亚硒酸钠对人外周淋巴细胞体外转化与增殖的影响
作者：陈贤均 赵红刚 徐爱芹
单位：陈贤均 徐爱芹(咸宁医学院生物学教研室，湖北437100)；赵红刚(咸宁医学院病理学教研室，湖北437100)
关键词：亚硒酸钠；T淋巴细胞转化；细胞增殖
中国地方病学杂志990308 【摘要】 目的 为了解亚硒酸钠对人周淋巴细胞在体外培养中转化与增殖产生有益或不利影响的临界剂量。方法 用不同剂量的亚硒酸钠处理培养中的淋巴细胞72h，观察T细胞转化率及增殖指数。结果 在培养物中添加0.05μg/ml亚硒酸钠能显著促进转化细胞增殖；添加0.25μg/ml可促进转化细胞增殖，但显著抑制细胞转化；添加0.75μg/ml和1.50μg/ml，不仅不能促进细胞增殖，而且强烈抑制细胞转化。1.50μg/ml剂量的亚硒酸钠使非转化淋巴细胞发生葡萄状聚集甚至核融合。结论 亚硒酸钠影响淋巴细胞增殖的临界剂量在0.25～0.75μg/ml之间，影响其转化的临界剂量在0.05μg/ml以下，淋巴细胞转化较之增殖对亚硒酸钠作用的反应更加敏感。毒性剂量的硒可能破坏细胞膜性结构的稳定性。
, 百拇医药
分类号：R446.63 文献标识码：A 论文编号：1000-4955(1999)03-0184-87
Effects of sodium selenite on transformation and proliferation of hu man peripheral blood lymphocytes in culture in vitro
CHEN Xianjun,ZHAO Honggang,XU Aiqin
Department of Biology,Xianning Medical College,Hubei 437100
【Abstract】 Objective To understand the critical dos e of sodium selenite which shows beneficial or deteriorative effect on the trans formation and proliferation of human peripheral blood lymphocytes (PBL) in cultu re in vitro.Methods Normal human PBL were treated for 72h by supple menting the culture medium with different doses of sodium selenite,and then the transformation rate and proliferation index of the T lymphocytes were studied.Results When the culture medium was supplemented with 0 .05μg/ml sodium selenite,the proliferation of transformed cells was significant ly promoted and the transformation did not change remarkably,when supplemented w ith 0.25μg/ml,the proliferation was promoted but the transformation was inh ibited,and when with 0.75μg/ml and 1.50μg/ml,the proliferation was not pro moted and the transformation was strongly inhibited.Big dose of (1.50μg/ml) sodium selenite m ade the nuclei of the untransformed lymphocytes gather together like a few grape s doing,and even caused them to fuse.Conclusions The critical dose of sodium selenite which shows beneficial or deteriorative effect on proliferation of human PBL in cultur e is between 0.25～0.75μg/ml,and the critical dose on transformation below 0.05 μg/ml.Lymphocyte transformation is more sensitive than lymphocyte proliferatio n to the effect of selenium.In addition the toxic concentration of selenium may damage the stability of membrane structure of cells.
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【Key words】Sodium selenite Transformation of T lymphocyte Proliferation of cell
大量研究表明硒作为生物体必需微量元素在机体多种重要代谢和生理过程中起着十分重要而复杂的作用。在对机体免疫功能影响方面，以小鼠和人体为对象的一些研究表明在饮食中补加适量的硒可增强NK细胞活性[1]，提高免疫球蛋白及补体水平[2]，巨噬细胞吞噬功能及淋巴细胞转化率[1～3]，可拮抗环磷酰胺、镍等免疫抑制剂的免疫抑制作用[1，4]。因此，硒具有增强和调节细胞免疫和体液免疫的生物学效应。但是随着补硒剂量的增加，硒的免疫增强作用下降，甚至表现出免疫抑制作用[2]。本研究试图明确亚硒酸钠对正常人体周淋巴细胞在体外培养体系中转化与增殖产生有益和不利影响的临界剂量，为用细胞培养方法进一步研究硒的诸多功能及其毒性机制建立基础。
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1 材料与方法
1.1 主要试剂 肝素，RPMI1640培养基，小牛血清，亚硒酸钠(AR，沈阳市试剂二厂)，顺铂，PHA。
1.2 血样与分组 正常人体外周血淋巴细胞取自本地区中心血站健康献血者，共取6份血样，男女各半。实验设4个亚硒酸钠剂量组(根据文献[2，5]及预试验，其剂量确定为0.05μg/ml、0.25μg/ml、0.75μg/ml和1.50μg/ml)及阴性对照组共5个组。每份血样5个组各接种1瓶。
1.3 细胞培养与制片 血样用RPMI1640培养液(含小牛血清10%，双抗各100μg/ml，PHA200μg/ml)进行微量全血培养。细胞接种后即加入亚硒酸钠或顺铂，培养处理72h后收集细胞，按细胞遗传学方法制备标本片。
1.4 检测指标
, 百拇医药
1.4.1 淋巴细胞转化率：每例观察2～3张标本片，每张标本片选择5～7个代表性的视野，25倍物镜下观察判别转化细胞和非转化细胞(不同物镜下对转化与非转化细胞的识别有差异)。转化细胞的特征是，核膨大、疏松，有核仁分化，核质着色不均一，有粒状染色质。非转化细胞的特点是核小，着色深而均一，无核分化。核的大小及着色深度介于前二者之间者为过度型，本文将过度型归于转化细胞。细胞转化率用百分率表示。
1.4.2 细胞增殖指数：与统计细胞转化率同时阅片，计算转化细胞增殖指数。
1.5 统计学处理 结果以均数±标准差(
±s%)表示，组间比较用t检验。
2 结果
2.1 亚硒酸钠对人体T淋巴细胞体外转化的影响
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亚硒酸钠对人体周淋巴细胞离体培养转化的影响见表1。除0.05μg/ml剂量组外，其余3个剂量组的转化率显著或极显著低于阴性对照组。相邻剂量组之间比较显示，0.75μg/ml与1.50μg/ml两组之间转化率有显著差异(表1)。亚硒酸钠剂量与细胞转化率间存在高度的相关性(r=-0.9262,P<0.005)。
表1 亚硒酸钠对人周淋巴细胞离体培养转化的影响(处理72h) 组别
剂量(μg/ml)
例数
淋巴细胞
总数
转化淋巴
细胞数
细胞转化率
, 百拇医药
(±s%)
t检验P值
与N-C组比较
相邻Se组间比较
N-C
0.00
6
5207
3936
75.59±4.32
(0.00)
, 百拇医药 Na2SeO3
0.05
6
6024
4260
70.72±4.31
>0.05
(6.44)
>0.50
0.25
5
4305
, 百拇医药 3002
69.73±2.59
<0.05
(7.75)
>0.50
0.75
6
5978
4133
69.14±4.92
<0.05
(8.53)
<0.02
, http://www.100md.com
1.50
6
6733
3786
56.23±8.94
<0.001
(25.61)
注：1.N-C为阴性对照组，表2同
2.括号中的数字为转化抑制百分率
1.5μg/ml亚硒酸钠剂量组不仅存在高比率的未转化深染小淋巴细胞，且这些小淋巴细胞核多以3～5个聚集成葡萄状，其中有的在核间形成“牵拉桥”，有的表现为融合状态(图1)。
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图1 低转化率及非转化小淋巴细胞葡萄状聚集
a.核间形成牵拉桥 b.核融合
2.2 亚硒酸钠对淋巴细胞培养增殖的影响
不同剂量的亚硒酸钠对淋巴细胞培养增殖的影响见表2。表2显示，培养物中添加0.05μg/ml和0.25μg/ml剂量的亚硒酸钠可显著促进转化淋巴细胞的增殖，以0.05μg/ml剂量促进作用最强。添加0.75μg/ml和1.50μg/ml亚硒酸钠，细胞增殖与对照组比较无显著差异。相邻组间比较均无显著差异,细胞增殖率随亚硒酸钠浓度增加而逐渐降低，二者呈现负相关关系(r=-0.8994,P<0.0025)。
表2 Na2SeO3对人周淋巴细胞培养增殖的影响(处理72h) 组别
剂量
, 百拇医药
(μg/ml)
例数
转化淋巴
细胞数
分裂细胞
数
转化细胞增殖
指数(±s%)
t检验P值
与N-C组比较
相邻Se组间比较
N-C
, 百拇医药
0.00
6
3936
122
3.10±0.57
Na2SeO3
0.05
6
4260
211
4.95±0.82
<0.002
, 百拇医药
>0.05
>0.50
>0.05
0.25
5
3002
121
4.03±0.49
<0.02
0.75
6
4133
173
, 百拇医药
4.18±1.12
>0.05
1.50
6
3786
118
3.12±0.76
>0.50
3 讨论
淋巴细胞在体内外受到抗原或有丝分裂原的刺激可转化为淋巴母细胞并分裂增殖。因此淋巴细胞在体外实验体系中的转化反应与增殖程度已成为衡量机体免疫功能状态或检测药物对免疫功能影响的有效指标。
硒的生物学效应取决于硒化合物的种类及生物有机体对硒的摄入量。魏虎来等[1]给小鼠腹腔内注射亚硒酸钠、汪传松等[3]给人和小鼠饮以人工硒茶后，分别观察到亚硒酸钠具有促进淋巴细胞转化、增强巨噬细胞吞噬功能、提高NK细胞杀伤活性和IgG、IgM及C4水平。孙恩杰等[2]在小鼠饮水中和小鼠淋巴细胞培养物中加入不同浓度的亚硒酸钠，观察到浓度在0.05μg/ml时促进小鼠淋巴细胞转化的作用最强，然后随着亚硒酸钠剂量增加，此作用下降，0.3μg/ml时表现出抑制作用。本研究以人体外周血淋巴细胞为材料，实验结果除0.05μg/ml剂量组淋转率与对照组无显著差异外，0.25～1.50μg/ml剂量的亚硒酸钠对人体周淋巴细胞在培养中的转化具有不同程度的抑制作用，此作用在1.50μg/ml时显著加强。此结果与孙恩杰等的研究结果似有相同的趋势，只是抑制浓度起始点更低一些。这可能是人、鼠淋巴细胞的差异，疑或是有丝分裂原或培养基的差异所致。
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结果显示，低剂量亚硒酸钠能显著促进淋巴细胞增殖，而增高亚硒酸钠剂量，促进作用随之下降，虽然1.50μg/ml剂量组的增殖指数并不显著低于阴性对照组，但增殖指数有随亚硒酸钠剂量增高而降低的趋势，而且具有高度相关性。这一结果与文献[6]论述硒对细胞生长影响的结果相一致。
高剂量亚硒酸钠使非转化淋巴细胞核呈葡萄状聚集，提示过量的亚硒酸钠可能影响细胞膜性结构的稳定性。文献报道，毒性剂量的硒可使膜蛋白发生交联[7]，本研究中，可能是由于这种膜蛋白的交联作用，部分未转化的淋巴细胞首先质膜交联融合形成多核的共质体，进而核膜交联融合，形成“牵拉桥”和融合状核。这一过程可能是某个(些)淋巴细胞亚群对亚硒酸钠的特征性反应。
上述结果表明，淋巴细胞转化较之增殖对亚硒酸钠作用的反应更加敏感，亚硒酸钠促进淋巴细胞增殖的剂量显示出对转化的抑制。根据本文统计学处理结果，亚硒酸钠促进或抑制离体培养中的人体淋巴细胞转化的临界剂量在0.05μg/ml以下，促进或抑制淋巴细胞增殖的临界剂量在0.25～0.75μg/ml之间。
, http://www.100md.com
基金来源：湖北省教委(96A061)
作者简介：陈贤均，男，1956年生，副教授
4 参考文献
[1] 魏虎来，赵怀顺，孙万里，等.硒对小鼠免疫功能的影响[J].免疫学杂志，1995，11(2)：104～106
[2] 孙恩杰，徐辉碧，刘琼，等.硒化合物的免疫增强作用[J].中国实验临床免疫学杂志，1996,8(6):5～8
[3] 汪传松，熊世洲.人工硒茶增强免疫功能的观察[J].同济医科大学学报，1996,25(4):327～328
[4] 葛桂秀，朱茂祥，龚诒芬，等.补硒对镍作业人员T淋巴细胞免疫功能的调节[J].职业医学，1995,22(5):24～26
[5] 周树锋.亚硒酸钠对人和哺乳动物、细菌的诱变作用研究及致癌性的初步评估[J].微量元素与健康研究，1994,11(2):4～6
[6] 顾康生.硒的毒性与安全剂量[J].国外医学(医学地理分册)，1991,12(4):145～147
[7] 陈春英，徐辉碧，杨祥良.微量元素硒催化产生自由基导致脂质过氧化的ESR研究[J].微量元素与健康研究，1994，专辑:6～8
*收稿日期：1998-05-27；修订日期：1998-08-01, http://www.100md.com
单位：陈贤均 徐爱芹(咸宁医学院生物学教研室，湖北437100)；赵红刚(咸宁医学院病理学教研室，湖北437100)
关键词：亚硒酸钠；T淋巴细胞转化；细胞增殖
中国地方病学杂志990308 【摘要】 目的 为了解亚硒酸钠对人周淋巴细胞在体外培养中转化与增殖产生有益或不利影响的临界剂量。方法 用不同剂量的亚硒酸钠处理培养中的淋巴细胞72h，观察T细胞转化率及增殖指数。结果 在培养物中添加0.05μg/ml亚硒酸钠能显著促进转化细胞增殖；添加0.25μg/ml可促进转化细胞增殖，但显著抑制细胞转化；添加0.75μg/ml和1.50μg/ml，不仅不能促进细胞增殖，而且强烈抑制细胞转化。1.50μg/ml剂量的亚硒酸钠使非转化淋巴细胞发生葡萄状聚集甚至核融合。结论 亚硒酸钠影响淋巴细胞增殖的临界剂量在0.25～0.75μg/ml之间，影响其转化的临界剂量在0.05μg/ml以下，淋巴细胞转化较之增殖对亚硒酸钠作用的反应更加敏感。毒性剂量的硒可能破坏细胞膜性结构的稳定性。
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分类号：R446.63 文献标识码：A 论文编号：1000-4955(1999)03-0184-87
Effects of sodium selenite on transformation and proliferation of hu man peripheral blood lymphocytes in culture in vitro
CHEN Xianjun,ZHAO Honggang,XU Aiqin
Department of Biology,Xianning Medical College,Hubei 437100
【Abstract】 Objective To understand the critical dos e of sodium selenite which shows beneficial or deteriorative effect on the trans formation and proliferation of human peripheral blood lymphocytes (PBL) in cultu re in vitro.Methods Normal human PBL were treated for 72h by supple menting the culture medium with different doses of sodium selenite,and then the transformation rate and proliferation index of the T lymphocytes were studied.Results When the culture medium was supplemented with 0 .05μg/ml sodium selenite,the proliferation of transformed cells was significant ly promoted and the transformation did not change remarkably,when supplemented w ith 0.25μg/ml,the proliferation was promoted but the transformation was inh ibited,and when with 0.75μg/ml and 1.50μg/ml,the proliferation was not pro moted and the transformation was strongly inhibited.Big dose of (1.50μg/ml) sodium selenite m ade the nuclei of the untransformed lymphocytes gather together like a few grape s doing,and even caused them to fuse.Conclusions The critical dose of sodium selenite which shows beneficial or deteriorative effect on proliferation of human PBL in cultur e is between 0.25～0.75μg/ml,and the critical dose on transformation below 0.05 μg/ml.Lymphocyte transformation is more sensitive than lymphocyte proliferatio n to the effect of selenium.In addition the toxic concentration of selenium may damage the stability of membrane structure of cells.
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【Key words】Sodium selenite Transformation of T lymphocyte Proliferation of cell
大量研究表明硒作为生物体必需微量元素在机体多种重要代谢和生理过程中起着十分重要而复杂的作用。在对机体免疫功能影响方面，以小鼠和人体为对象的一些研究表明在饮食中补加适量的硒可增强NK细胞活性[1]，提高免疫球蛋白及补体水平[2]，巨噬细胞吞噬功能及淋巴细胞转化率[1～3]，可拮抗环磷酰胺、镍等免疫抑制剂的免疫抑制作用[1，4]。因此，硒具有增强和调节细胞免疫和体液免疫的生物学效应。但是随着补硒剂量的增加，硒的免疫增强作用下降，甚至表现出免疫抑制作用[2]。本研究试图明确亚硒酸钠对正常人体周淋巴细胞在体外培养体系中转化与增殖产生有益和不利影响的临界剂量，为用细胞培养方法进一步研究硒的诸多功能及其毒性机制建立基础。
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1 材料与方法
1.1 主要试剂 肝素，RPMI1640培养基，小牛血清，亚硒酸钠(AR，沈阳市试剂二厂)，顺铂，PHA。
1.2 血样与分组 正常人体外周血淋巴细胞取自本地区中心血站健康献血者，共取6份血样，男女各半。实验设4个亚硒酸钠剂量组(根据文献[2，5]及预试验，其剂量确定为0.05μg/ml、0.25μg/ml、0.75μg/ml和1.50μg/ml)及阴性对照组共5个组。每份血样5个组各接种1瓶。
1.3 细胞培养与制片 血样用RPMI1640培养液(含小牛血清10%，双抗各100μg/ml，PHA200μg/ml)进行微量全血培养。细胞接种后即加入亚硒酸钠或顺铂，培养处理72h后收集细胞，按细胞遗传学方法制备标本片。
1.4 检测指标
, 百拇医药
1.4.1 淋巴细胞转化率：每例观察2～3张标本片，每张标本片选择5～7个代表性的视野，25倍物镜下观察判别转化细胞和非转化细胞(不同物镜下对转化与非转化细胞的识别有差异)。转化细胞的特征是，核膨大、疏松，有核仁分化，核质着色不均一，有粒状染色质。非转化细胞的特点是核小，着色深而均一，无核分化。核的大小及着色深度介于前二者之间者为过度型，本文将过度型归于转化细胞。细胞转化率用百分率表示。
1.4.2 细胞增殖指数：与统计细胞转化率同时阅片，计算转化细胞增殖指数。
1.5 统计学处理 结果以均数±标准差(
±s%)表示，组间比较用t检验。2 结果
2.1 亚硒酸钠对人体T淋巴细胞体外转化的影响
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亚硒酸钠对人体周淋巴细胞离体培养转化的影响见表1。除0.05μg/ml剂量组外，其余3个剂量组的转化率显著或极显著低于阴性对照组。相邻剂量组之间比较显示，0.75μg/ml与1.50μg/ml两组之间转化率有显著差异(表1)。亚硒酸钠剂量与细胞转化率间存在高度的相关性(r=-0.9262,P<0.005)。
表1 亚硒酸钠对人周淋巴细胞离体培养转化的影响(处理72h) 组别
剂量(μg/ml)
例数
淋巴细胞
总数
转化淋巴
细胞数
细胞转化率
, 百拇医药
(
±s%)t检验P值
与N-C组比较
相邻Se组间比较
N-C
0.00
6
5207
3936
75.59±4.32
(0.00)
, 百拇医药 Na2SeO3
0.05
6
6024
4260
70.72±4.31
>0.05
(6.44)
>0.50
0.25
5
4305
, 百拇医药 3002
69.73±2.59
<0.05
(7.75)
>0.50
0.75
6
5978
4133
69.14±4.92
<0.05
(8.53)
<0.02
, http://www.100md.com
1.50
6
6733
3786
56.23±8.94
<0.001
(25.61)
注：1.N-C为阴性对照组，表2同
2.括号中的数字为转化抑制百分率
1.5μg/ml亚硒酸钠剂量组不仅存在高比率的未转化深染小淋巴细胞，且这些小淋巴细胞核多以3～5个聚集成葡萄状，其中有的在核间形成“牵拉桥”，有的表现为融合状态(图1)。
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图1 低转化率及非转化小淋巴细胞葡萄状聚集
a.核间形成牵拉桥 b.核融合
2.2 亚硒酸钠对淋巴细胞培养增殖的影响
不同剂量的亚硒酸钠对淋巴细胞培养增殖的影响见表2。表2显示，培养物中添加0.05μg/ml和0.25μg/ml剂量的亚硒酸钠可显著促进转化淋巴细胞的增殖，以0.05μg/ml剂量促进作用最强。添加0.75μg/ml和1.50μg/ml亚硒酸钠，细胞增殖与对照组比较无显著差异。相邻组间比较均无显著差异,细胞增殖率随亚硒酸钠浓度增加而逐渐降低，二者呈现负相关关系(r=-0.8994,P<0.0025)。
表2 Na2SeO3对人周淋巴细胞培养增殖的影响(处理72h) 组别
剂量
, 百拇医药
(μg/ml)
例数
转化淋巴
细胞数
分裂细胞
数
转化细胞增殖
指数(
±s%)t检验P值
与N-C组比较
相邻Se组间比较
N-C
, 百拇医药
0.00
6
3936
122
3.10±0.57
Na2SeO3
0.05
6
4260
211
4.95±0.82
<0.002
, 百拇医药
>0.05
>0.50
>0.05
0.25
5
3002
121
4.03±0.49
<0.02
0.75
6
4133
173
, 百拇医药
4.18±1.12
>0.05
1.50
6
3786
118
3.12±0.76
>0.50
3 讨论
淋巴细胞在体内外受到抗原或有丝分裂原的刺激可转化为淋巴母细胞并分裂增殖。因此淋巴细胞在体外实验体系中的转化反应与增殖程度已成为衡量机体免疫功能状态或检测药物对免疫功能影响的有效指标。
硒的生物学效应取决于硒化合物的种类及生物有机体对硒的摄入量。魏虎来等[1]给小鼠腹腔内注射亚硒酸钠、汪传松等[3]给人和小鼠饮以人工硒茶后，分别观察到亚硒酸钠具有促进淋巴细胞转化、增强巨噬细胞吞噬功能、提高NK细胞杀伤活性和IgG、IgM及C4水平。孙恩杰等[2]在小鼠饮水中和小鼠淋巴细胞培养物中加入不同浓度的亚硒酸钠，观察到浓度在0.05μg/ml时促进小鼠淋巴细胞转化的作用最强，然后随着亚硒酸钠剂量增加，此作用下降，0.3μg/ml时表现出抑制作用。本研究以人体外周血淋巴细胞为材料，实验结果除0.05μg/ml剂量组淋转率与对照组无显著差异外，0.25～1.50μg/ml剂量的亚硒酸钠对人体周淋巴细胞在培养中的转化具有不同程度的抑制作用，此作用在1.50μg/ml时显著加强。此结果与孙恩杰等的研究结果似有相同的趋势，只是抑制浓度起始点更低一些。这可能是人、鼠淋巴细胞的差异，疑或是有丝分裂原或培养基的差异所致。
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结果显示，低剂量亚硒酸钠能显著促进淋巴细胞增殖，而增高亚硒酸钠剂量，促进作用随之下降，虽然1.50μg/ml剂量组的增殖指数并不显著低于阴性对照组，但增殖指数有随亚硒酸钠剂量增高而降低的趋势，而且具有高度相关性。这一结果与文献[6]论述硒对细胞生长影响的结果相一致。
高剂量亚硒酸钠使非转化淋巴细胞核呈葡萄状聚集，提示过量的亚硒酸钠可能影响细胞膜性结构的稳定性。文献报道，毒性剂量的硒可使膜蛋白发生交联[7]，本研究中，可能是由于这种膜蛋白的交联作用，部分未转化的淋巴细胞首先质膜交联融合形成多核的共质体，进而核膜交联融合，形成“牵拉桥”和融合状核。这一过程可能是某个(些)淋巴细胞亚群对亚硒酸钠的特征性反应。
上述结果表明，淋巴细胞转化较之增殖对亚硒酸钠作用的反应更加敏感，亚硒酸钠促进淋巴细胞增殖的剂量显示出对转化的抑制。根据本文统计学处理结果，亚硒酸钠促进或抑制离体培养中的人体淋巴细胞转化的临界剂量在0.05μg/ml以下，促进或抑制淋巴细胞增殖的临界剂量在0.25～0.75μg/ml之间。
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基金来源：湖北省教委(96A061)
作者简介：陈贤均，男，1956年生，副教授
4 参考文献
[1] 魏虎来，赵怀顺，孙万里，等.硒对小鼠免疫功能的影响[J].免疫学杂志，1995，11(2)：104～106
[2] 孙恩杰，徐辉碧，刘琼，等.硒化合物的免疫增强作用[J].中国实验临床免疫学杂志，1996,8(6):5～8
[3] 汪传松，熊世洲.人工硒茶增强免疫功能的观察[J].同济医科大学学报，1996,25(4):327～328
[4] 葛桂秀，朱茂祥，龚诒芬，等.补硒对镍作业人员T淋巴细胞免疫功能的调节[J].职业医学，1995,22(5):24～26
[5] 周树锋.亚硒酸钠对人和哺乳动物、细菌的诱变作用研究及致癌性的初步评估[J].微量元素与健康研究，1994,11(2):4～6
[6] 顾康生.硒的毒性与安全剂量[J].国外医学(医学地理分册)，1991,12(4):145～147
[7] 陈春英，徐辉碧，杨祥良.微量元素硒催化产生自由基导致脂质过氧化的ESR研究[J].微量元素与健康研究，1994，专辑:6～8
*收稿日期：1998-05-27；修订日期：1998-08-01, http://www.100md.com