亚剂量吡喹酮对慢性血吸虫病患者循环抗原水平的影响
作者：王勇 尹晓梅 李启阳 吴维铎 胡万富 严自助
单位：王勇、尹晓梅、李启阳、吴维铎 241000 芜湖，安徽省血吸虫病防治研究所；胡万富 安徽省卫生防疫站；严自助 中国预防医学科学院寄生虫病研究所
关键词：血吸虫病；肠相关趋阴极抗原；吡喹酮；免疫诊断
中华传染病杂志990308 【摘要】 目的 观察不同亚治疗剂量吡喹酮对慢性血吸虫病患者血清血吸虫肠相关趋阴极抗原(GACA)水平的影响。方法 Kato-Katz法粪检确定108例慢性血吸虫病患者，随机分成4组，分别给予口服5mg/kg、10mg/kg、20mg/kg剂量吡喹酮和安慰剂。采用单克隆抗体酶联免疫吸附试验(McAb-Dot-ELISA)分别检测服药前、后2、8、24和48小时患者血清GACA水平。服药前、后检出率变化采用χ2检验。结果 3个实验组服药后2小时检测血清GACA水平，平均较服药前上升3个滴度，后渐下降；至服药后48小时，血清GACA水平仍高于服药前1个滴度。血清GACA检测敏感性，可由服药前的82.7%提高到服药后2小时的100.0%(P<0.05)。对照组48小时观察期内，血清GACA水平波动在1个滴度范围内，检测敏感性无明显变化(P>0.05)。结论 口服不同亚治疗剂量吡喹酮均能有效升高慢性血吸虫病患者血清血吸虫GACA水平，并显著提高血清GACA检测敏感性。
, http://www.100md.com
Effect of subclinical doses of praziquantel on circulating antigen levels in the patients with chronic Schistosomiasis
WANG Yong,YIN Xiaomei,LI Qiyang,et al.
Anhui Provincial Institute of Parasitic Diseases Wuhu,241000
【Abstract】 Objective To observe the effect of different subclinical doses of praziquantel on the serum gut-associated cathodic antigen (GACA) levels in the patients with chronic schistosomiasis.Methods One hundred and eight cases of patients with chronic schistosomiasis diagnosed by Kato-Katz method were divided into 4 groups,which were given praziquantel at the dosage of 5mg/kg,10mg/kg,20mg/kg and placebo respectively.The serum samples were collected and detected by McAb-Dot-ELISA before treatment and at 2h,8h,24h and 48h after treatment.Statistic analysis was χ2 test.Results The serum GACA levels of all three experimental groups at 2h after treatment were higher than that before treatment by 3 titers.However,the titer was decreased gradually after 2h of the thereapy.Till 48h after treatment the serum GACA levels were still 1 titer higher than that before treatment.The positive detection rate of serum GACA was raised from 82.7% before treatment to 100.0% at 2h after treatment (P<0.05).Comparatively,there were no obvious changes on the serum GACA levels and the positive detection rate in the control group (P>0.05) during the same period of observation.Conclusion Different subclinical doses of praziquantel can increase the serum GACA levels as well as the sensitivity of GACA detection effectively in the patients with chronic schistosomiasis significantly.
, 百拇医药
【Key words】 Chronic schistosomiasis Gut-associated cathodic antigen Praziquantel Immunodiagnosis
自90年代以来，以检测血清循环抗原(CAg)为方向的免疫诊断方法获得重要发展[1，2]。采用单克隆抗体斑点酶联免疫吸附试验(McAb-Dot-ELISA)检测血吸虫病患者血清血吸虫肠相关趋阴极抗原(Gut-associated Cathodic Antigen,GACA)诊断血吸虫病，在实验室和现场均取得良好效果，实践证明是一种适合现场应用的较成熟方法[3-5]。然而，由于血吸虫病患者血清CAg水平与感染度密切相关，使得CAg检测对慢性血吸虫病患者的检出率尚不够理想[6，7]。进一步提高慢性血吸虫病患者血清CAg的检出率，是当前血吸虫病防治工作中亟待解决的现实问题之一。
吡喹酮(Praziquantel)作为治疗血吸虫病的首选药物，具有高效、低毒的优点。胡万富等[6]报道，慢性血吸虫病患者经吡喹酮总量40mg/kg顿服，其血清GACA水平可发生明显变化。我们通过进一步观察不同亚治疗剂量吡喹酮对血吸虫病患者血清GACA水平的影响，旨在为提高血清GACA检测敏感性的口服吡喹酮辅助用药方案提供实验依据。
, http://www.100md.com
材料与方法
一、病例的选择与分组
在安徽省当涂江心洲、铜陵董店和宣州鲁溪等血吸虫病中度流行区，于1994年5月至11月，用Kato-Katz法粪检(一粪四检)筛查，确定慢性血吸虫病(慢血)患者108例，其中女58例，男50例，年龄8～71岁。将入选病例随机分成4组。
二、血清标本的采集
用聚乙烯塑料管采集各组患者服药前微量耳垂血，分离血清置4℃待检。之后，实验Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ组分别给予总量5mg/kg、10mg/kg和20mg/kg吡喹酮(韩国新丰药厂生产，批号：940622)顿服，并于服药后2、8、24和48小时，复采耳垂血，分离血清待检。对照组给予安慰剂(淀粉片)口服，服后采血时间同前。
三、血清CAg的检测
, 百拇医药
采用McAb-Dot-ELISA法，检测靶抗原为血吸虫GACA，全部标本均按单盲检测。试剂盒由中国预防医学科学院寄生虫病研究所严自助教授制备(批号：941123)，操作按文献[8]进行。
结 果
一、亚治疗剂量吡喹酮对血清GACA水平的影响
3组口服吡喹酮组，于服药后2小时血清GACA检测滴度迅速升高，平均较服药前提高3个滴度。之后，血清GACA检测滴度渐降。至服药后48小时，血清GACA检测滴度仍平均高于服药前1个滴度。对照组在48小时内，血清GACA水平波动在1个滴度范围内，见表1。由此可见，3个实验组口服吡喹酮后血清GACA变化模式相同。
表1 口服吡喹酮前后血清GACA滴度的分布 组别
检测时间
, 百拇医药
(h)
例数
GACA滴度分布
GACA滴度倒数均值
未检出
1∶1～
1∶20～
1∶80～
1∶320
对照组
服药前
27
5
, 百拇医药
4
8
10
0
29
2
27
4
3
8
12
0
36
8
, 百拇医药
27
5
3
6
13
0
36
24
27
5
3
10
9
0
, 百拇医药
33
48
27
5
3
14
4
1
23
Ⅰ组
服药前
27
5
9
, 百拇医药
9
3
1
16
2
26
0
1
8
13
4
110
8
25
, 百拇医药
0
4
4
12
5
88
24
27
1
5
7
13
1
50
, 百拇医药
48
24
1
5
9
8
1
36
Ⅱ组
服药前
27
4
10
6
, 百拇医药
7
0
19
2
26
0
1
9
14
2
101
8
26
1
, 百拇医药
4
4
15
2
68
24
25
4
3
10
7
1
35
48
, http://www.100md.com
25
5
4
8
7
1
22
Ⅲ组
服药前
27
5
7
8
7
, http://www.100md.com
0
22
2
27
0
0
6
16
5
199
8
26
1
1
, 百拇医药
6
15
4
129
24
26
2
2
11
8
3
65
48
26
, 百拇医药
1
3
15
7
0
32
二、口服亚治疗剂量吡喹酮对血清GACA检出率的影响
实验组81例中，服药前有14例血清GACA检测阴性，服药后2小时全部转阳。至服药后48小时，有7例复转阴，其中5例为服药前检测阴性者，2例为1∶10以下滴度者。对照组中服安慰剂前有5例血清GACA检测阴性，其中的4例在48小时观察期内始终保持阴性。服药前与服药后2小时血清GACA检出情况见表2。
表2 口服亚治疗剂量吡喹酮前后血清GACA检出率的变化 组 别
, 百拇医药
克粪虫卵数EPG(
)
服药前
服药后2h
P值
例数
阳性例数
阳性率%
例数
阳性例数
阳性率%
对照组
, 百拇医药
29.1±115.2
27
22
81.5
27
23
85.2
>0.05
Ⅰ组
37.4±81.7
27
22
81.5
, 百拇医药
26
26
100.0
<0.05
Ⅱ组
34.7±153.9
27
23
85.2
26
26
100.0
<0.05
, 百拇医药
Ⅲ组
20.0±33.1
27
22
81.5
27
27
100.0
<0.05
讨 论
有报道，吡喹酮对血吸虫病患者血清GACA的作用，系虫体被杀死后崩解，释放出大量抗原物质所致[6]。本实验观察显示，在5个不同检测时点上，各剂量组均于服药后2小时其血清GACA水平升至最高值。显然此时虫体尚未崩解。鉴于GACA系排泄性抗原，故更合理的解释是虫体受吡喹酮作用后发生强烈挛缩，导致肠管内GACA大量释放入血流。吡喹酮对血吸虫作用的体外试验及吡喹酮药代动力学特点亦支持这一解释[9]。
, 百拇医药
采用药物辅助，通过升高血吸虫病患者血清CAg水平，相应提高检测方法的敏感性，从而有效提高检测慢血患者血清CAg的免疫诊断效率。本次实验观察，McAb-Dot-ELISA法检测慢血患者血清GACA的敏感性为82.7%，与以往报道一致[3，4]。经口服亚治疗剂量吡喹酮，于服药后2小时检测，则检测敏感性上升至100.0%。表明吡喹酮辅助用药是提高血吸虫病患者血清GACA检测敏感性的十分有效的方法。从服药后血清GACA水平的变化模式、检测滴度的升高程度以及对检出率的影响上看，各亚治疗剂量吡喹酮组间并无明显差别，且与治疗量吡喹酮的作用一致。此为吡喹酮辅助用药方式走向实用提供了实验观察依据。
鉴于5mg/kg吡喹酮剂量(片剂含吡喹酮200mg/片)和服药后2小时的检测时机在现场操作中均易于接受，且在不改变检测方法的前提下可较大幅度提高慢血患者血清GACA的检测敏感性，故吡喹酮辅助用药方式显示出良好的实际应用前景。
本课题受世界银行贷款中国血吸虫病控制项目科研基金资助(编号：J-4-9)
, 百拇医药
参考文献
1 Barsoum,IS.,Kamal,KA.,Bassily,S.,et al.Diagnosis of human shistosomiasis by detection of circulating cathodic antigen with monoclonal antibody.J.Infec.Dis.,1991,164:1010-1013.
2 易新元，何永康，李岳生.日本血吸虫病循环抗原检测的合作研究(英文).中国寄生虫学与寄生虫病杂志，1995，13：277-283.
3 严自助，吕再缨，王文，等.单克隆抗体Dot-ELISA检测血吸虫病循环抗原的研究Ⅱ.中国血吸虫病防治杂志，1990，2：39-41.
4 严自助，吕再缨，王文，等.血吸虫肠相关阴极抗原单克隆抗体的制备和应用.中华传染病杂志，1992，10：10-13.
, http://www.100md.com
5 严自助，吕再缨，王文，等.血吸虫循环抗原检测的现场实验Ⅰ.中国血吸虫病防治杂志，1992，4：275-277.
6 胡万富，王之怀，徐伏牛，等.血吸虫病人治疗前后循环抗原水平的观察.中国血吸虫病防治杂志，1995，7：171-173.
7 王勇，王之怀，尹晓梅，等.McAb-RIHA法检测日本血吸虫病患者血清循环抗原的效果.实用寄生虫病杂志，1998，6：49-51.
8 严自助，吕再缨，王文，等.Dot-ELISA检测血吸虫循环抗原的方法学研究.中国血吸虫病防治杂志，1991，3：211-213.
9 毛守白，主编.血吸虫生物学与血吸虫病的防治.北京：人民卫生出版社，1990.529-533.
(收稿：1998-08-19 修回：1998-12-30), http://www.100md.com
单位：王勇、尹晓梅、李启阳、吴维铎 241000 芜湖，安徽省血吸虫病防治研究所；胡万富 安徽省卫生防疫站；严自助 中国预防医学科学院寄生虫病研究所
关键词：血吸虫病；肠相关趋阴极抗原；吡喹酮；免疫诊断
中华传染病杂志990308 【摘要】 目的 观察不同亚治疗剂量吡喹酮对慢性血吸虫病患者血清血吸虫肠相关趋阴极抗原(GACA)水平的影响。方法 Kato-Katz法粪检确定108例慢性血吸虫病患者，随机分成4组，分别给予口服5mg/kg、10mg/kg、20mg/kg剂量吡喹酮和安慰剂。采用单克隆抗体酶联免疫吸附试验(McAb-Dot-ELISA)分别检测服药前、后2、8、24和48小时患者血清GACA水平。服药前、后检出率变化采用χ2检验。结果 3个实验组服药后2小时检测血清GACA水平，平均较服药前上升3个滴度，后渐下降；至服药后48小时，血清GACA水平仍高于服药前1个滴度。血清GACA检测敏感性，可由服药前的82.7%提高到服药后2小时的100.0%(P<0.05)。对照组48小时观察期内，血清GACA水平波动在1个滴度范围内，检测敏感性无明显变化(P>0.05)。结论 口服不同亚治疗剂量吡喹酮均能有效升高慢性血吸虫病患者血清血吸虫GACA水平，并显著提高血清GACA检测敏感性。
, http://www.100md.com
Effect of subclinical doses of praziquantel on circulating antigen levels in the patients with chronic Schistosomiasis
WANG Yong,YIN Xiaomei,LI Qiyang,et al.
Anhui Provincial Institute of Parasitic Diseases Wuhu,241000
【Abstract】 Objective To observe the effect of different subclinical doses of praziquantel on the serum gut-associated cathodic antigen (GACA) levels in the patients with chronic schistosomiasis.Methods One hundred and eight cases of patients with chronic schistosomiasis diagnosed by Kato-Katz method were divided into 4 groups,which were given praziquantel at the dosage of 5mg/kg,10mg/kg,20mg/kg and placebo respectively.The serum samples were collected and detected by McAb-Dot-ELISA before treatment and at 2h,8h,24h and 48h after treatment.Statistic analysis was χ2 test.Results The serum GACA levels of all three experimental groups at 2h after treatment were higher than that before treatment by 3 titers.However,the titer was decreased gradually after 2h of the thereapy.Till 48h after treatment the serum GACA levels were still 1 titer higher than that before treatment.The positive detection rate of serum GACA was raised from 82.7% before treatment to 100.0% at 2h after treatment (P<0.05).Comparatively,there were no obvious changes on the serum GACA levels and the positive detection rate in the control group (P>0.05) during the same period of observation.Conclusion Different subclinical doses of praziquantel can increase the serum GACA levels as well as the sensitivity of GACA detection effectively in the patients with chronic schistosomiasis significantly.
, 百拇医药
【Key words】 Chronic schistosomiasis Gut-associated cathodic antigen Praziquantel Immunodiagnosis
自90年代以来，以检测血清循环抗原(CAg)为方向的免疫诊断方法获得重要发展[1，2]。采用单克隆抗体斑点酶联免疫吸附试验(McAb-Dot-ELISA)检测血吸虫病患者血清血吸虫肠相关趋阴极抗原(Gut-associated Cathodic Antigen,GACA)诊断血吸虫病，在实验室和现场均取得良好效果，实践证明是一种适合现场应用的较成熟方法[3-5]。然而，由于血吸虫病患者血清CAg水平与感染度密切相关，使得CAg检测对慢性血吸虫病患者的检出率尚不够理想[6，7]。进一步提高慢性血吸虫病患者血清CAg的检出率，是当前血吸虫病防治工作中亟待解决的现实问题之一。
吡喹酮(Praziquantel)作为治疗血吸虫病的首选药物，具有高效、低毒的优点。胡万富等[6]报道，慢性血吸虫病患者经吡喹酮总量40mg/kg顿服，其血清GACA水平可发生明显变化。我们通过进一步观察不同亚治疗剂量吡喹酮对血吸虫病患者血清GACA水平的影响，旨在为提高血清GACA检测敏感性的口服吡喹酮辅助用药方案提供实验依据。
, http://www.100md.com
材料与方法
一、病例的选择与分组
在安徽省当涂江心洲、铜陵董店和宣州鲁溪等血吸虫病中度流行区，于1994年5月至11月，用Kato-Katz法粪检(一粪四检)筛查，确定慢性血吸虫病(慢血)患者108例，其中女58例，男50例，年龄8～71岁。将入选病例随机分成4组。
二、血清标本的采集
用聚乙烯塑料管采集各组患者服药前微量耳垂血，分离血清置4℃待检。之后，实验Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ组分别给予总量5mg/kg、10mg/kg和20mg/kg吡喹酮(韩国新丰药厂生产，批号：940622)顿服，并于服药后2、8、24和48小时，复采耳垂血，分离血清待检。对照组给予安慰剂(淀粉片)口服，服后采血时间同前。
三、血清CAg的检测
, 百拇医药
采用McAb-Dot-ELISA法，检测靶抗原为血吸虫GACA，全部标本均按单盲检测。试剂盒由中国预防医学科学院寄生虫病研究所严自助教授制备(批号：941123)，操作按文献[8]进行。
结 果
一、亚治疗剂量吡喹酮对血清GACA水平的影响
3组口服吡喹酮组，于服药后2小时血清GACA检测滴度迅速升高，平均较服药前提高3个滴度。之后，血清GACA检测滴度渐降。至服药后48小时，血清GACA检测滴度仍平均高于服药前1个滴度。对照组在48小时内，血清GACA水平波动在1个滴度范围内，见表1。由此可见，3个实验组口服吡喹酮后血清GACA变化模式相同。
表1 口服吡喹酮前后血清GACA滴度的分布 组别
检测时间
, 百拇医药
(h)
例数
GACA滴度分布
GACA滴度倒数均值
未检出
1∶1～
1∶20～
1∶80～
1∶320
对照组
服药前
27
5
, 百拇医药
4
8
10
0
29
2
27
4
3
8
12
0
36
8
, 百拇医药
27
5
3
6
13
0
36
24
27
5
3
10
9
0
, 百拇医药
33
48
27
5
3
14
4
1
23
Ⅰ组
服药前
27
5
9
, 百拇医药
9
3
1
16
2
26
0
1
8
13
4
110
8
25
, 百拇医药
0
4
4
12
5
88
24
27
1
5
7
13
1
50
, 百拇医药
48
24
1
5
9
8
1
36
Ⅱ组
服药前
27
4
10
6
, 百拇医药
7
0
19
2
26
0
1
9
14
2
101
8
26
1
, 百拇医药
4
4
15
2
68
24
25
4
3
10
7
1
35
48
, http://www.100md.com
25
5
4
8
7
1
22
Ⅲ组
服药前
27
5
7
8
7
, http://www.100md.com
0
22
2
27
0
0
6
16
5
199
8
26
1
1
, 百拇医药
6
15
4
129
24
26
2
2
11
8
3
65
48
26
, 百拇医药
1
3
15
7
0
32
二、口服亚治疗剂量吡喹酮对血清GACA检出率的影响
实验组81例中，服药前有14例血清GACA检测阴性，服药后2小时全部转阳。至服药后48小时，有7例复转阴，其中5例为服药前检测阴性者，2例为1∶10以下滴度者。对照组中服安慰剂前有5例血清GACA检测阴性，其中的4例在48小时观察期内始终保持阴性。服药前与服药后2小时血清GACA检出情况见表2。
表2 口服亚治疗剂量吡喹酮前后血清GACA检出率的变化 组 别
, 百拇医药
克粪虫卵数EPG(
)服药前
服药后2h
P值
例数
阳性例数
阳性率%
例数
阳性例数
阳性率%
对照组
, 百拇医药
29.1±115.2
27
22
81.5
27
23
85.2
>0.05
Ⅰ组
37.4±81.7
27
22
81.5
, 百拇医药
26
26
100.0
<0.05
Ⅱ组
34.7±153.9
27
23
85.2
26
26
100.0
<0.05
, 百拇医药
Ⅲ组
20.0±33.1
27
22
81.5
27
27
100.0
<0.05
讨 论
有报道，吡喹酮对血吸虫病患者血清GACA的作用，系虫体被杀死后崩解，释放出大量抗原物质所致[6]。本实验观察显示，在5个不同检测时点上，各剂量组均于服药后2小时其血清GACA水平升至最高值。显然此时虫体尚未崩解。鉴于GACA系排泄性抗原，故更合理的解释是虫体受吡喹酮作用后发生强烈挛缩，导致肠管内GACA大量释放入血流。吡喹酮对血吸虫作用的体外试验及吡喹酮药代动力学特点亦支持这一解释[9]。
, 百拇医药
采用药物辅助，通过升高血吸虫病患者血清CAg水平，相应提高检测方法的敏感性，从而有效提高检测慢血患者血清CAg的免疫诊断效率。本次实验观察，McAb-Dot-ELISA法检测慢血患者血清GACA的敏感性为82.7%，与以往报道一致[3，4]。经口服亚治疗剂量吡喹酮，于服药后2小时检测，则检测敏感性上升至100.0%。表明吡喹酮辅助用药是提高血吸虫病患者血清GACA检测敏感性的十分有效的方法。从服药后血清GACA水平的变化模式、检测滴度的升高程度以及对检出率的影响上看，各亚治疗剂量吡喹酮组间并无明显差别，且与治疗量吡喹酮的作用一致。此为吡喹酮辅助用药方式走向实用提供了实验观察依据。
鉴于5mg/kg吡喹酮剂量(片剂含吡喹酮200mg/片)和服药后2小时的检测时机在现场操作中均易于接受，且在不改变检测方法的前提下可较大幅度提高慢血患者血清GACA的检测敏感性，故吡喹酮辅助用药方式显示出良好的实际应用前景。
本课题受世界银行贷款中国血吸虫病控制项目科研基金资助(编号：J-4-9)
, 百拇医药
参考文献
1 Barsoum,IS.,Kamal,KA.,Bassily,S.,et al.Diagnosis of human shistosomiasis by detection of circulating cathodic antigen with monoclonal antibody.J.Infec.Dis.,1991,164:1010-1013.
2 易新元，何永康，李岳生.日本血吸虫病循环抗原检测的合作研究(英文).中国寄生虫学与寄生虫病杂志，1995，13：277-283.
3 严自助，吕再缨，王文，等.单克隆抗体Dot-ELISA检测血吸虫病循环抗原的研究Ⅱ.中国血吸虫病防治杂志，1990，2：39-41.
4 严自助，吕再缨，王文，等.血吸虫肠相关阴极抗原单克隆抗体的制备和应用.中华传染病杂志，1992，10：10-13.
, http://www.100md.com
5 严自助，吕再缨，王文，等.血吸虫循环抗原检测的现场实验Ⅰ.中国血吸虫病防治杂志，1992，4：275-277.
6 胡万富，王之怀，徐伏牛，等.血吸虫病人治疗前后循环抗原水平的观察.中国血吸虫病防治杂志，1995，7：171-173.
7 王勇，王之怀，尹晓梅，等.McAb-RIHA法检测日本血吸虫病患者血清循环抗原的效果.实用寄生虫病杂志，1998，6：49-51.
8 严自助，吕再缨，王文，等.Dot-ELISA检测血吸虫循环抗原的方法学研究.中国血吸虫病防治杂志，1991，3：211-213.
9 毛守白，主编.血吸虫生物学与血吸虫病的防治.北京：人民卫生出版社，1990.529-533.
(收稿：1998-08-19 修回：1998-12-30), http://www.100md.com