灵芝孢子对肿瘤细胞端粒酶的作用
作者：江瑞华 李鲁伟 韩世温
单位：青岛市市立医院检验科青岛 266011
关键词：端粒；灵芝；孢子；肿瘤细胞,培养的
齐鲁医学杂志990306 摘要：①目的：观察灵芝孢子对肿瘤细胞端粒酶的作用。②方法 培养肿瘤细胞，加入灵芝孢子，采用比较聚合酶链反应-酶免法，检测肿瘤细胞端粒酶的活性，并与对照组进行比较。③结果 灵芝孢子组肿瘤细胞端粒酶活性较对照组明显下降(t=2.37～4.21，P<0.05，0.01)。④结论 灵芝孢子可通过抑制肿瘤细胞端粒酶活性而抑制肿瘤细胞的生长。
中国图书馆分类法分类号：R73-35+4
INHIBITION TO TELOMERASE OF TUMOR CELL BY SPORE OF GANDERMA LUCIDUM
, http://www.100md.com
Jiang Ruihua, Li Luwei, Han Shiwen Department of Laboratory Medicine, Qingdao Municipal Hospital, Qingdao 266011
ABSTRACT Objective To investigate the inhibition effect of ganderma lucidum spore on telomerase of tumor cell.Methods The culture of tumor cell was filled in Ganderma lucidum spore. The telomerase activity of tumor cells was inspected.Results Spore of ganderma lucidum could inhibit the activity of telomerase. Conclusions By inhibition the activity of telomerase, ganderma lucidum spore can inhibit the growth of tumor cell.
, 百拇医药
KEY WORDS：telomere; ganderma lucidum; spors; tumor cells, cultured
近年来发现，端粒长度随细胞分裂次数增多而缩短，正常细胞分裂多次后，端粒缩短达到一危机点，细胞停止分裂，随即衰老、死亡。少数细胞逃逸危机点，激活端粒酶，从而永生和恶变。因此，抑制端粒酶的活性，可有效地抑制细胞的生长。本文观察了灵芝孢子在体外对肿瘤细胞端粒酶活性的影响，现将结果报告如下。
1 材料和方法
1.1 材料来源
人肝癌细胞(SMMC-7721)、人肺癌细胞(H460)、人白血病细胞(K562)、Lewis肺癌细胞株，肺成纤维母细胞(IMR90)均由上海长海医院提供。灵芝孢子由我院中药房提供。
1.2 细胞培养
, http://www.100md.com
将上述细胞加入RPMI 1640培养液，调整细胞数为2×109/L，分成2份，每份2mL.1份加入0.1mL生理盐水作为阴性对照，另1份加入40g/L的灵芝孢子0.1mL，在37℃，体积分数为0.05的CO2条件下培养6d.
1.3 端粒酶提取
调整细胞数为1×109/L，4℃，以1 500r/min离心5min，弃去上清液，PBS清洗，离心(1 500r/min，5min)，弃上清液，加250μL裂解液，冰浴30min，40℃，15 000r/min离心15min，取上清液移于焦碳酸二乙酯处理过的试管中，备用。
1.4 端粒酶活性的检测
活性检测采用比较聚合酶链反应-酶免法(PCR-ELISA)。试剂由德国宝灵曼公司提供。使用酶标仪测定450，690nm处吸光度(A)，端粒酶活性与吸光度呈正比。
, 百拇医药
2 结果
灵芝孢子对各种肿瘤细胞端粒酶活性作用结果见表1.本文结果表明，灵芝孢子组SMMC-7721，H460，K562，Lewis肺癌细胞株端粒酶活性均较对照组降低，差异有极显著意义(t=2.37～4.21,P<0.05,0.01)，IMR90端粒酶活性与对照组比较无明显差异(t=0.36,P>0.05)。
表1 灵芝孢子对肿瘤细胞端粒酶活性的影响(A，
±s) 组 别
n
SMMC-7721
H460
K562
, http://www.100md.com Lewis
IMR90
对 照 组
6
0.959±0.090
0.837±0.082
0.765±0.101
0.874±0.062
0.061±0.043
灵芝孢子组
6
0.452±0.071*
, http://www.100md.com
0.375±0.091*
0.259±0.073*
0.213±0.104*
0.059±0.035
与对照组比较,*t=2.37～4.21,P<0.05,0.013 讨论
端粒及端粒酶是生命科学研究的热点之一。端粒酶是核糖核酸和蛋白质的复合物，是一种特殊的DNA聚合酶，利用自身的一段RNA作模板，合成端粒的DNA到染色体末端。端粒酶被激活，细胞将永生和恶变〔2〕。本文结果显示，除IMR90外，其他肿瘤细胞有较强的端粒酶表达。灵芝孢子可明显抑制肿瘤细胞端粒酶的活性，而IMR90端粒酶表达阴性，加入灵芝孢子活性无变化。由此可见，灵芝孢子抗肿瘤作用是通过抑制端粒酶的活性来实现的。
, http://www.100md.com
文献报道，在肿瘤细胞系中可检测出端粒酶的活性，而普通的体细胞内没有端粒酶的表达〔3〕。体细胞发生恶变可能是由于端粒酶的激活所致，因此，抑制端粒酶的活性，可有效地抑制肿瘤细胞的生长。端粒酶作为肿瘤标志物和治疗靶点日益受到重视，灵芝孢子对端粒酶具有抑制作用，为抗肿瘤中药的临床应用提供了新的理论依据。
参考文献
1 戴德顺.正常人红细胞对多种体外培养的肿瘤细胞的黏附作用.见：郭 峰，郭建主编.肿瘤红细胞免疫学研究.济南：山东大学出版社，1997.24～25
2 Feng J, Funk WD, Wang S, et al. Telomerase and telomere in tumor cell. Science， 1995,267:1 455
3 Tahara H, Nakanishi T, Kitamoto M, et al. Telomerase activity in human liver tissues: comparison between chronic liver disease and hepatocellular carcinomas. Cancer Res， 1995, 55:2734
收稿1999-02-02
修回1999-07-10, 百拇医药
单位：青岛市市立医院检验科青岛 266011
关键词：端粒；灵芝；孢子；肿瘤细胞,培养的
齐鲁医学杂志990306 摘要：①目的：观察灵芝孢子对肿瘤细胞端粒酶的作用。②方法 培养肿瘤细胞，加入灵芝孢子，采用比较聚合酶链反应-酶免法，检测肿瘤细胞端粒酶的活性，并与对照组进行比较。③结果 灵芝孢子组肿瘤细胞端粒酶活性较对照组明显下降(t=2.37～4.21，P<0.05，0.01)。④结论 灵芝孢子可通过抑制肿瘤细胞端粒酶活性而抑制肿瘤细胞的生长。
中国图书馆分类法分类号：R73-35+4
INHIBITION TO TELOMERASE OF TUMOR CELL BY SPORE OF GANDERMA LUCIDUM
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Jiang Ruihua, Li Luwei, Han Shiwen Department of Laboratory Medicine, Qingdao Municipal Hospital, Qingdao 266011
ABSTRACT Objective To investigate the inhibition effect of ganderma lucidum spore on telomerase of tumor cell.Methods The culture of tumor cell was filled in Ganderma lucidum spore. The telomerase activity of tumor cells was inspected.Results Spore of ganderma lucidum could inhibit the activity of telomerase. Conclusions By inhibition the activity of telomerase, ganderma lucidum spore can inhibit the growth of tumor cell.
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KEY WORDS：telomere; ganderma lucidum; spors; tumor cells, cultured
近年来发现，端粒长度随细胞分裂次数增多而缩短，正常细胞分裂多次后，端粒缩短达到一危机点，细胞停止分裂，随即衰老、死亡。少数细胞逃逸危机点，激活端粒酶，从而永生和恶变。因此，抑制端粒酶的活性，可有效地抑制细胞的生长。本文观察了灵芝孢子在体外对肿瘤细胞端粒酶活性的影响，现将结果报告如下。
1 材料和方法
1.1 材料来源
人肝癌细胞(SMMC-7721)、人肺癌细胞(H460)、人白血病细胞(K562)、Lewis肺癌细胞株，肺成纤维母细胞(IMR90)均由上海长海医院提供。灵芝孢子由我院中药房提供。
1.2 细胞培养
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将上述细胞加入RPMI 1640培养液，调整细胞数为2×109/L，分成2份，每份2mL.1份加入0.1mL生理盐水作为阴性对照，另1份加入40g/L的灵芝孢子0.1mL，在37℃，体积分数为0.05的CO2条件下培养6d.
1.3 端粒酶提取
调整细胞数为1×109/L，4℃，以1 500r/min离心5min，弃去上清液，PBS清洗，离心(1 500r/min，5min)，弃上清液，加250μL裂解液，冰浴30min，40℃，15 000r/min离心15min，取上清液移于焦碳酸二乙酯处理过的试管中，备用。
1.4 端粒酶活性的检测
活性检测采用比较聚合酶链反应-酶免法(PCR-ELISA)。试剂由德国宝灵曼公司提供。使用酶标仪测定450，690nm处吸光度(A)，端粒酶活性与吸光度呈正比。
, 百拇医药
2 结果
灵芝孢子对各种肿瘤细胞端粒酶活性作用结果见表1.本文结果表明，灵芝孢子组SMMC-7721，H460，K562，Lewis肺癌细胞株端粒酶活性均较对照组降低，差异有极显著意义(t=2.37～4.21,P<0.05,0.01)，IMR90端粒酶活性与对照组比较无明显差异(t=0.36,P>0.05)。
表1 灵芝孢子对肿瘤细胞端粒酶活性的影响(A，
±s) 组 别n
SMMC-7721
H460
K562
, http://www.100md.com Lewis
IMR90
对 照 组
6
0.959±0.090
0.837±0.082
0.765±0.101
0.874±0.062
0.061±0.043
灵芝孢子组
6
0.452±0.071*
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0.375±0.091*
0.259±0.073*
0.213±0.104*
0.059±0.035
与对照组比较,*t=2.37～4.21,P<0.05,0.013 讨论
端粒及端粒酶是生命科学研究的热点之一。端粒酶是核糖核酸和蛋白质的复合物，是一种特殊的DNA聚合酶，利用自身的一段RNA作模板，合成端粒的DNA到染色体末端。端粒酶被激活，细胞将永生和恶变〔2〕。本文结果显示，除IMR90外，其他肿瘤细胞有较强的端粒酶表达。灵芝孢子可明显抑制肿瘤细胞端粒酶的活性，而IMR90端粒酶表达阴性，加入灵芝孢子活性无变化。由此可见，灵芝孢子抗肿瘤作用是通过抑制端粒酶的活性来实现的。
, http://www.100md.com
文献报道，在肿瘤细胞系中可检测出端粒酶的活性，而普通的体细胞内没有端粒酶的表达〔3〕。体细胞发生恶变可能是由于端粒酶的激活所致，因此，抑制端粒酶的活性，可有效地抑制肿瘤细胞的生长。端粒酶作为肿瘤标志物和治疗靶点日益受到重视，灵芝孢子对端粒酶具有抑制作用，为抗肿瘤中药的临床应用提供了新的理论依据。
参考文献
1 戴德顺.正常人红细胞对多种体外培养的肿瘤细胞的黏附作用.见：郭 峰，郭建主编.肿瘤红细胞免疫学研究.济南：山东大学出版社，1997.24～25
2 Feng J, Funk WD, Wang S, et al. Telomerase and telomere in tumor cell. Science， 1995,267:1 455
3 Tahara H, Nakanishi T, Kitamoto M, et al. Telomerase activity in human liver tissues: comparison between chronic liver disease and hepatocellular carcinomas. Cancer Res， 1995, 55:2734
收稿1999-02-02
修回1999-07-10, 百拇医药