666，1 600，1 566，1 400，1 281，1 147，940，880，820，590。EIMS m/z(%)：178(100)，150(65)，132(2)，121(4)，104(3)，94(5)。根据以上数据确定Ⅳ为七叶内酯。
化合物Ⅴ：白色粉末，mp 94℃～96℃。UV、EI-MS，1H、13CNMR数据与文献〔9〕报道的异落叶松树脂醇一致。
化合物Ⅵ：具有光泽的片状结晶，mp 137℃～139℃。IR、EIMS、TLC与β-谷甾醇一致，因此确定Ⅵ为β-谷甾醇。
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化合物Ⅶ：白色粉末，mp 300℃～320℃。TLC、IR与胡萝卜苷一致，因此确定化合物Ⅶ为胡萝卜苷。
化合物Ⅷ：黄色针晶，mp 184℃～186℃，盐酸-Mg粉反应显红色。酸水解TLC检识，含葡萄糖，鼠李糖。UVλmax nm：265，300(sh),350(MeOH)；273，316(sh)，325，400(MeONa,不衰减)；272，305，351，395(AlCl3)；274，302，347，395(AlCl3/HCl)；273，309，387(NaOAc)；266，300(sh),352(NaOAc/H3BO3)。IRνKBrmax cm-1：3 418，2 929，1 657，1 607，1 504，1 359，1 180，1 084。EIMS m/z(%):286(100,aglycone),258(10),257(9),229(9),153(6),134(2),121(15),129(8)。1HNMR(DMSO-d6)δ：12.53，7.97(d,8.7,C2′，6′-H)，6.87(d,8.7,C3′，5′-H)，6.40(s,C8-H)，6.19(d,1.3,C6-H)，5.30(d,7.4,C1″-H)，5.24(br,C1-H)。13CNMR(DMSO-d6)δ：156.9(C2)，133.3(C3)，177.9(C4)，161.3(C5)，98.8(C6)，164.2(C7)，93.8(C8)，156.9(C9)，104.0(C10)，120.9(C1′)，131.0(C2′，6′)，115.2(C3′，5′)，159.9(C4′)，101.4(C1″)，74.2(C2″)，75.8(C3″)，70.0(C4″)，76.4(C5″)，66.9(C6″)，100.8(C1)，70.4(C2)，70.6(C3)，71.4(C4)，68.3(C5)，17.8(C6)。根据以上数据确定化合物Ⅷ为异鼠李素-3-芸香糖苷。
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化合物Ⅸ：黄色针晶，mp 167℃～170℃，盐酸-Mg粉反应显红色。酸水解TLC检识，含葡萄糖，鼠李糖。UVλmax nm：254，266(sh)，304(sh)，356(MeOH)；269，325，415(NaOAc，不衰减)，267，302，367(sh)，404(AlCl3)；265，274(sh)，300，360，400(AlCl3/HCl)；273，322，404(NaOAc)；253，267(sh)，305(sh)，359(NaOAc/H3BO3)。IRνKBrmaxcm-1：3 427，1 655，1 607，1 508，1 356，1 205，1 065。EIMS m/z(%)：316(100，aglycone),301(7),287(7),273(3),245(5),217(3),157(3),151(20),106(45)。1HNMR(DMSO-d6)δ：12.5(s,C5-OH)，7.84(d,2.0,C2′-H)，7.53(dd,2.0,8.7,C6′-H)，6.91(d,8.7,C5′-H)，6.43(d,2.0,C8-H)，6.20(d,2.0,C6-H)，5.42(d,6.7,C1″-H)，5.21(br,C1-H)，3.85(3 H，s，-OCH3)，3.06～3.73(11 H,m)，0.99(3 H,d,6.1,C6-H)。13 CNMR(DMSO-d6)δ：156.5(C2，9)，133.1(C3)，177.4(C4)，161.3(C5)，98.8(C6)，164.2(C7)，93.8(C8)，104.19(C10)，122.3(C1′)，115.3(C2′)，146.9(C3′)，149.4(C4′)，121.1(C6′)，101.2(C1″)，74.3(C2″)，76.0(C3″)，70.1(C4″)，76.6(C5″)，66.9(C6″)，100.9(C1)，70.4(C2)，70.6(C5)，66.9(C6″)，100.9(C1)，70.4(C2)，70.6(C3)，71.8(C4)，68.3(C5)，17.8(C6)，55.7(OCH3)。以上数据确定化合物Ⅸ为水仙苷。
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化合物Ⅹ：黄色针晶，mp188 ℃～190℃。盐酸-Mg粉反应显红色。TLC、IR与芦丁对照品一致，确定为芦丁。
致谢：光谱由本所仪器分析室测定。药材由安徽芜湖中医学校刘晓龙同志采集鉴定。
*Address:Peng Jiangnan,Instiute of Radiation Medicine ,Academy Medical Sciences ,Beijing
参 考 文 献
[1] 中国医学科学院药物研究所，等编.新华本草纲要.第2卷.上海：上海科技出版社，1991：442
[2] 彭江南，等.中草药，1997，28(10)：581
[3] 彭江南，等.中草药，1997，28(增刊)：45
, http://www.100md.com
[4] Peng Jiangnan, et al.Chin Chem Letts,1995,6:965
[5] Peng Jiangnan, et al.Phytochemistry,1997,46(6):1119
[6] 彭江南，等.药学学报，1997，32(12)：908
[7] Shafizadeh F, et al.Phytochemistry,1970,9:1311
[8] Nomura M, et al.Phytochemistry,1981,20(5):1097
[9] Fonseea S F, et al.Phytochemistry,1978,17(3):499
(1998-03-23收稿), 百拇医药
单位：彭江南 军事医学科学院放射医学研究所(北京100850)；冯孝章 梁晓天中国医学科学院药物研究所 中国协和医科大学
关键词：耳草属；黄花耳草；七叶内酯；异落叶松树脂醇；水仙苷
耳草属植物的化学研究 摘 要 从中药黄毛耳草Hedyotis chrysotricha中分离并鉴定出10个化合物，经鉴定为：咖啡酸(caffeic acid,Ⅰ)，东莨菪内酯(scopoletin，Ⅱ)，2，6-二甲氧基对苯醌(2，6-dimethoxy-1，4-benzoquinone,Ⅲ)，七叶内酯(aesculetin,Ⅳ)，异落叶松树脂醇(isolarisiresinol, Ⅴ)，β-谷甾醇(β-sitosterol, Ⅵ)，胡萝卜苷(daucosterol,Ⅶ)，异鼠李素-3-芸香糖苷(nicotiflorin,Ⅷ)，水仙苷(narcissin,Ⅸ)和芦丁(rutin,Ⅹ)。除Ⅱ和Ⅵ外均为首次从该植物中分得。
, 百拇医药
茜草科耳草属植物在我国有50多种，其中20多种药用〔1〕，大多为清热解毒类中药，用于治疗感冒，多种炎症及癌症。而对该属植物化学成分的报道较少，因此我们对该属3种药用植物硬毛耳草、牛白藤、黄毛耳草的化学成分进行了研究〔2～3〕。黄毛耳草Hedyotis chrysotricha的全草用作中药，又名石打穿，用于治疗病毒性肝炎、跌打损伤、小儿急性肾炎、风湿性关节炎、疮疔肿痛等疾病，民间用其全草治疗食道癌、肝癌、胃癌、腮腺癌，临床用于各种癌症〔1〕。前文报道从黄毛耳草中分离得到环烯醚萜和生物碱类化合物〔4～6〕，本文报道从黄毛耳草中分离鉴定的其它10个化合物：咖啡酸(caffeic acid,Ⅰ)，东莨菪内酯(scopoletin,Ⅱ)，2，6-二甲氧基对苯醌(2，6-dimethoxy-1，4-benzoquinone,Ⅲ)，七叶内酯(aesculetin,Ⅳ)，异落叶松树脂醇(isolarisiresinol,Ⅴ)，β-谷甾醇(β-sitosterol,Ⅵ)，胡萝卜甙(daucosrerol,Ⅶ)，异落叶松树脂醇(isolarisiresinol,Ⅴ)，β-谷甾醇(β-sitosterol,Ⅵ)，胡罗卜苷(aesculetin,Ⅶ)，异落叶松树脂醇(isolarisiresinol,Ⅴ)，β-谷甾醇(β-sitosterol,Ⅵ)，胡萝卜(daucosrerol,Ⅶ)，异鼠李素-3-芸香糖苷(nicotiflorin,Ⅷ)，水仙苷(narcissin,Ⅸ)，芦丁(rutin,Ⅹ)。以上化合物除东莨菪内酯、β-谷甾醇外均为首次从该植物得到。
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1 仪器与试剂
熔点用Boetius显微熔点测定仪测定，温度计未校正。红外用Perkin-Elmer 683型红外光谱仪测定，紫外用Shimadzu UV-240型紫外光谱仪测定，质谱用JMS-DX 300型质谱仪测定，核磁用Bruker AM-500核磁共振仪测定。大孔树脂GDX-104型为天津试剂二厂产品；Sephadex LH-20为Pharmacia进口分装；柱层析及薄层层析硅胶为青岛海洋化工厂产品；试剂均为分析纯。
2 提取与分离
将黄毛耳草38 kg切碎，用95% EtOH回流提取两次，提取物用水10 L溶解，除去黑绿色不溶物，滤取底层的黄色沉淀为HC3部分；水液用Et2O萃取得乙醚提取物HC4部分；水液挥去Et2O后，通过大孔树脂柱，水洗液弃去，25% EtOH洗脱部分为HC1。95%EtOH洗脱部分为HC2。取HC1部分35 g，以450 g硅胶行减压柱层析，CHCl3-MeOH(99∶5～70∶30)梯度洗脱得到fr1～fr6。fr3通过Sephades LH-20处理，再经PTLC〔CHCl3-MeOH(9∶1〕得到Ⅰ。将HC2部分180 g拌硅藻土150 g，并以250 g硅藻土短柱层析，CHCl3-MeOH(96∶4)洗脱，得洗脱物35 g，此部分用250 g硅胶行VLC，CHCl3-MeOH(95∶5)洗脱得Frl,CHCl3-MeOH(90∶10)洗脱得Fr2和Fr3。Frl(5.8 g)用硅胶柱层析，CHCl3-Me2CO(9∶1)洗脱得化合物Ⅱ和Ⅲ。Fr2先用聚酰胺处理，50%EtOH洗脱部分再用硅胶柱层析，EtOAc-MeOH(96∶4)洗脱得化合物Ⅳ和Ⅴ。HC4用硅胶低压柱层析分离，CHCl3、CHCl3-MeOH梯度洗脱，CHCl3-MeOH(98∶2)洗脱得到化合物Ⅵ，CHCl3-MeOH(85∶15)洗脱得到化合物Ⅶ，HC3部分500 g，以聚酰胺柱层析，以CHCl3-MeOH(85∶15)洗脱，第3份以乙醇结晶得化合物Ⅷ，第4和5份合并后以乙醇结晶得到化合物Ⅸ，7和8份合并，甲醇结晶得化合物Ⅹ。
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3 鉴定
化合物Ⅰ：白色结晶，TLC上溴酚蓝试剂显黄色。UVλmaxnm：219，244，300(sh),329(MeOH)，EIMS m/z(%):180(55，M+)，163(M+-OH)，162(39)，145(17)，136(40)，135(34)，134(42)，117(17)，89(40)，77(11)。TLC与咖啡酸的Rf值相同，因而确定该化合物Ⅰ为咖啡酸。
化合物Ⅱ：无色针晶，mp 200℃～201℃，紫外灯下显亮蓝色荧光。UV、IR、EIMS数据与文献〔7〕的东莨菪内酯一致。
化合物Ⅲ：棕红色针晶，mp 210℃～215℃，UV、IR、EIMS数据与文献〔8〕报道的2，6-二甲氧基对苯醌一致。
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化合物Ⅳ：黄色针晶，mp 265℃～268℃，紫外灯下呈蓝色荧光。UVλEtOHmax nm：229，256，299，351。IRνKBrmax cm-1：3 205，1 666，1 600，1 566，1 400，1 281，1 147，940，880，820，590。EIMS m/z(%)：178(100)，150(65)，132(2)，121(4)，104(3)，94(5)。根据以上数据确定Ⅳ为七叶内酯。
化合物Ⅴ：白色粉末，mp 94℃～96℃。UV、EI-MS，1H、13CNMR数据与文献〔9〕报道的异落叶松树脂醇一致。
化合物Ⅵ：具有光泽的片状结晶，mp 137℃～139℃。IR、EIMS、TLC与β-谷甾醇一致，因此确定Ⅵ为β-谷甾醇。
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化合物Ⅶ：白色粉末，mp 300℃～320℃。TLC、IR与胡萝卜苷一致，因此确定化合物Ⅶ为胡萝卜苷。
化合物Ⅷ：黄色针晶，mp 184℃～186℃，盐酸-Mg粉反应显红色。酸水解TLC检识，含葡萄糖，鼠李糖。UVλmax nm：265，300(sh),350(MeOH)；273，316(sh)，325，400(MeONa,不衰减)；272，305，351，395(AlCl3)；274，302，347，395(AlCl3/HCl)；273，309，387(NaOAc)；266，300(sh),352(NaOAc/H3BO3)。IRνKBrmax cm-1：3 418，2 929，1 657，1 607，1 504，1 359，1 180，1 084。EIMS m/z(%):286(100,aglycone),258(10),257(9),229(9),153(6),134(2),121(15),129(8)。1HNMR(DMSO-d6)δ：12.53，7.97(d,8.7,C2′，6′-H)，6.87(d,8.7,C3′，5′-H)，6.40(s,C8-H)，6.19(d,1.3,C6-H)，5.30(d,7.4,C1″-H)，5.24(br,C1-H)。13CNMR(DMSO-d6)δ：156.9(C2)，133.3(C3)，177.9(C4)，161.3(C5)，98.8(C6)，164.2(C7)，93.8(C8)，156.9(C9)，104.0(C10)，120.9(C1′)，131.0(C2′，6′)，115.2(C3′，5′)，159.9(C4′)，101.4(C1″)，74.2(C2″)，75.8(C3″)，70.0(C4″)，76.4(C5″)，66.9(C6″)，100.8(C1)，70.4(C2)，70.6(C3)，71.4(C4)，68.3(C5)，17.8(C6)。根据以上数据确定化合物Ⅷ为异鼠李素-3-芸香糖苷。
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化合物Ⅸ：黄色针晶，mp 167℃～170℃，盐酸-Mg粉反应显红色。酸水解TLC检识，含葡萄糖，鼠李糖。UVλmax nm：254，266(sh)，304(sh)，356(MeOH)；269，325，415(NaOAc，不衰减)，267，302，367(sh)，404(AlCl3)；265，274(sh)，300，360，400(AlCl3/HCl)；273，322，404(NaOAc)；253，267(sh)，305(sh)，359(NaOAc/H3BO3)。IRνKBrmaxcm-1：3 427，1 655，1 607，1 508，1 356，1 205，1 065。EIMS m/z(%)：316(100，aglycone),301(7),287(7),273(3),245(5),217(3),157(3),151(20),106(45)。1HNMR(DMSO-d6)δ：12.5(s,C5-OH)，7.84(d,2.0,C2′-H)，7.53(dd,2.0,8.7,C6′-H)，6.91(d,8.7,C5′-H)，6.43(d,2.0,C8-H)，6.20(d,2.0,C6-H)，5.42(d,6.7,C1″-H)，5.21(br,C1-H)，3.85(3 H，s，-OCH3)，3.06～3.73(11 H,m)，0.99(3 H,d,6.1,C6-H)。13 CNMR(DMSO-d6)δ：156.5(C2，9)，133.1(C3)，177.4(C4)，161.3(C5)，98.8(C6)，164.2(C7)，93.8(C8)，104.19(C10)，122.3(C1′)，115.3(C2′)，146.9(C3′)，149.4(C4′)，121.1(C6′)，101.2(C1″)，74.3(C2″)，76.0(C3″)，70.1(C4″)，76.6(C5″)，66.9(C6″)，100.9(C1)，70.4(C2)，70.6(C5)，66.9(C6″)，100.9(C1)，70.4(C2)，70.6(C3)，71.8(C4)，68.3(C5)，17.8(C6)，55.7(OCH3)。以上数据确定化合物Ⅸ为水仙苷。
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化合物Ⅹ：黄色针晶，mp188 ℃～190℃。盐酸-Mg粉反应显红色。TLC、IR与芦丁对照品一致，确定为芦丁。
致谢：光谱由本所仪器分析室测定。药材由安徽芜湖中医学校刘晓龙同志采集鉴定。
*Address:Peng Jiangnan,Instiute of Radiation Medicine ,Academy Medical Sciences ,Beijing
参 考 文 献
[1] 中国医学科学院药物研究所，等编.新华本草纲要.第2卷.上海：上海科技出版社，1991：442
[2] 彭江南，等.中草药，1997，28(10)：581
[3] 彭江南，等.中草药，1997，28(增刊)：45
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[4] Peng Jiangnan, et al.Chin Chem Letts,1995,6:965
[5] Peng Jiangnan, et al.Phytochemistry,1997,46(6):1119
[6] 彭江南，等.药学学报，1997，32(12)：908
[7] Shafizadeh F, et al.Phytochemistry,1970,9:1311
[8] Nomura M, et al.Phytochemistry,1981,20(5):1097
[9] Fonseea S F, et al.Phytochemistry,1978,17(3):499
(1998-03-23收稿), 百拇医药