红曲中降血脂活性成分的研究
作者：宓鹤鸣 宋洪涛 陈 磊 杨根金 郭 涛
单位：宓鹤鸣 宋洪涛 陈 磊 杨根金 第二军医大学药学院(上海200433)；郭 涛 沈阳军区总医院
关键词：红曲；洛伐他汀；降血脂
中草药/990205 摘 要 由紫红曲霉诱变育种而获得一菌株Monascus purpureus MS 18，从该菌株发酵而成的红曲药材中分离得到一化合物，经鉴定为洛伐他汀。
红曲是一味传统药材，为红曲科红曲霉属真菌紫红曲霉Monascus purpureus Went接种于大米上发酵而成〔1〕。通过对全国各地产红曲药材的调研和分析，有些产地的红曲中虽然含有强效血脂调节剂HMG-CoA还原酶抑制剂洛伐他汀，但含量甚微，为此我们通过对紫红曲霉的诱变育种获得一株我们感兴趣的菌株M.purpureus MS 18，经在大米上发酵而成红曲药材(样品编号H 18)，并从中分离得到一化合物Ⅴ，经鉴定为洛伐他汀(lovastatin, monacolin K)。
, 百拇医药
化合物Ⅴ为无色针状结晶，mp 158℃～160℃(丙酮-水重结晶)，易溶于极性大的有机溶媒(甲醇、乙醇、乙酸乙酯、氯仿)和碱水，不溶于石油醚及中性、酸性水中，MS给出分子离子峰404(M)，结合其13CNMR和1HNMR数据(见表1、2)，推测该化合物的分子式为C24H36O5。IR(KBr) cm-1：3 540(C-H)、2 970(C-OH)、1 720(C＝O)、1 660(C＝C)，1 220(O-C-O)，说明有羟基、双键和酯羰基基团。
13CNMR中烯碳信号128.31，131.57，133.04和129.63 ppm及1HNMR中烯氢信号5.53(1H，brs.),5.98(1 H,d,J＝9.6 Hz)，5.79(1 H,dd,J＝9.6，5.7 Hz)。结合UV在230，237，246 nm处存在最大吸收，说明分子中存在共轭双烯。此外，氢谱中给出3个连续碳上氢信号5.38(1 H，m)，4.63(1 H，m),4.37(1 H,m)以及4个甲基氢信号1.09(3 H，d,J＝7.2 Hz)，0.91(3 H，d,J＝7.5 Hz)，1.10(3 H，d,J＝6.9 Hz)，0.88(3 H，t,J＝7.2 Hz)。1H及13CNMR数据与文献报道的洛伐他汀的数据一致，故鉴定为洛伐他汀，化学结构式见图1。
, 百拇医药
图1 洛伐他汀化学结构式
1 仪器与试剂
熔点测定用电热熔点测定仪；紫外光谱用岛津UV-265℃测定；红外光谱用日立270-50测定；EI-MS用JMS-D300测定；核磁共振谱用Bruker-Spectrospin AC-P300测定；层析用硅胶为青岛海洋化工厂生产的硅胶H(10～40 μ)。红曲药材：由紫红曲霉菌M. purpureus Went诱变育种而得的菌株M.purpureus MS 18接种于蒸熟的大米上经32℃发酵7 d后，低温烘干制备而成。
2 提取和分离
将红曲研成粗粉，称取5 kg，用95%乙醇热提，提取液浓缩至稠膏状，用适量硅胶H拌和均匀后低温干燥，研成细粉后，上硅胶H低压柱，用石油醚-乙酸乙酯溶剂系统进行梯度洗脱，在石油醚-乙酸乙酯(5∶1)洗脱部分得到化合物Ⅴ，用适量苯加热溶解，放冷析出结晶，经丙酮-水重结晶得纯品109.4 mg。
, 百拇医药
3 鉴定
化合物Ⅴ为无色针状结晶，mp 158℃～160℃(丙酮-水)；UVλmax nm：230，237，246。IR(KBr) cm-1：3 540，2 970，1 720，1 660，1 220。MS m/z：404(M+)，302(M-102)，284(M-120)，224(M-180),198(M-206)，172(M-232)，159(M-245)，157(M-247)。1HNMR(CDCl3/TMS) ppm见表1；
表1 化合物Ⅴ的1HNMR数据 H位
δppm
H位
δppm
, 百拇医药
1
5.38(1 H)
3′
4.37(1 H)
2
1.95(2 H)
4′ax
1.66(1 H)
3
2.41(1 H)
4′eq
1.99(1 H)
3-CH3
, 百拇医药
1.09(3 H,d,J＝7.2 Hz)
5′
4.63(1 H)
4
5.53(1 H)
6′
1.32(1 H)
5
5.98(1 H,dd,J＝9.6 Hz)
1.89(1 H)
6
5.79(1 H,dd,J＝9.6，5.7 Hz)
, http://www.100md.com
7′
1.39(1 H)
7
2.39(1 H)
1.49(1 H)
7-CH3
0.91(3 H，d,J＝7.5 Hz)
2″
2.36(1 H)
8
1.72(1 H)
2″-CH3
, 百拇医药
1.10(3 H,d,J＝6.9 Hz)
8a
2.25(1 H)
3″
1.42(1 H)
2′eq
2.64(1 H，ddd,J＝17.7，2.3，1.4 Hz)
1.64(1 H)
2′ax
2.71(1 H，dd,J＝17.74，4.2 Hz)
4″
, 百拇医药
0.88(3 H，t,J＝7.2 Hz)
13CNMR(CDCl3) ppm见表2。与文献报道〔2〕的洛伐他汀的数据一致。表2 化合物Ⅴ的13CNMR数据 C位
δppm
DEPT
C位
δppm
DEPT
1
67.67
CH
, http://www.100md.com
1′
170.31
C
2
32.71
CH2
2′
38.69
CH2
3
27.44
CH
3′
, 百拇医药
62.63
CH
4
128.31
CH
4′
36.18
CH2
4a
131.57
C
5′
76.01
, http://www.100md.com
CH
5
133.04
CH
6′
32.95
CH2
6
129.63
CH
7′
24.25
CH2
, 百拇医药
7
30.88
CH
1″
176.81
C
8
36.61
CH
2″
37.33
CH
8a
, http://www.100md.com 41.49
CH
3″
26.80
CH2
3-CH3
22.82
CH3
4″
11.71
CH3
7-CH3
, 百拇医药
13.86
CH3
2″-CH3
16.22
CH3
4 结论与讨论 从紫红曲霉MS18菌株接种于大米上发酵制备的中药红曲中分离到无色针晶化合物，其理化性质与洛伐他汀文献报道的一致，为内源性HMG-CoA还原酶抑制剂。本实验结果确认了我们制备的红曲药材中含有降血脂活性成分，为红曲用于防治高脂血症提供了科学依据。
Akira E曾从红色细曲霉“M.ruber No 10005”菌株的5 L发酵培养液中分离到87 mg洛伐他汀，收率为0.0017%〔2〕。我们从5 kg红曲H 18药材中分离到化合物Ⅴ 109.4 mg，收率为0.0022%。因此，可以认为，对中药红曲进一步深入研究，从中开发研制天然来源的血脂调节药物具有广阔的前景。
参 考 文 献
[1] 江苏新医学院编.中药大辞典.第一版.上海：上海人民出版社，1977：991
[2] Endo A, et al. J Antibiotics, 1979,32:852
(1998-10-25修回), http://www.100md.com
单位：宓鹤鸣 宋洪涛 陈 磊 杨根金 第二军医大学药学院(上海200433)；郭 涛 沈阳军区总医院
关键词：红曲；洛伐他汀；降血脂
中草药/990205 摘 要 由紫红曲霉诱变育种而获得一菌株Monascus purpureus MS 18，从该菌株发酵而成的红曲药材中分离得到一化合物，经鉴定为洛伐他汀。
红曲是一味传统药材，为红曲科红曲霉属真菌紫红曲霉Monascus purpureus Went接种于大米上发酵而成〔1〕。通过对全国各地产红曲药材的调研和分析，有些产地的红曲中虽然含有强效血脂调节剂HMG-CoA还原酶抑制剂洛伐他汀，但含量甚微，为此我们通过对紫红曲霉的诱变育种获得一株我们感兴趣的菌株M.purpureus MS 18，经在大米上发酵而成红曲药材(样品编号H 18)，并从中分离得到一化合物Ⅴ，经鉴定为洛伐他汀(lovastatin, monacolin K)。
, 百拇医药
化合物Ⅴ为无色针状结晶，mp 158℃～160℃(丙酮-水重结晶)，易溶于极性大的有机溶媒(甲醇、乙醇、乙酸乙酯、氯仿)和碱水，不溶于石油醚及中性、酸性水中，MS给出分子离子峰404(M)，结合其13CNMR和1HNMR数据(见表1、2)，推测该化合物的分子式为C24H36O5。IR(KBr) cm-1：3 540(C-H)、2 970(C-OH)、1 720(C＝O)、1 660(C＝C)，1 220(O-C-O)，说明有羟基、双键和酯羰基基团。
13CNMR中烯碳信号128.31，131.57，133.04和129.63 ppm及1HNMR中烯氢信号5.53(1H，brs.),5.98(1 H,d,J＝9.6 Hz)，5.79(1 H,dd,J＝9.6，5.7 Hz)。结合UV在230，237，246 nm处存在最大吸收，说明分子中存在共轭双烯。此外，氢谱中给出3个连续碳上氢信号5.38(1 H，m)，4.63(1 H，m),4.37(1 H,m)以及4个甲基氢信号1.09(3 H，d,J＝7.2 Hz)，0.91(3 H，d,J＝7.5 Hz)，1.10(3 H，d,J＝6.9 Hz)，0.88(3 H，t,J＝7.2 Hz)。1H及13CNMR数据与文献报道的洛伐他汀的数据一致，故鉴定为洛伐他汀，化学结构式见图1。
, 百拇医药
图1 洛伐他汀化学结构式
1 仪器与试剂
熔点测定用电热熔点测定仪；紫外光谱用岛津UV-265℃测定；红外光谱用日立270-50测定；EI-MS用JMS-D300测定；核磁共振谱用Bruker-Spectrospin AC-P300测定；层析用硅胶为青岛海洋化工厂生产的硅胶H(10～40 μ)。红曲药材：由紫红曲霉菌M. purpureus Went诱变育种而得的菌株M.purpureus MS 18接种于蒸熟的大米上经32℃发酵7 d后，低温烘干制备而成。
2 提取和分离
将红曲研成粗粉，称取5 kg，用95%乙醇热提，提取液浓缩至稠膏状，用适量硅胶H拌和均匀后低温干燥，研成细粉后，上硅胶H低压柱，用石油醚-乙酸乙酯溶剂系统进行梯度洗脱，在石油醚-乙酸乙酯(5∶1)洗脱部分得到化合物Ⅴ，用适量苯加热溶解，放冷析出结晶，经丙酮-水重结晶得纯品109.4 mg。
, 百拇医药
3 鉴定
化合物Ⅴ为无色针状结晶，mp 158℃～160℃(丙酮-水)；UVλmax nm：230，237，246。IR(KBr) cm-1：3 540，2 970，1 720，1 660，1 220。MS m/z：404(M+)，302(M-102)，284(M-120)，224(M-180),198(M-206)，172(M-232)，159(M-245)，157(M-247)。1HNMR(CDCl3/TMS) ppm见表1；
表1 化合物Ⅴ的1HNMR数据 H位
δppm
H位
δppm
, 百拇医药
1
5.38(1 H)
3′
4.37(1 H)
2
1.95(2 H)
4′ax
1.66(1 H)
3
2.41(1 H)
4′eq
1.99(1 H)
3-CH3
, 百拇医药
1.09(3 H,d,J＝7.2 Hz)
5′
4.63(1 H)
4
5.53(1 H)
6′
1.32(1 H)
5
5.98(1 H,dd,J＝9.6 Hz)
1.89(1 H)
6
5.79(1 H,dd,J＝9.6，5.7 Hz)
, http://www.100md.com
7′
1.39(1 H)
7
2.39(1 H)
1.49(1 H)
7-CH3
0.91(3 H，d,J＝7.5 Hz)
2″
2.36(1 H)
8
1.72(1 H)
2″-CH3
, 百拇医药
1.10(3 H,d,J＝6.9 Hz)
8a
2.25(1 H)
3″
1.42(1 H)
2′eq
2.64(1 H，ddd,J＝17.7，2.3，1.4 Hz)
1.64(1 H)
2′ax
2.71(1 H，dd,J＝17.74，4.2 Hz)
4″
, 百拇医药
0.88(3 H，t,J＝7.2 Hz)
13CNMR(CDCl3) ppm见表2。与文献报道〔2〕的洛伐他汀的数据一致。表2 化合物Ⅴ的13CNMR数据 C位
δppm
DEPT
C位
δppm
DEPT
1
67.67
CH
, http://www.100md.com
1′
170.31
C
2
32.71
CH2
2′
38.69
CH2
3
27.44
CH
3′
, 百拇医药
62.63
CH
4
128.31
CH
4′
36.18
CH2
4a
131.57
C
5′
76.01
, http://www.100md.com
CH
5
133.04
CH
6′
32.95
CH2
6
129.63
CH
7′
24.25
CH2
, 百拇医药
7
30.88
CH
1″
176.81
C
8
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2″
37.33
CH
8a
, http://www.100md.com 41.49
CH
3″
26.80
CH2
3-CH3
22.82
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4″
11.71
CH3
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, 百拇医药
13.86
CH3
2″-CH3
16.22
CH3
4 结论与讨论 从紫红曲霉MS18菌株接种于大米上发酵制备的中药红曲中分离到无色针晶化合物，其理化性质与洛伐他汀文献报道的一致，为内源性HMG-CoA还原酶抑制剂。本实验结果确认了我们制备的红曲药材中含有降血脂活性成分，为红曲用于防治高脂血症提供了科学依据。
Akira E曾从红色细曲霉“M.ruber No 10005”菌株的5 L发酵培养液中分离到87 mg洛伐他汀，收率为0.0017%〔2〕。我们从5 kg红曲H 18药材中分离到化合物Ⅴ 109.4 mg，收率为0.0022%。因此，可以认为，对中药红曲进一步深入研究，从中开发研制天然来源的血脂调节药物具有广阔的前景。
参 考 文 献
[1] 江苏新医学院编.中药大辞典.第一版.上海：上海人民出版社，1977：991
[2] Endo A, et al. J Antibiotics, 1979,32:852
(1998-10-25修回), http://www.100md.com
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