P53蛋白在口腔鳞状细胞癌发生过程中的表达及意义
作者：殷 操 沈丽佳 胡 雁 隆光培 黄泽民
单位：
关键词：正常口腔粘膜；口腔癌前损害；口腔鳞状细胞癌；P53蛋白
临床口腔医学杂志990305 提 要 本研究采用微波处理暴露抗原，通过免疫组化LSAB方法对NOM 6例，OPL 28例，OSCC 34例中P53蛋白表达进行观察，其结果NOM无表达；在OPL中的表达率为82%随着上皮异常增生的程度加重，表达率呈上升趋势(P<0.05)；而在OSCC中表达率为65%，随着肿瘤的分级增加，表达率呈下降趋势(P<0.05)。结果表明，P53蛋白在OPL和OSCC中呈异常表达，并与OPL程度和OSCC分级有关，提示P53基因在OSCC发生发展过程中具有一定作用。
The expression of P53 oncoprotein in normal,premalignant,and malignant lesions of oral mucosal epithelium
, 百拇医药
Yin Cao, et al.
Stomatological Hsopital of Guangdong Province,Guangzhou 510260.
Abstract The objective of the study was to investigate the effects of P53 protein on the malignant development of mucosal epithelium.The level of P53 protein expression was determined immunohistochemically in normal oral mucosa(NOM),oral precancerous lesions(OPL),and oral sequmous cell carcinoma(OSCC).P53 protein expression was negative in NOM,while P53 protein positive staining was found in 23/28(82%) of OPL,and in 22/34(65%) of OSCC.Thus,the overexpression of P53 is involved in early stage as well as in later stage of tumorigenesis,and is closely related to the degree of tumor.The results indicate that P53 gene plays a role in the development and progression of OSCC.
, 百拇医药
Key words Normal oral mucosa(NOM) Oral precancerous lesion(OPL) Oral squamous cell carcinoma(OSCC) P53 protein
本研究采用微波处理暴露抗原，通过免疫组织化学方法对正常口腔粘膜(Normal oralmucosa,NOM)、口腔癌前损害(Oral precancerous lesion,OPL)和口腔鳞状细胞癌(Oral squamous cell carcinoma,OSCC)中P53蛋白表达进行观察和分析，以期为口腔粘膜癌变机制的研究提供依据。
材料和方法
1. 试剂：DAKO-P53,DO-7单克隆抗体(DAKO公司，1：200)；LSAB试剂盒(DAKO公司，1：150)；DAB显示剂(Sinma公司，1：150)。
, http://www.100md.com
2. 标本：选择NOM 6例，OPL 28例，OSCC 34例，所有标本均经10%中性福尔马林固定，石蜡包埋。一般情况见表1。
表1 68例观察标本的一般情况 病 理 诊 断
病 理 分 级
例 数
NOM
0
6
OPL
轻
9
中
, http://www.100md.com 6
重
13
OSCC
Ⅰ
13
Ⅱ
15
Ⅲ
6
上述关于OPL诊断分类参考WHO 1978的标准，OPL上皮异常增生分轻、中、重度；OSCC分级参考WHO 1971年的标准，分Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ级。
3. 实验方法：将每个标本连续病理切片3张(5μm)，其中，一张作HE染色，一张作空白对照，一张作P53蛋白免疫组化染色。常规脱蜡，脱水，置3%过氧化氢甲醇溶液中孵育30分钟，将切片置入蒸馏水，微波炉内处理10分钟(功率550W)，待切片冷却后，按免疫组化ABC法常规操作。空白对照组以PBS代替I抗，其余步骤同免疫组化。
, 百拇医药
4. 观察内容：P53蛋白表达分布情况：阳性细胞为胞核呈棕黄色颗粒；P53阳性表达率变化情况：统计处理(χ2检验)。结 果
1. P53蛋白阴性染色：NOM和阴性对照切片
2. OPL的P53蛋白阳性染色。(图1)
图1 OPL的中度上皮异常增生，P53阳性细胞位于基底层和上皮浅层
轻度上皮异常增生：位于基底层，阳性细胞着色浅，数量少。
中度上皮异常增生：阳性细胞位于基底层和基底旁层。
, http://www.100md.com
重度上皮异常增生：阳性细胞位于基底层和上皮浅层。胞核着色变深，数量剧增。
3. OSCC的P53蛋白阳性染色：阳性细胞分布在癌巢周和侵袭前沿区，胞核着色明显变深，数量剧增(图2、3、4)
图2 OSCCⅠ级阳性细胞呈散发型分布
图3 OSCCⅡ级阳性细胞呈灶型分布
图4 OSCCⅢ级阳性细胞呈泛染型分布
(1)Ⅰ级：主要呈散发型分布
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(2)Ⅱ级：主要呈灶染型分布
(3)Ⅲ级：主要呈泛染型分布
4. P53蛋白表达情况(表2)。
表2 P53蛋白在NOM、OPL和OSCC中
表 达 情 况(68例) 病理诊断
病理分级
例数
阳性例数
阳性率%
NOM
0
, http://www.100md.com
6
0
0
OPL
轻
9
6
66.7
中
6
5
83.3
重
13
, 百拇医药
12
92.3
OSCC
Ⅰ
13
11
84.6
Ⅱ
15
9
60.0
Ⅲ
6
2
, http://www.100md.com
33.3
表2显示OPL组总的P53蛋白阳性表达率约为82%，不同异常增生之间差异有显著性(P<0.05)。总趋势是随着上皮异常增生程度加重；OSCC组P53蛋白表达阳性率约为65%，在Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ分级中差异有显著性(P<0.05)。总趋势P53蛋白表达的阳性率呈下降趋势。讨 论
本研究结果，P53蛋白在NOM无表达，在OPL表达率82%，随着上皮异常增生程度加重，表达率呈上升趋势，而在OSCC中表达率65%，在Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ分级中表达率呈下降趋势，结果显示，P53蛋白在OPL和OSCC中均呈异常表达，其表达率与癌前损害程度和肿瘤分级有关。关于P53基因在肿瘤恶变初期阶段，还是晚期发挥作用，目前尚有争议。Ogden等报导，在正常、良性及癌前病变的口腔及宫颈粘膜中P53蛋白无表达，认为P53蛋白的异常表达与癌变的晚期有关〔1〕。但近来Regezi等研究认为，P53蛋白表达与OSCC发生的早期有关〔2〕。本研究P53蛋白在OPL和OSCC均有较高的表达率，提示P53基因在OSCC发生发展过程中具有一定作用，其作用机制有待进一步深入研究。
, 百拇医药
目前关于P53蛋白在OPL和OSCC中表达研究结果不十分一致。陈谦明等报导，P53蛋白在OPL中表达率90%，在OSCC中表达率61%〔3〕。而Matsuda等报导，P53蛋白在OPL表达率10%，在OSCC中表达率35%〔4〕。总的来说，国内学者高于国外学者的结果。其原因可能与标本固定，P53单抗种类、微波处理抗原与否、免疫组化方法选择，以及种族等原因有关。因此，我们认为，关于P53蛋白在OSCC发生发展过程表达的免疫组化研究，有待进一步标准化，系统化和定量化。
*广东省卫生厅资助项目
作者单位：殷操，胡雁，隆光培，黄泽民 510260广州，广东省口腔医院；沈丽佳 暨南大学医学院口腔病理教研室
参考文献
, 百拇医药
1 Ogden GR,Kiddie RA,Lunny DP,et al.Assessment of P53 protein expression in normal,benign,and malignant oral mucosa.J Pathol,1992;166:389.
2 Regezi JA,Zarbo RJ,Pisanty S,et al.P53 protein expression in sequential biopsies of oral dysplasia and in situ carcinomas.J Oral Pathol Med,1995;24:18-22.
3 陈谦明，杨光华，付继梁等，口腔粘膜鳞状细胞癌发生过程中P53基因突变与P53蛋白异常表达不一致的意义.中华口腔医学杂志，1996；31(4)：244.
4 Matsuda H,Konishi N,Hiasa Y,et al.Alterations of P16/CDKN,P53 and ras genes in oral squamous cell carcinomas and premalignant lesions.J Oral Pathol Med,1996;25:232～8.
(收稿：1998—06—20)
(修回：1999—01—20), http://www.100md.com
单位：
关键词：正常口腔粘膜；口腔癌前损害；口腔鳞状细胞癌；P53蛋白
临床口腔医学杂志990305 提 要 本研究采用微波处理暴露抗原，通过免疫组化LSAB方法对NOM 6例，OPL 28例，OSCC 34例中P53蛋白表达进行观察，其结果NOM无表达；在OPL中的表达率为82%随着上皮异常增生的程度加重，表达率呈上升趋势(P<0.05)；而在OSCC中表达率为65%，随着肿瘤的分级增加，表达率呈下降趋势(P<0.05)。结果表明，P53蛋白在OPL和OSCC中呈异常表达，并与OPL程度和OSCC分级有关，提示P53基因在OSCC发生发展过程中具有一定作用。
The expression of P53 oncoprotein in normal,premalignant,and malignant lesions of oral mucosal epithelium
, 百拇医药
Yin Cao, et al.
Stomatological Hsopital of Guangdong Province,Guangzhou 510260.
Abstract The objective of the study was to investigate the effects of P53 protein on the malignant development of mucosal epithelium.The level of P53 protein expression was determined immunohistochemically in normal oral mucosa(NOM),oral precancerous lesions(OPL),and oral sequmous cell carcinoma(OSCC).P53 protein expression was negative in NOM,while P53 protein positive staining was found in 23/28(82%) of OPL,and in 22/34(65%) of OSCC.Thus,the overexpression of P53 is involved in early stage as well as in later stage of tumorigenesis,and is closely related to the degree of tumor.The results indicate that P53 gene plays a role in the development and progression of OSCC.
, 百拇医药
Key words Normal oral mucosa(NOM) Oral precancerous lesion(OPL) Oral squamous cell carcinoma(OSCC) P53 protein
本研究采用微波处理暴露抗原，通过免疫组织化学方法对正常口腔粘膜(Normal oralmucosa,NOM)、口腔癌前损害(Oral precancerous lesion,OPL)和口腔鳞状细胞癌(Oral squamous cell carcinoma,OSCC)中P53蛋白表达进行观察和分析，以期为口腔粘膜癌变机制的研究提供依据。
材料和方法
1. 试剂：DAKO-P53,DO-7单克隆抗体(DAKO公司，1：200)；LSAB试剂盒(DAKO公司，1：150)；DAB显示剂(Sinma公司，1：150)。
, http://www.100md.com
2. 标本：选择NOM 6例，OPL 28例，OSCC 34例，所有标本均经10%中性福尔马林固定，石蜡包埋。一般情况见表1。
表1 68例观察标本的一般情况 病 理 诊 断
病 理 分 级
例 数
NOM
0
6
OPL
轻
9
中
, http://www.100md.com 6
重
13
OSCC
Ⅰ
13
Ⅱ
15
Ⅲ
6
上述关于OPL诊断分类参考WHO 1978的标准，OPL上皮异常增生分轻、中、重度；OSCC分级参考WHO 1971年的标准，分Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ级。
3. 实验方法：将每个标本连续病理切片3张(5μm)，其中，一张作HE染色，一张作空白对照，一张作P53蛋白免疫组化染色。常规脱蜡，脱水，置3%过氧化氢甲醇溶液中孵育30分钟，将切片置入蒸馏水，微波炉内处理10分钟(功率550W)，待切片冷却后，按免疫组化ABC法常规操作。空白对照组以PBS代替I抗，其余步骤同免疫组化。
, 百拇医药
4. 观察内容：P53蛋白表达分布情况：阳性细胞为胞核呈棕黄色颗粒；P53阳性表达率变化情况：统计处理(χ2检验)。结 果
1. P53蛋白阴性染色：NOM和阴性对照切片
2. OPL的P53蛋白阳性染色。(图1)
图1 OPL的中度上皮异常增生，P53阳性细胞位于基底层和上皮浅层
轻度上皮异常增生：位于基底层，阳性细胞着色浅，数量少。
中度上皮异常增生：阳性细胞位于基底层和基底旁层。
, http://www.100md.com
重度上皮异常增生：阳性细胞位于基底层和上皮浅层。胞核着色变深，数量剧增。
3. OSCC的P53蛋白阳性染色：阳性细胞分布在癌巢周和侵袭前沿区，胞核着色明显变深，数量剧增(图2、3、4)
图2 OSCCⅠ级阳性细胞呈散发型分布
图3 OSCCⅡ级阳性细胞呈灶型分布
图4 OSCCⅢ级阳性细胞呈泛染型分布
(1)Ⅰ级：主要呈散发型分布
, http://www.100md.com
(2)Ⅱ级：主要呈灶染型分布
(3)Ⅲ级：主要呈泛染型分布
4. P53蛋白表达情况(表2)。
表2 P53蛋白在NOM、OPL和OSCC中
表 达 情 况(68例) 病理诊断
病理分级
例数
阳性例数
阳性率%
NOM
0
, http://www.100md.com
6
0
0
OPL
轻
9
6
66.7
中
6
5
83.3
重
13
, 百拇医药
12
92.3
OSCC
Ⅰ
13
11
84.6
Ⅱ
15
9
60.0
Ⅲ
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, http://www.100md.com
33.3
表2显示OPL组总的P53蛋白阳性表达率约为82%，不同异常增生之间差异有显著性(P<0.05)。总趋势是随着上皮异常增生程度加重；OSCC组P53蛋白表达阳性率约为65%，在Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ分级中差异有显著性(P<0.05)。总趋势P53蛋白表达的阳性率呈下降趋势。讨 论
本研究结果，P53蛋白在NOM无表达，在OPL表达率82%，随着上皮异常增生程度加重，表达率呈上升趋势，而在OSCC中表达率65%，在Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ分级中表达率呈下降趋势，结果显示，P53蛋白在OPL和OSCC中均呈异常表达，其表达率与癌前损害程度和肿瘤分级有关。关于P53基因在肿瘤恶变初期阶段，还是晚期发挥作用，目前尚有争议。Ogden等报导，在正常、良性及癌前病变的口腔及宫颈粘膜中P53蛋白无表达，认为P53蛋白的异常表达与癌变的晚期有关〔1〕。但近来Regezi等研究认为，P53蛋白表达与OSCC发生的早期有关〔2〕。本研究P53蛋白在OPL和OSCC均有较高的表达率，提示P53基因在OSCC发生发展过程中具有一定作用，其作用机制有待进一步深入研究。
, 百拇医药
目前关于P53蛋白在OPL和OSCC中表达研究结果不十分一致。陈谦明等报导，P53蛋白在OPL中表达率90%，在OSCC中表达率61%〔3〕。而Matsuda等报导，P53蛋白在OPL表达率10%，在OSCC中表达率35%〔4〕。总的来说，国内学者高于国外学者的结果。其原因可能与标本固定，P53单抗种类、微波处理抗原与否、免疫组化方法选择，以及种族等原因有关。因此，我们认为，关于P53蛋白在OSCC发生发展过程表达的免疫组化研究，有待进一步标准化，系统化和定量化。
*广东省卫生厅资助项目
作者单位：殷操，胡雁，隆光培，黄泽民 510260广州，广东省口腔医院；沈丽佳 暨南大学医学院口腔病理教研室
参考文献
, 百拇医药
1 Ogden GR,Kiddie RA,Lunny DP,et al.Assessment of P53 protein expression in normal,benign,and malignant oral mucosa.J Pathol,1992;166:389.
2 Regezi JA,Zarbo RJ,Pisanty S,et al.P53 protein expression in sequential biopsies of oral dysplasia and in situ carcinomas.J Oral Pathol Med,1995;24:18-22.
3 陈谦明，杨光华，付继梁等，口腔粘膜鳞状细胞癌发生过程中P53基因突变与P53蛋白异常表达不一致的意义.中华口腔医学杂志，1996；31(4)：244.
4 Matsuda H,Konishi N,Hiasa Y,et al.Alterations of P16/CDKN,P53 and ras genes in oral squamous cell carcinomas and premalignant lesions.J Oral Pathol Med,1996;25:232～8.
(收稿：1998—06—20)
(修回：1999—01—20), http://www.100md.com