胃泌素和丙谷胺对人胃癌细胞增殖的调控
作者：张正 李绍敏 刘小菁
单位：华西医科大学附属第一医院内科(成都 610041)
关键词：
华西医学990378 [中图分类号]R975；R735.2 [文献标识码]D
本研究用MTT比色法观察人胃癌细胞株HGC803在五肽胃泌素(Pentagastrin，PG)和胃泌素受体拮抗剂丙谷胺(Proglumide，PGL)作用下细胞增殖的变化，探讨胃泌素的促癌作用及丙谷胺的抑癌作用，为临床抗癌治疗提供基础资料。
1 材料与方法
1.1 材料 五肽胃泌素为上海东风试剂厂产品；丙谷胺、噻唑蓝(MTT)购自Sigma公司；RPM1640为GIB公司产品；人胃癌细胞株HGC803为北京肿瘤研究所建株；胃泌素RIA试剂盒由北方免疫试剂研究所提供。
, http://www.100md.com
1.2 方法
1.2.1 细胞培养 人胃癌细胞株HGC803细胞在含10%小牛血清的RPM1640培养基中，于37℃、5%CO2水饱和培养箱中培养，细胞贴壁生长良好，每3天传代一次。实验时取对数生长期细胞(贴壁后72小时)，用0.25%胰蛋白酶及0.02%EDTA消化后，用含10%小牛血清培养液制成单细胞悬液。
1.2.2 MTT法测定各药物浓度对细胞增殖的影响情况 HGC803细胞以2×103细胞/0.1ml/孔的密度接种于96孔培养板中，贴壁后换为无血清RPM1640液培养24小时，再换为含不同浓度PG或/和PGL的含5%小牛血清的1640液。各组药物浓度分别为：PG组PG10-10～10-5M共6个浓度；PGL组PGL 1～10mM共6个浓度；PG+PGL组的PG均为10-6M，PGL为1～10 mM 6个浓度。对照组加入等量培养液；空白组不含细胞；各组均三孔重复。培养48小时后，MTT法测定各孔OD值。
, 百拇医药
计量资料以
±SD表示，药物作用与药物浓度关系采用直线相关分析，计数资料采用x2检验。
2 结果
2.1 不同浓度的PG对人胃癌细胞株HGC803增殖的影响见表1。随着PG浓度的升高，细胞密度逐渐增加，这一促生长作用与剂量呈正相关(y＝0.7211+0.062x，r＝0.8012，P<0.05)，当PG浓度达10-5M时，细胞密度增加30.5%。
表1.不同浓度的PG对HGC803细胞增殖的影响 组 别
光密度值(OD)
增长率(%)
, 百拇医药
对照组
0.59±0
10-10M
0.58±0
-0.02
10-9M
0.64±0
8.47
10-8M
0.63±0.01
6.78
10-7M
, 百拇医药
0.65±0.02
10.2
10-6M
0.68±0.02
11.9
10-5M
0.78±0.02
30.5
±SD，n＝3 P<0.05
2.2 不同浓度PGL对胃癌细胞生长的影响。由表2可见，4～10mM的PGL能显著抑制胃癌细胞株HGC803细胞的增殖(P<0.05)，随着浓度增加，抑制作用更加明显(y＝0.6689+0.061，r＝-0.9876，P<0.05)，其半数抑制浓度略大于5mM；10mM几乎完全阻断增殖。1～2mM的PGL对细胞增殖影响不大(P<0.05)。
, 百拇医药
表2.不同浓度PGL对HGC803细胞增殖的影响 组 别
光密度值(OD)
增长率(%)
对照组
0.59±0
1mM
0.58±0.01
-1.69
2mM
0.57±0.02
-3.39
3mM
, 百拇医药
0.52±0.01
-11.9
4mM
0.44±0.03
-25.4
5mM
0.32±0.03
-44.2
10mM
0.07±0.01
-86.4
±SD n＝3 P<0.05
, http://www.100md.com
2.3 PG和PGL对HGC803细胞增殖的影响，由表3可见，当PG为10-6M时，同时加入的不同浓度的PGL，能抑制PG对细胞的增殖促进作用，而出现明显的抑制作用，尤以PGL浓度为5mM和10mM时，尤为明显，此抑制作用亦呈剂量依赖关系。(y＝0.6753+0.02x，r＝-0.91，P<0.05)。
表3.PG和PGL对HGC803细胞增殖的影响 组 别
光密度值(OD)
增长率(%)
对照组
0.68±0.02
10-6MPG+1mMPGL
0.64
, http://www.100md.com
-5.9
10-6MPG+2mMPGL
0.61
-10.3
10-6MPG+3mMPGL
0.56
-17.6
10-6MPG+4mMPGL
0.59
-13.2
10-6MPG+5mMPGL
, 百拇医药
0.46
-35.3
10-6MPG+10mMPGL
0.38
-44.1
±SD n＝3 P<0.05
2.4 在HGC803细胞培养过程中，每隔6小时收集培养液上清液(每一样本3份)，RIA法测定其中胃泌素的含量(用培养液做阴性对照)，发现其含量由6小时的200pg/ml，逐步上升为12小时270pg/ml，24小时320pg/ml，和36小时400pg/ml。
, http://www.100md.com 3 讨论
胃肠激素的重要激素之一胃泌素不仅对胃肠道正常组织细胞的生长有营养和调节作用，而且对胃癌、直肠癌、胰腺癌等也显示有重要的生长调节作用。这种生长调节作用是通过存在于这些细胞膜表面胃泌素受体所介导的。
本研究表明，不同浓度的外源性PG对HGC803细胞株均有不同程度的促生长作用，而这种作用可被其受体拮抗剂PGL所抑制，且单用PGL的浓度大于4mM时，这种抑制胃癌细胞生长的作用更加明显。有报道PGL不但具有抑制胃泌素与其受体结合的功能，还可抑制胃泌素的促有丝分裂作用。
本文结果提示，PG的受体拮抗剂PGL对胃癌的生长具有明显的抑制作用，但所需抑制浓度较大，故进一步应用PGL治疗胃癌和开发更有潜力的PG受体拮抗剂，将对那些含高胃泌素受体的胃肠道肿瘤患者提供有效治疗手段。
(收稿日期：1998-09-15), 百拇医药
单位：华西医科大学附属第一医院内科(成都 610041)
关键词：
华西医学990378 [中图分类号]R975；R735.2 [文献标识码]D
本研究用MTT比色法观察人胃癌细胞株HGC803在五肽胃泌素(Pentagastrin，PG)和胃泌素受体拮抗剂丙谷胺(Proglumide，PGL)作用下细胞增殖的变化，探讨胃泌素的促癌作用及丙谷胺的抑癌作用，为临床抗癌治疗提供基础资料。
1 材料与方法
1.1 材料 五肽胃泌素为上海东风试剂厂产品；丙谷胺、噻唑蓝(MTT)购自Sigma公司；RPM1640为GIB公司产品；人胃癌细胞株HGC803为北京肿瘤研究所建株；胃泌素RIA试剂盒由北方免疫试剂研究所提供。
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1.2 方法
1.2.1 细胞培养 人胃癌细胞株HGC803细胞在含10%小牛血清的RPM1640培养基中，于37℃、5%CO2水饱和培养箱中培养，细胞贴壁生长良好，每3天传代一次。实验时取对数生长期细胞(贴壁后72小时)，用0.25%胰蛋白酶及0.02%EDTA消化后，用含10%小牛血清培养液制成单细胞悬液。
1.2.2 MTT法测定各药物浓度对细胞增殖的影响情况 HGC803细胞以2×103细胞/0.1ml/孔的密度接种于96孔培养板中，贴壁后换为无血清RPM1640液培养24小时，再换为含不同浓度PG或/和PGL的含5%小牛血清的1640液。各组药物浓度分别为：PG组PG10-10～10-5M共6个浓度；PGL组PGL 1～10mM共6个浓度；PG+PGL组的PG均为10-6M，PGL为1～10 mM 6个浓度。对照组加入等量培养液；空白组不含细胞；各组均三孔重复。培养48小时后，MTT法测定各孔OD值。
, 百拇医药
计量资料以
±SD表示，药物作用与药物浓度关系采用直线相关分析，计数资料采用x2检验。2 结果
2.1 不同浓度的PG对人胃癌细胞株HGC803增殖的影响见表1。随着PG浓度的升高，细胞密度逐渐增加，这一促生长作用与剂量呈正相关(y＝0.7211+0.062x，r＝0.8012，P<0.05)，当PG浓度达10-5M时，细胞密度增加30.5%。
表1.不同浓度的PG对HGC803细胞增殖的影响 组 别
光密度值(OD)
增长率(%)
, 百拇医药
对照组
0.59±0
10-10M
0.58±0
-0.02
10-9M
0.64±0
8.47
10-8M
0.63±0.01
6.78
10-7M
, 百拇医药
0.65±0.02
10.2
10-6M
0.68±0.02
11.9
10-5M
0.78±0.02
30.5
±SD，n＝3 P<0.052.2 不同浓度PGL对胃癌细胞生长的影响。由表2可见，4～10mM的PGL能显著抑制胃癌细胞株HGC803细胞的增殖(P<0.05)，随着浓度增加，抑制作用更加明显(y＝0.6689+0.061，r＝-0.9876，P<0.05)，其半数抑制浓度略大于5mM；10mM几乎完全阻断增殖。1～2mM的PGL对细胞增殖影响不大(P<0.05)。
, 百拇医药
表2.不同浓度PGL对HGC803细胞增殖的影响 组 别
光密度值(OD)
增长率(%)
对照组
0.59±0
1mM
0.58±0.01
-1.69
2mM
0.57±0.02
-3.39
3mM
, 百拇医药
0.52±0.01
-11.9
4mM
0.44±0.03
-25.4
5mM
0.32±0.03
-44.2
10mM
0.07±0.01
-86.4
±SD n＝3 P<0.05, http://www.100md.com
2.3 PG和PGL对HGC803细胞增殖的影响，由表3可见，当PG为10-6M时，同时加入的不同浓度的PGL，能抑制PG对细胞的增殖促进作用，而出现明显的抑制作用，尤以PGL浓度为5mM和10mM时，尤为明显，此抑制作用亦呈剂量依赖关系。(y＝0.6753+0.02x，r＝-0.91，P<0.05)。
表3.PG和PGL对HGC803细胞增殖的影响 组 别
光密度值(OD)
增长率(%)
对照组
0.68±0.02
10-6MPG+1mMPGL
0.64
, http://www.100md.com
-5.9
10-6MPG+2mMPGL
0.61
-10.3
10-6MPG+3mMPGL
0.56
-17.6
10-6MPG+4mMPGL
0.59
-13.2
10-6MPG+5mMPGL
, 百拇医药
0.46
-35.3
10-6MPG+10mMPGL
0.38
-44.1
±SD n＝3 P<0.052.4 在HGC803细胞培养过程中，每隔6小时收集培养液上清液(每一样本3份)，RIA法测定其中胃泌素的含量(用培养液做阴性对照)，发现其含量由6小时的200pg/ml，逐步上升为12小时270pg/ml，24小时320pg/ml，和36小时400pg/ml。
, http://www.100md.com 3 讨论
胃肠激素的重要激素之一胃泌素不仅对胃肠道正常组织细胞的生长有营养和调节作用，而且对胃癌、直肠癌、胰腺癌等也显示有重要的生长调节作用。这种生长调节作用是通过存在于这些细胞膜表面胃泌素受体所介导的。
本研究表明，不同浓度的外源性PG对HGC803细胞株均有不同程度的促生长作用，而这种作用可被其受体拮抗剂PGL所抑制，且单用PGL的浓度大于4mM时，这种抑制胃癌细胞生长的作用更加明显。有报道PGL不但具有抑制胃泌素与其受体结合的功能，还可抑制胃泌素的促有丝分裂作用。
本文结果提示，PG的受体拮抗剂PGL对胃癌的生长具有明显的抑制作用，但所需抑制浓度较大，故进一步应用PGL治疗胃癌和开发更有潜力的PG受体拮抗剂，将对那些含高胃泌素受体的胃肠道肿瘤患者提供有效治疗手段。
(收稿日期：1998-09-15), 百拇医药