淫羊藿总黄酮的免疫调节作用
作者：张逸凡 于庆海
单位：沈阳药科大学中药系， 沈阳 110015
关键词：淫羊藿总黄酮；环磷酰胺；免疫调节作用；T淋巴细胞亚群
沈阳药科大学学报990308 摘 要 淫羊藿总黄酮400 mg/kg显著增加正常小鼠单核巨噬细胞的吞噬功能，提高血清溶血素抗体生成水平，对迟发型超敏反应强度无明显影响；200 mg/kg，400 mg/kg可显著拮抗环磷酰胺所致小鼠单核巨噬细胞吞噬能力，血清溶血素抗体生成水平和迟发型超敏反应强度降低；200 mg/kg可显著降低致敏前给予环磷酰胺所致的迟发型超敏反应增强.进一步研究表明；淫羊藿总黄酮的免疫调节作用与其对TH/TS比值的调节作用有关.
分类号 R96
The Immunoregulatory Effect of Total flavones Epimedium
, 百拇医药
Zhang Yifan,Yu Qinghai
Department of Traditional Chinese Medicines，Shenyang Pharmaceutical University，Shenyang 110015
Abstract Total flavones Epimedium(TFE) 400 mg/kg significantly strengthened the phagocytosing function of monocyte-macrophage system and development of serum hemolysin,but had no effect on the delayed type hypersensitivity(DTH) reaction in normal mice.In mice treated with cyclophosphamide (CY),the phagocytosing function of monocyte-macrophage system,the development of serum hemolysin and DTH reaction were markedly enhanced by TFE 200 mg/kg,400 mg/kg,while the DTH reaction was suppressed by TFE 200 mg/kg.Studying the mechanisms,we found that the immunoregulatory effects of TFE might be brought about by altering TH/TS ratio.
, 百拇医药
Key words total flavones Epimedium;cyclophosphamide,immunoregulatory effect;T cell subpopulation
文献报道，炎症特别是免疫性炎症多伴有免疫功能紊乱现象〔1〕.淫羊藿总黄酮(total flavones of Epimedium,TFE)对一般性炎症和免疫性炎症均有不同程度的抑制作用.然而其对免疫功能特别是环磷酰胺(CY)所造成的不同免疫状态模型小鼠的各项免疫指标有何影响，这方面研究未见报道.本文采用CY作工具药，研究了淫羊藿总黄酮的免疫调节作用，并初步探讨了机理.
1 材料与方法
1.1 实验材料
淫羊藿总黄酮：购自辽宁省新宾县兴京制药厂，精制后含量62.5%；环磷酰胺(cyclophosphamide,CY)：沈阳药科大学制药厂，批号：950727；抗L3T4单克隆抗体(针对TH/TI)，抗Lyt-2单克隆抗体(针对TS/TC)：北京医科大学免疫研究中心.
, 百拇医药
1.2 实验方法
昆明种小鼠，雄性，体重18～20 g.给药第3，5天腹腔注射CY 100 mg/kg造成单核巨噬细胞系统吞噬功能降低模型，致敏当天腹腔注射CY 20 mg/kg造成体液免疫功能降低模型，致敏后第1，3天腹腔注射CY 40 mg/kg造成细胞免疫降低模型，致敏前3天腹腔注射CY 200 mg/kg造成细胞免疫增强模型.总黄酮按200 mg/kg，400 mg/kg灌胃给予，每天一次，连续6天，末次给药1 h后，按文献方法分别进行单核巨噬细胞系统吞噬功能测定实验(碳廓清法)〔2〕，体内抗体生成水平测定实验(溶血素法)〔3〕，迟发型超敏反应(DTH)强度测定实验〔4〕.T淋巴细胞亚群测定实验采用细胞毒法〔5〕.
统计方法：组间差异的显著性采用t检验.
2 实验结果
, 百拇医药
2.1 TFE对正常小鼠免疫功能的影响
由表1可见，TFE对正常小鼠迟发型超敏反应强度无明显影响.400 mg/kg可显著增加正常小鼠单核巨噬细胞吞噬功能，增加血清溶血素抗体生成水平.200 mg/kg则无明显影响.
Tab.1 The immunoregulatory effect of TFE on normal mice/
±s Group
Dose/mg.kg-1
k
HC50
, http://www.100md.com Ear swelling/mg
Control
—
0.086±0.013
(10)
18.81±11.71
(10)
0.59±0.63
(10)
TEE
200
0.081±0.020
, http://www.100md.com
(10)
21.08±15.92
(11)
0.58±0.68
(10)
TFE
400
0.113±0.016* * *
(10)
37.80±19.36*
(9)
1.27±1.09
, 百拇医药
(10)
*P<0.05，* * *P<0.001,compared with control;n=()
2.2 TEE对CY模型小鼠免疫功能的影响
由表2可见，CY所致免疫功能低下模型小鼠单核巨噬细胞吞噬功能，血清溶血素抗体生成水平及迟发型超敏反应强度显著降低，TFE高、低两个剂量组均具有不同程度的拮抗作用.致敏前给予CY，迟发型超敏反应显著增强，TFE 200 mg/kg可使之降低.观察TFE对T淋巴细胞亚群的影响，发现其对TH/TS具有双向调节作用.Tab.2 The immunoregulatory effect of TFE on CY treated mice/±s Group
, http://www.100md.com
Dose/
mg.kg-1
k
HC50
ip CY after sensitization ip CY before sensitization
Ear sweling/mg
TH/TS
Ear swelling/mg
TH/TS
, 百拇医药
Control
—
0.092±0.012
(10)
56.12±9.91
(10)
1.45±0.60
(10)
0.99±0.08
(10)
2.30±1.58
(10)
, http://www.100md.com
0.99±0.15
(11)
CY
—
0.069±0.011△ △ △
(10)
26.69±13.18△ △ △
(9)
0.30±0.42△ △ △
(10)
0.83±0.11△ △ △
, http://www.100md.com
(9)
4.30±1.62△
(10)
1.60±0.30△ △ △
(11)
TFE+
CY
200
0.087±0.014**
(10)
52.16±22.98* *
, 百拇医药
(10)
1.47±1.31*
(10)
1.05±0.15* *
(10)
2.35±1.06* *
(10)
1.29±0.37* *
(11)
TFE+
CY
, http://www.100md.com
400
0.084±0.014*
(10)
57.16±18.59* * *
(10)
1.20±0.71* *
(10)
1.01±0.17*
(9)
4.55±2.72
(10)
, 百拇医药
1.49±0.32
(9)
△P<0.05，△ △P<0.01，△ △ △P<0.001，compared with control；*P<0.05，* *P<0.01，compared with CY group;n=()
3 讨论
免疫功能是机体的一种正常的生理功能，它能识别外来物质，并将其代谢、中和或消除，以保护自身不受伤害.机体发生炎症时，其免疫功能也常发生变化.本文研究结果发现TFE高剂量能够增加正常小鼠碳廓清吞噬指数和校正吞噬指数，提高血清溶血素抗体生成水平，提示TFE能提高机体非特异性免疫和体液免疫，提高机体对有害刺激的防御作用.
, 百拇医药
为研究药物对不同免疫状态模型的影响，本文采用CY作为工具药.CY是最强的烷化剂类免疫抑制剂，主要影响DNA、RNA和蛋白质的合成.CY对免疫细胞具有选择性，主要作用于增殖期或生命周期短的细胞，而B细胞在短寿细胞中占有很大比例，因此CY对B细胞选择性较强，即使小剂量的CY就可以抑制抗体反应，而对于T细胞，则与给药时间和剂量有关〔6〕.致敏后给CY，主要抑制TH细胞，TH细胞数目下降，因而常表现为DHT反应的抑制〔7〕，而在致敏前给CY，主要抑制TS细胞，TS细胞数目下降，DHT反应增强〔8〕.利用CY的这一特点，人们用之造成不同的模型，研究药物的作用.本文研究结果发现，TFE对致敏后给CY所造成的细胞和体液免疫低下有一定的恢复作用.而对致敏前给CY所造成的细胞免疫增强有下调作用.提示TFE可能具有双向调节作用.观察其对T淋巴细胞亚群的影响，发现TFE小剂量对TH/TS比值也具有双向调节作用.这表明TFE对T细胞亚群的功能有一定的影响.已知TFE具有促进DNA、RNA和蛋白质合成的作用，根据CY的作用原理，我们推测TFE对TH和TS可能具有保护作用.
, 百拇医药
细胞介导的大鼠佐剂性关节炎类似人的类风湿性关节炎，其炎症病程的发展常伴有T细胞亚群功能的紊乱，主要表现为TS细胞活性降低，TH细胞活性相对升高.TS细胞活性的降低与关节损伤有相关性〔9〕.TFE对大鼠佐剂性关节炎的原发性足肿胀和继发性足肿胀均有抑制作用，对CY所造成的TS细胞损伤有保护作用，因而，我们推测，TFE对关节炎大鼠的TS细胞也是有作用的.炎症免疫性疾病病因复杂，病程变化无常，免疫功能紊乱是该类疾病的一个主要特征，调节机体免疫功能，使之恢复正常，可能有助于该类疾病的治疗.
参考文献
1 Gillman SC,Carlson RP,Daniels JF,et al.Immunological abnormalities in rats with adjuvant-induced arthritis Ⅱ Effect of antiarthritic therapy on immune function in relation to disease development.Int J Immunopharmacol,1987,9：9
, http://www.100md.com
2 陈奇.中药药理实验方法学.北京：人民卫生出版社，1993.757
3 徐学瑛.一个改进的体液免疫测定方法——溶血素测定方法.药学学报，1979,14(7)：443～445
4 Corsini AC.A simple method of evaluating delayed type hypersensitivity in mice.J Immunol Methods,1979,30:195～197
5 王笑利，王晓农，马青年，等.性类固醇激素对小鼠胸腺细胞亚群的影响,中华微生物和免疫学杂志，1990，10(5)：287～290
6 Turk JL，Rarker D.Effect of Cyclophosphamide on immunological control mechanisms.Immunological Rev,1982,65:100～113
, 百拇医药
7 Merluzzi VJ,Faanes RB,Choi YS.Restoration of Cyclophosphamide-induced suppression of thymusderived cytotoxic cell generation by normal thymocytes.Cancer Research,1979,39:3647～3654
8 Gill HK,Liew FY.Regulation of delayed-type hypersensitivity Ⅲ.Effect of Cyclophosphamide on the suppressor cells for delayed-type hypersensitivity to sheep erythrocytes in mice.Eur J Immunol,1978,8;172～176
9 Binderup L.Decreased T-suppressor cell activity in rats with adjuvant arthritis.Annals of the Rheumatic Diseases,1983,42:693～698
收稿日期:1998-09-10, 百拇医药
单位：沈阳药科大学中药系， 沈阳 110015
关键词：淫羊藿总黄酮；环磷酰胺；免疫调节作用；T淋巴细胞亚群
沈阳药科大学学报990308 摘 要 淫羊藿总黄酮400 mg/kg显著增加正常小鼠单核巨噬细胞的吞噬功能，提高血清溶血素抗体生成水平，对迟发型超敏反应强度无明显影响；200 mg/kg，400 mg/kg可显著拮抗环磷酰胺所致小鼠单核巨噬细胞吞噬能力，血清溶血素抗体生成水平和迟发型超敏反应强度降低；200 mg/kg可显著降低致敏前给予环磷酰胺所致的迟发型超敏反应增强.进一步研究表明；淫羊藿总黄酮的免疫调节作用与其对TH/TS比值的调节作用有关.
分类号 R96
The Immunoregulatory Effect of Total flavones Epimedium
, 百拇医药
Zhang Yifan,Yu Qinghai
Department of Traditional Chinese Medicines，Shenyang Pharmaceutical University，Shenyang 110015
Abstract Total flavones Epimedium(TFE) 400 mg/kg significantly strengthened the phagocytosing function of monocyte-macrophage system and development of serum hemolysin,but had no effect on the delayed type hypersensitivity(DTH) reaction in normal mice.In mice treated with cyclophosphamide (CY),the phagocytosing function of monocyte-macrophage system,the development of serum hemolysin and DTH reaction were markedly enhanced by TFE 200 mg/kg,400 mg/kg,while the DTH reaction was suppressed by TFE 200 mg/kg.Studying the mechanisms,we found that the immunoregulatory effects of TFE might be brought about by altering TH/TS ratio.
, 百拇医药
Key words total flavones Epimedium;cyclophosphamide,immunoregulatory effect;T cell subpopulation
文献报道，炎症特别是免疫性炎症多伴有免疫功能紊乱现象〔1〕.淫羊藿总黄酮(total flavones of Epimedium,TFE)对一般性炎症和免疫性炎症均有不同程度的抑制作用.然而其对免疫功能特别是环磷酰胺(CY)所造成的不同免疫状态模型小鼠的各项免疫指标有何影响，这方面研究未见报道.本文采用CY作工具药，研究了淫羊藿总黄酮的免疫调节作用，并初步探讨了机理.
1 材料与方法
1.1 实验材料
淫羊藿总黄酮：购自辽宁省新宾县兴京制药厂，精制后含量62.5%；环磷酰胺(cyclophosphamide,CY)：沈阳药科大学制药厂，批号：950727；抗L3T4单克隆抗体(针对TH/TI)，抗Lyt-2单克隆抗体(针对TS/TC)：北京医科大学免疫研究中心.
, 百拇医药
1.2 实验方法
昆明种小鼠，雄性，体重18～20 g.给药第3，5天腹腔注射CY 100 mg/kg造成单核巨噬细胞系统吞噬功能降低模型，致敏当天腹腔注射CY 20 mg/kg造成体液免疫功能降低模型，致敏后第1，3天腹腔注射CY 40 mg/kg造成细胞免疫降低模型，致敏前3天腹腔注射CY 200 mg/kg造成细胞免疫增强模型.总黄酮按200 mg/kg，400 mg/kg灌胃给予，每天一次，连续6天，末次给药1 h后，按文献方法分别进行单核巨噬细胞系统吞噬功能测定实验(碳廓清法)〔2〕，体内抗体生成水平测定实验(溶血素法)〔3〕，迟发型超敏反应(DTH)强度测定实验〔4〕.T淋巴细胞亚群测定实验采用细胞毒法〔5〕.
统计方法：组间差异的显著性采用t检验.
2 实验结果
, 百拇医药
2.1 TFE对正常小鼠免疫功能的影响
由表1可见，TFE对正常小鼠迟发型超敏反应强度无明显影响.400 mg/kg可显著增加正常小鼠单核巨噬细胞吞噬功能，增加血清溶血素抗体生成水平.200 mg/kg则无明显影响.
Tab.1 The immunoregulatory effect of TFE on normal mice/
±s GroupDose/mg.kg-1
k
HC50
, http://www.100md.com Ear swelling/mg
Control
—
0.086±0.013
(10)
18.81±11.71
(10)
0.59±0.63
(10)
TEE
200
0.081±0.020
, http://www.100md.com
(10)
21.08±15.92
(11)
0.58±0.68
(10)
TFE
400
0.113±0.016* * *
(10)
37.80±19.36*
(9)
1.27±1.09
, 百拇医药
(10)
*P<0.05，* * *P<0.001,compared with control;n=()
2.2 TEE对CY模型小鼠免疫功能的影响
由表2可见，CY所致免疫功能低下模型小鼠单核巨噬细胞吞噬功能，血清溶血素抗体生成水平及迟发型超敏反应强度显著降低，TFE高、低两个剂量组均具有不同程度的拮抗作用.致敏前给予CY，迟发型超敏反应显著增强，TFE 200 mg/kg可使之降低.观察TFE对T淋巴细胞亚群的影响，发现其对TH/TS具有双向调节作用.Tab.2 The immunoregulatory effect of TFE on CY treated mice/
±s Group, http://www.100md.com
Dose/
mg.kg-1
k
HC50
ip CY after sensitization ip CY before sensitization
Ear sweling/mg
TH/TS
Ear swelling/mg
TH/TS
, 百拇医药
Control
—
0.092±0.012
(10)
56.12±9.91
(10)
1.45±0.60
(10)
0.99±0.08
(10)
2.30±1.58
(10)
, http://www.100md.com
0.99±0.15
(11)
CY
—
0.069±0.011△ △ △
(10)
26.69±13.18△ △ △
(9)
0.30±0.42△ △ △
(10)
0.83±0.11△ △ △
, http://www.100md.com
(9)
4.30±1.62△
(10)
1.60±0.30△ △ △
(11)
TFE+
CY
200
0.087±0.014**
(10)
52.16±22.98* *
, 百拇医药
(10)
1.47±1.31*
(10)
1.05±0.15* *
(10)
2.35±1.06* *
(10)
1.29±0.37* *
(11)
TFE+
CY
, http://www.100md.com
400
0.084±0.014*
(10)
57.16±18.59* * *
(10)
1.20±0.71* *
(10)
1.01±0.17*
(9)
4.55±2.72
(10)
, 百拇医药
1.49±0.32
(9)
△P<0.05，△ △P<0.01，△ △ △P<0.001，compared with control；*P<0.05，* *P<0.01，compared with CY group;n=()
3 讨论
免疫功能是机体的一种正常的生理功能，它能识别外来物质，并将其代谢、中和或消除，以保护自身不受伤害.机体发生炎症时，其免疫功能也常发生变化.本文研究结果发现TFE高剂量能够增加正常小鼠碳廓清吞噬指数和校正吞噬指数，提高血清溶血素抗体生成水平，提示TFE能提高机体非特异性免疫和体液免疫，提高机体对有害刺激的防御作用.
, 百拇医药
为研究药物对不同免疫状态模型的影响，本文采用CY作为工具药.CY是最强的烷化剂类免疫抑制剂，主要影响DNA、RNA和蛋白质的合成.CY对免疫细胞具有选择性，主要作用于增殖期或生命周期短的细胞，而B细胞在短寿细胞中占有很大比例，因此CY对B细胞选择性较强，即使小剂量的CY就可以抑制抗体反应，而对于T细胞，则与给药时间和剂量有关〔6〕.致敏后给CY，主要抑制TH细胞，TH细胞数目下降，因而常表现为DHT反应的抑制〔7〕，而在致敏前给CY，主要抑制TS细胞，TS细胞数目下降，DHT反应增强〔8〕.利用CY的这一特点，人们用之造成不同的模型，研究药物的作用.本文研究结果发现，TFE对致敏后给CY所造成的细胞和体液免疫低下有一定的恢复作用.而对致敏前给CY所造成的细胞免疫增强有下调作用.提示TFE可能具有双向调节作用.观察其对T淋巴细胞亚群的影响，发现TFE小剂量对TH/TS比值也具有双向调节作用.这表明TFE对T细胞亚群的功能有一定的影响.已知TFE具有促进DNA、RNA和蛋白质合成的作用，根据CY的作用原理，我们推测TFE对TH和TS可能具有保护作用.
, 百拇医药
细胞介导的大鼠佐剂性关节炎类似人的类风湿性关节炎，其炎症病程的发展常伴有T细胞亚群功能的紊乱，主要表现为TS细胞活性降低，TH细胞活性相对升高.TS细胞活性的降低与关节损伤有相关性〔9〕.TFE对大鼠佐剂性关节炎的原发性足肿胀和继发性足肿胀均有抑制作用，对CY所造成的TS细胞损伤有保护作用，因而，我们推测，TFE对关节炎大鼠的TS细胞也是有作用的.炎症免疫性疾病病因复杂，病程变化无常，免疫功能紊乱是该类疾病的一个主要特征，调节机体免疫功能，使之恢复正常，可能有助于该类疾病的治疗.
参考文献
1 Gillman SC,Carlson RP,Daniels JF,et al.Immunological abnormalities in rats with adjuvant-induced arthritis Ⅱ Effect of antiarthritic therapy on immune function in relation to disease development.Int J Immunopharmacol,1987,9：9
, http://www.100md.com
2 陈奇.中药药理实验方法学.北京：人民卫生出版社，1993.757
3 徐学瑛.一个改进的体液免疫测定方法——溶血素测定方法.药学学报，1979,14(7)：443～445
4 Corsini AC.A simple method of evaluating delayed type hypersensitivity in mice.J Immunol Methods,1979,30:195～197
5 王笑利，王晓农，马青年，等.性类固醇激素对小鼠胸腺细胞亚群的影响,中华微生物和免疫学杂志，1990，10(5)：287～290
6 Turk JL，Rarker D.Effect of Cyclophosphamide on immunological control mechanisms.Immunological Rev,1982,65:100～113
, 百拇医药
7 Merluzzi VJ,Faanes RB,Choi YS.Restoration of Cyclophosphamide-induced suppression of thymusderived cytotoxic cell generation by normal thymocytes.Cancer Research,1979,39:3647～3654
8 Gill HK,Liew FY.Regulation of delayed-type hypersensitivity Ⅲ.Effect of Cyclophosphamide on the suppressor cells for delayed-type hypersensitivity to sheep erythrocytes in mice.Eur J Immunol,1978,8;172～176
9 Binderup L.Decreased T-suppressor cell activity in rats with adjuvant arthritis.Annals of the Rheumatic Diseases,1983,42:693～698
收稿日期:1998-09-10, 百拇医药