合欢皮皂甙对S180实体瘤荷瘤小鼠抑瘤作用的研究
作者：韩 莉 崔景荣 李 敏 叶 颖 刘 倩 吴 军
单位：韩 莉(湖北三峡学院医学免疫学教研室(宜昌443003))；崔景荣 李 敏 叶 颖 刘 倩 吴 军(北京医科大学国家天然及仿生药物研究重点实验室)
关键词：合欢皮皂甙；S180肉瘤；抑瘤率；免疫功能；
合欢皮皂甙对S180实体瘤荷瘤小鼠抑瘤作用的研究
摘 要 目的：探讨合欢皮皂甙对肿瘤的抑制作用。方法：以S180实体瘤荷瘤鼠为对象，用不同剂量的合欢皮皂和合欢皮皂甙与环磷酰胺对荷瘤鼠行腹腔注射。结果：3组不同剂量的合欢皮皂甙及合欢皮皂甙加环磷酰胺组的抑瘤率分别为25.4%，35.1%，40.5%，77.4%呈明显显效关系。结论：合欢皮皂甙有一定抑瘤作用，与环磷酰胺合用效果更佳。
Research on Tumor Inhibition of Albizzia Saponins in Mouse Model of S180
, 百拇医药
Han li Cui Jinrong Le Min,et al
Department Microbiology,Hubei Three Gorges University Medical College,Yichang 443003
Abstract Objective:Studied the efficiency of cortex of Albizzia to tumor.Method:The experiments of the S180 tumor mice with the different dosage of Albizzia Saponinis or cooperated with cyclophosphamidecy(CY) inhibited S180 tumor growth in mouse.Result:The results showed that the inhibition rates were 25.4%，35.1%，40.5%，77.4%,with the increase of the saponinis dosage.Conclusion:Albizzia Saponinis have the efficiency of inhibiting tumor,especially cooperated with CY.
, 百拇医药
Key Words albizia sponins;sarcoma S180;Inhibition Rate;Immune Function
合欢皮(Albizia,Julibrissia Druazz)为豆科含羞草亚科植物，传统医学多用于解郁安裨，活血消肿[1]，现代药理学研究表明，合欢皮具有抗生育抗肿瘤作用，但国内目前相关报道尚不多见。因此，本文以S180实体型荷瘤鼠为模型，研究了合欢皮皂甙与环磷酰胺合并用药的抑瘤作用，并对其可能机制进行了初步探讨。
1 材料与方法
1.1 动物及分组
昆明鼠，雌雄各半，6～8周龄，体重18～22g，由北京医科大学实验动物部提供。将小鼠随机分为7组，每组12只，其中6组于右侧腋部皮下注射1×107/mlS180瘤细胞0.2ml，荷瘤对照组于d2～d9腹腔注射生理盐水0.2ml，5个剂量的合欢皮皂甙及环磷酰胺(20mg/kg环磷酰胺，0.7mg/kg皂甙，1.0mg/kg皂甙，1.8mg/kg皂甙，0.7mg/kg皂甙+20mg/kg环磷酰胺)于d2～d9分别腹腔注射。6组小鼠于d10取瘤块称重并测定脾，胸腺指数，脾细胞增殖能力及腹腔巨噬细胞吞噬能力。另1组为正常对照。
, 百拇医药
1.2 细胞株
瘤细胞株购自北京市肿瘤研究所，由本室经小鼠腹腔传代保存。
1.3 药品及试剂
合欢皮皂甙由北京医科大学药学院植化教研室提供，ConA,LPS,MTT购自Sigma公司。RPMI1640为GIBCO产品，环磷酰胺(cyclophosphamidecy，CY)为上海第十二制药厂产品，异丙醇由北京化学试剂厂产品。
1.4 脾淋巴细胞增殖反应
比色法：常规制备脾细胞，浓度为5×106/ml，加入96孔板，每孔180μl，然后加入ConA，LPS，使其终浓度分别为2ug/ml,30μl/ml，同时设立ConA,LPS,1640培养液对照，分别测定脾细胞自发增殖，脾细胞活化T，B细胞增殖状态，每处理了复孔，于37℃，5%CO2箱中培养48小时，每孔加入5mg/ml MTT20μl，培养4小时后离心，弃去上清，自然干燥，酸性异丙醇溶解，酶标仪测OD值。
, http://www.100md.com
1.5 小鼠腹腔巨噬细胞吞噬百分率测定
(参照张忆雄等方法[2])。
2 结果
不同剂量合欢皮皂甙对肉瘤S180实体型小鼠肿瘤生长的影响(表1)。合欢皮皂甙与环磷酰胺合并用药对S180实体型小鼠肿瘤生长的影响(表2)。不同剂量的合欢皮皂甙以及与环磷酰胺合并用药对荷瘤鼠免疫器官的影响(表3)。不同剂量的合欢皮皂甙以及与环磷酰胺合并用药对荷瘤鼠淋巴细胞增殖反应以及腹腔巨噬细胞吞噬功能的影响(表4)。
表1 合欢皮皂甙S180实体瘤小鼠肿瘤生长的影响
组 别
药物剂量(mg/kg)
动物只数
, 百拇医药
瘤重(g)(
±s)
药抑瘤率(%)
给药前
给药后
盐水对照
环磷酰胺
合欢皮皂甙
合欢皮皂甙
合欢皮皂甙
-
20
, http://www.100md.com
0.7
1.0
1.8
12
12
12
12
12
12
12
12
12
12
1.969±0.530
, http://www.100md.com
0.641±0.167**
1.468±0.515*
1.278±0.460**
1.171±0.408**
-
67.4
25.4
35.1
40.5
注：与盐水对照组比较*P<0.05,**P<0.01
表2 合欢皮皂甙与环磷酰胺合并用药对S180荷瘤鼠肿瘤生长的影响
, http://www.100md.com
组 别
药物剂量(mg/kg)
动物只数
瘤重(g)(±s)
药抑瘤率(%)
给药前
给药后
盐水对照
环磷酰胺
合欢皮皂甙
, 百拇医药
合欢皮皂甙+CY
-
20
0.7
0.7+20
12
12
12
12
12
12
12
12
, http://www.100md.com 1.969±0.530
0.641±0.167
1.468±0.515
0.434±0.208*
-
67.4
25.4
77.4
注：与环磷酰胺组比较*P<0.05
表3 合欢皮皂甙以及与环磷酰胺合并用药对荷瘤鼠免疫器官的影响
组 别
药物剂量
, http://www.100md.com
(mg/kg)
动物重量(g)
(±s)
脾指数(g/10g)
胸腺指数(g/10g)
正常鼠对照
盐水对照
环磷酰胺
合欢皮皂甙
合欢皮皂甙
, 百拇医药
合欢皮皂甙
合欢皮皂甙+CY
-
-
20
0.7
1.0
1.8
0.7+20
24.9±1.6
26.2±2.2
22.4±2.6
23.7±1.5
, http://www.100md.com
23.7±2.4
22.1±2.5
21.8±1.2
0.139±0.016
0.144±0.029
0.094±0.033**
0.133±0.037*
0.119±0.029*
0.128±0.029*
0.097±0.035**△
0.091±0.017
, 百拇医药
0.025±0.005
0.018±0.030**
0.051±0.010*
0.016±0.004*
0.014±0.003*
0.016±0.002**△
注：与盐水对照组比较*P>0.05,**P<0.01；与环磷酰胺组比较△P>0.05
表4 合欢皮皂甙以及与环磷酰胺合并用药对荷瘤鼠免疫功能的影响
组 别
药物剂量(mg/kg)
, 百拇医药
T细胞转化实验
(OD值)
B细胞转化实验(OD值)
吞噬指数(%)
正常对照
盐水对照
环磷酰胺+CY
合欢皮皂甙
合欢皮皂甙
合欢皮皂甙
合欢皮皂甙+CY
-
, 百拇医药 -
20
0.7
1.0
1.8
0.7+20
0.672±0.104
0.463±0.114
0.296±0.069**
0.426±0.071*
0.312±0.064*
0.177±0.068**
, http://www.100md.com
0.239±0.081**△
0.526±0.113
0.368±0.099
0.249±0.082**
0.313±0.087*
0.251±0.059***
0.207±0.052**
0.187±0.054**△
51.76±8.66
42.24±5.93
31.00±6.12*
, 百拇医药
40.07±8.00*
30.12±5.67**
22.36±5.01***
28.01±6.34**△
注：与盐水对照组比较***P<0.05,**P<0.01，*P>0.05；与环磷酰胺组比较△P>0.05
3 讨论
本实验结果表明合欢皮皂甙对S180肿瘤生长有明显抑制作用，而且量效关系良好，与环磷酰胺合用，能增强环磷酰胺的抑瘤作用。胸腺脾指数、T、B淋巴细胞转化试验表明，一定剂量的合欢皮皂甙能抑制机体免疫功能，但与环磷酰胺合用无协同降低机体免疫功能作用。说明合欢皮皂甙有望作为一种新的抗肿瘤药物出现，并能与环磷酰胺合用增强其抑瘤作用[3]，但合欢皮皂甙抗肿瘤的机制有待进一步研究。
参考文献
1 江苏新医学院编.中药大词典.上册，上海：上海人民出版社 1997：937
2 张忆雄，孙万邦，王燕妮，等.TF口服液对小鼠吞噬功能及淋巴细胞增殖反应堆影响.中国免疫学杂志 1997；13：24
3 邹坤，赵玉英，郑俊华，张如意.从合欢皮皂甙中获得三个细胞毒活性的三萜皂甙.北京医科大学学报 1997；29：290
(1999-01-29 收稿), 百拇医药
单位：韩 莉(湖北三峡学院医学免疫学教研室(宜昌443003))；崔景荣 李 敏 叶 颖 刘 倩 吴 军(北京医科大学国家天然及仿生药物研究重点实验室)
关键词：合欢皮皂甙；S180肉瘤；抑瘤率；免疫功能；
合欢皮皂甙对S180实体瘤荷瘤小鼠抑瘤作用的研究
摘 要 目的：探讨合欢皮皂甙对肿瘤的抑制作用。方法：以S180实体瘤荷瘤鼠为对象，用不同剂量的合欢皮皂和合欢皮皂甙与环磷酰胺对荷瘤鼠行腹腔注射。结果：3组不同剂量的合欢皮皂甙及合欢皮皂甙加环磷酰胺组的抑瘤率分别为25.4%，35.1%，40.5%，77.4%呈明显显效关系。结论：合欢皮皂甙有一定抑瘤作用，与环磷酰胺合用效果更佳。
Research on Tumor Inhibition of Albizzia Saponins in Mouse Model of S180
, 百拇医药
Han li Cui Jinrong Le Min,et al
Department Microbiology,Hubei Three Gorges University Medical College,Yichang 443003
Abstract Objective:Studied the efficiency of cortex of Albizzia to tumor.Method:The experiments of the S180 tumor mice with the different dosage of Albizzia Saponinis or cooperated with cyclophosphamidecy(CY) inhibited S180 tumor growth in mouse.Result:The results showed that the inhibition rates were 25.4%，35.1%，40.5%，77.4%,with the increase of the saponinis dosage.Conclusion:Albizzia Saponinis have the efficiency of inhibiting tumor,especially cooperated with CY.
, 百拇医药
Key Words albizia sponins;sarcoma S180;Inhibition Rate;Immune Function
合欢皮(Albizia,Julibrissia Druazz)为豆科含羞草亚科植物，传统医学多用于解郁安裨，活血消肿[1]，现代药理学研究表明，合欢皮具有抗生育抗肿瘤作用，但国内目前相关报道尚不多见。因此，本文以S180实体型荷瘤鼠为模型，研究了合欢皮皂甙与环磷酰胺合并用药的抑瘤作用，并对其可能机制进行了初步探讨。
1 材料与方法
1.1 动物及分组
昆明鼠，雌雄各半，6～8周龄，体重18～22g，由北京医科大学实验动物部提供。将小鼠随机分为7组，每组12只，其中6组于右侧腋部皮下注射1×107/mlS180瘤细胞0.2ml，荷瘤对照组于d2～d9腹腔注射生理盐水0.2ml，5个剂量的合欢皮皂甙及环磷酰胺(20mg/kg环磷酰胺，0.7mg/kg皂甙，1.0mg/kg皂甙，1.8mg/kg皂甙，0.7mg/kg皂甙+20mg/kg环磷酰胺)于d2～d9分别腹腔注射。6组小鼠于d10取瘤块称重并测定脾，胸腺指数，脾细胞增殖能力及腹腔巨噬细胞吞噬能力。另1组为正常对照。
, 百拇医药
1.2 细胞株
瘤细胞株购自北京市肿瘤研究所，由本室经小鼠腹腔传代保存。
1.3 药品及试剂
合欢皮皂甙由北京医科大学药学院植化教研室提供，ConA,LPS,MTT购自Sigma公司。RPMI1640为GIBCO产品，环磷酰胺(cyclophosphamidecy，CY)为上海第十二制药厂产品，异丙醇由北京化学试剂厂产品。
1.4 脾淋巴细胞增殖反应
比色法：常规制备脾细胞，浓度为5×106/ml，加入96孔板，每孔180μl，然后加入ConA，LPS，使其终浓度分别为2ug/ml,30μl/ml，同时设立ConA,LPS,1640培养液对照，分别测定脾细胞自发增殖，脾细胞活化T，B细胞增殖状态，每处理了复孔，于37℃，5%CO2箱中培养48小时，每孔加入5mg/ml MTT20μl，培养4小时后离心，弃去上清，自然干燥，酸性异丙醇溶解，酶标仪测OD值。
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1.5 小鼠腹腔巨噬细胞吞噬百分率测定
(参照张忆雄等方法[2])。
2 结果
不同剂量合欢皮皂甙对肉瘤S180实体型小鼠肿瘤生长的影响(表1)。合欢皮皂甙与环磷酰胺合并用药对S180实体型小鼠肿瘤生长的影响(表2)。不同剂量的合欢皮皂甙以及与环磷酰胺合并用药对荷瘤鼠免疫器官的影响(表3)。不同剂量的合欢皮皂甙以及与环磷酰胺合并用药对荷瘤鼠淋巴细胞增殖反应以及腹腔巨噬细胞吞噬功能的影响(表4)。
表1 合欢皮皂甙S180实体瘤小鼠肿瘤生长的影响
组 别
药物剂量(mg/kg)
动物只数
, 百拇医药
瘤重(g)(
±s)药抑瘤率(%)
给药前
给药后
盐水对照
环磷酰胺
合欢皮皂甙
合欢皮皂甙
合欢皮皂甙
-
20
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0.7
1.0
1.8
12
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12
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1.969±0.530
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0.641±0.167**
1.468±0.515*
1.278±0.460**
1.171±0.408**
-
67.4
25.4
35.1
40.5
注：与盐水对照组比较*P<0.05,**P<0.01
表2 合欢皮皂甙与环磷酰胺合并用药对S180荷瘤鼠肿瘤生长的影响
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组 别
药物剂量(mg/kg)
动物只数
瘤重(g)(
±s)药抑瘤率(%)
给药前
给药后
盐水对照
环磷酰胺
合欢皮皂甙
, 百拇医药
合欢皮皂甙+CY
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0.641±0.167
1.468±0.515
0.434±0.208*
-
67.4
25.4
77.4
注：与环磷酰胺组比较*P<0.05
表3 合欢皮皂甙以及与环磷酰胺合并用药对荷瘤鼠免疫器官的影响
组 别
药物剂量
, http://www.100md.com
(mg/kg)
动物重量(g)
(
±s)脾指数(g/10g)
胸腺指数(g/10g)
正常鼠对照
盐水对照
环磷酰胺
合欢皮皂甙
合欢皮皂甙
, 百拇医药
合欢皮皂甙
合欢皮皂甙+CY
-
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24.9±1.6
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23.7±2.4
22.1±2.5
21.8±1.2
0.139±0.016
0.144±0.029
0.094±0.033**
0.133±0.037*
0.119±0.029*
0.128±0.029*
0.097±0.035**△
0.091±0.017
, 百拇医药
0.025±0.005
0.018±0.030**
0.051±0.010*
0.016±0.004*
0.014±0.003*
0.016±0.002**△
注：与盐水对照组比较*P>0.05,**P<0.01；与环磷酰胺组比较△P>0.05
表4 合欢皮皂甙以及与环磷酰胺合并用药对荷瘤鼠免疫功能的影响
组 别
药物剂量(mg/kg)
, 百拇医药
T细胞转化实验
(OD值)
B细胞转化实验(OD值)
吞噬指数(%)
正常对照
盐水对照
环磷酰胺+CY
合欢皮皂甙
合欢皮皂甙
合欢皮皂甙
合欢皮皂甙+CY
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, 百拇医药 -
20
0.7
1.0
1.8
0.7+20
0.672±0.104
0.463±0.114
0.296±0.069**
0.426±0.071*
0.312±0.064*
0.177±0.068**
, http://www.100md.com
0.239±0.081**△
0.526±0.113
0.368±0.099
0.249±0.082**
0.313±0.087*
0.251±0.059***
0.207±0.052**
0.187±0.054**△
51.76±8.66
42.24±5.93
31.00±6.12*
, 百拇医药
40.07±8.00*
30.12±5.67**
22.36±5.01***
28.01±6.34**△
注：与盐水对照组比较***P<0.05,**P<0.01，*P>0.05；与环磷酰胺组比较△P>0.05
3 讨论
本实验结果表明合欢皮皂甙对S180肿瘤生长有明显抑制作用，而且量效关系良好，与环磷酰胺合用，能增强环磷酰胺的抑瘤作用。胸腺脾指数、T、B淋巴细胞转化试验表明，一定剂量的合欢皮皂甙能抑制机体免疫功能，但与环磷酰胺合用无协同降低机体免疫功能作用。说明合欢皮皂甙有望作为一种新的抗肿瘤药物出现，并能与环磷酰胺合用增强其抑瘤作用[3]，但合欢皮皂甙抗肿瘤的机制有待进一步研究。
参考文献
1 江苏新医学院编.中药大词典.上册，上海：上海人民出版社 1997：937
2 张忆雄，孙万邦，王燕妮，等.TF口服液对小鼠吞噬功能及淋巴细胞增殖反应堆影响.中国免疫学杂志 1997；13：24
3 邹坤，赵玉英，郑俊华，张如意.从合欢皮皂甙中获得三个细胞毒活性的三萜皂甙.北京医科大学学报 1997；29：290
(1999-01-29 收稿), 百拇医药