慢性肺心病急性期患者血液中一氧化氮与SOD、LPO含量变化及意义
作者：陈美云 林其昌 黄志华 吴武松 陈公平
单位：福建医科大学附属第一医院呼吸内科，福州市，350005
关键词：肺心病；一氧化氮；超氧化物岐化酶；过氧化脂质；自由基
心血管康复医学杂志/990304
摘要 目的：为了探讨一氧化氮(NO)和超氧化物岐化酶(SOD)、过氧化脂质(LPO)在慢性肺心病急性期患者血液中含量变化关系及其意义。方法：应用比色法测定32例老年慢性肺心病患者血液中NO及SOD、LPO水平。结果：老年肺心病急性期血清NO和SOD含量明显降低，血浆LPO含量明显增高，与正常对照组比较均有显著性差异(P<0.01)。结论：慢性肺心病急性期患者血清NO含量与氧自由基损伤程度有密切关系。一氧化氮减少可能是慢性肺心病急性期形成肺动脉高压的主要因素之一。而氧自由基可能参与慢性肺心病急性期的病理生理过程。
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Clinical significance of determination of serum NO、SOD and LPO in old patients with Cor pulmonale of acute onset
CHEN Meiyun,LIN Qichang,HUANG Zhihua,et al.//Chinese Journal of Cardiovascular Rehabilitation Medicine,1999,8(3):8
Abstract Objective:To study the changes and significance of serum NO,SOD and plasma LPO in patients with Cor pulmonale of acute onset.Methods:The blood samples of 32 cases of Cor pulmonale were determined by colorimetry.Results:The results indicated that the contents of serum NO and SOD in cases with Cor pulmonale of acute onset remarkably decreased while plasma LPO increased，it is in significant differnce(P<0.01) from normal controls.Conclusion:These results suggest that the contents of serum NO in cases with Cor pulmonale of acute onset is closely related to the oxygen-free radical injury.The NO may be one of the main factors in the development of pulmonary arterial hypertension.The oxygen-free radical may be involved in the pathophysiological process of acute phase of Cor pulmonale.
, 百拇医药
Author′s address Departement of Internal Medicine,First Affiliated Hospital of Fujian Medical College,Fuzhou,350003
Key words Cor pulmonale;Nitric oxide;Superoxide dismutase;Lipid peroxidation;Free radicals
近年研究表明，一氧化氮(NO)在调节心血管、神经系统和免疫功能方面起着重要作用。一氧化氮能抑制缺氧性肺血管收缩[1]。为了探讨血液中NO和超氧化物岐化酶(SOD)、过氧化脂质(LPO)在慢性肺心病中的作用，我们测定了32例老年人慢性肺心病急性期患者血液中的NO与SOD、LPO含量，现报告如下：
1 对象与方法
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1.1 对象
1.1.1 慢性肺心病急性期患者32例，均符合全国肺心病专业会议制订的诊断标准，男性18例，女性14例，年龄60～73岁，平均67.6岁。
1.1.2 正常对照组：健康献血人员32例，男性21例，女性11例，年龄23～42岁，平均39.4岁。均经体检确诊为无心、肺、肝、肾等疾病的健康人。所有病例在抽血检查前均未用过维生素C、维生素E。
1.2 方法
1.2.1 NO测定方法：住院翌日晨采静脉血1ml于肝素抗凝管中，待测NO水平。取血样0.3ml血清加5%NaOH溶液0.2ml及5%ZnSO4 1ml，混匀，静置30分钟后，10000rpm离心15分钟，上清液供NO-2/NO-3测定。取镉颗粒用重蒸水洗涤3次，加5mmol/L CuSO4溶液(按1g镉4ml CuSO4溶液的比例)反应5分钟，弃去 CuSO4溶液，用重蒸水洗涤3次后，用滤纸吸干水分，即为镀铜镉。取去蛋白上清液及试剂空白液各1ml于试管中，分别加入甘氨酸-NaOH缓冲液1.4ml，各管分别加入新镀铜镉颗粒3g，塞上橡皮塞，固定于恒温震荡器上，振荡2.5h，将标本中的NO-3还原为NO-2。吸取还原液2ml分别加入Griess试剂2ml产生显色反应，在波长546nm下，测定吸光度，其值通过查NaNO2标准曲线，再乘上稀释倍数(6倍)即得血清中的NO-2与NO-3。的总浓度(NO-2/NO-3)。以浓度0～60μmol/L的亚硝酸标准液系列制作标准曲线。
, 百拇医药
1.2.2 SOD采用Pyrogallol-MBT比色法[2，3]，结果以U/gHb表示。
1.2.3 LPO采用Satoh等TBA比色法[4]，结果以血清nmol/ml表示。
1.2.4 统计学处理：采用配对t检验，数据以
±s表示。
2 结果
慢性肺心病急性期患者正常对照组的NO、SOD、LPO含量，见表1。
表1 两组血NO、SOD、LPO的测定结果(±s) 组 别
, 百拇医药
例数
NO
(μmol/L)
SOD
(U/g Hb)
LPO
(nmol/L)
对照组
32
38±14.2
1103.75±94.89
3.44±0.99
, 百拇医药 肺心病组
32
21.75±2.32
996.78±17.87
5.37±0.19
与正常对照组比较，*P<0.01
表1的结果显示肺心病急性期患者血清NO和SOD含量明显降低，血浆LPO含量明显增高，与正常对照组比较均有显著性差异(P<0.01)。
3 讨论
据文献报道，慢性缺氧可能损害NO的产生，由于NO产生减少，从而会加重肺动脉高压[5]。本研究结果显示，慢性肺心病急性期患者血清NO的含量水平明显低于正常对照组(P<0.01)。由于内源性NO合成减少，可明显增强急性缺氧性的肺血管收缩，这可能是慢性肺心病急性期形成肺动脉高压的主要因素之一。另外，本研究结果还表明肺心病急性期患者血浆中LPO明显增高，与文献报道一致[6]。其原因为本研究组的病人均系因急性呼吸道感染及肺内感染入院，肺内吞噬细胞及中性粒细胞因感染而被活化，可产生过多的自由基，使脂质过氧化作用增强，自由基产生与清除失衡，导致肺心病急性期时LPO明显升高。因而，LPO是反映机体受氧自由基损伤情况的良好指标。
, 百拇医药
据内山照雄报道[7]，自由基与肺损伤关系密切，诸如氧自由基可引起α-抗胰蛋白酶失活和弹性蛋白酶氧化分解作用增强，是肺气肿发病的主要环节[8]；超氧阴离子(O-2)可损伤内皮细胞造成肺代谢功能异常；自由基可与5-羟色胺、花生四烯酸及蛋白酶等起协同作用，促进肺血管痉挛及肺组织破坏加重。由于肺血管壁的脂质过氧化物的产生，引起肺小动脉纤维化及动脉硬化，可导致肺动脉高压，对肺心病的发生、发展具有促进作用。故在肺心病的防治中需高度重视自由基致伤作用，积极采用各种措施，减少自由基生成。
以上表明慢性肺心病急性期患者血清NO含量与氧自由基损伤程度有密切关系。因此，积极寻找一种能使一氧化氮释放量增加的药物和方法，同时增加抗氧化剂的使用是治疗慢性肺心病，降低肺动脉高压药的一种新途径。
4 参考文献
1 Pepke-zaba J,Higenbottam TW,Dinh-xuan AT,et al.Inhaled nitric oxide as a cause of selective pulmonary vasodilatation in pulmonary hypertension.Lancet.1991,388:1173
, 百拇医药
2 Minami M,et al.A simplified assay method of superoxide dismutase activity for clinical use.Clin Chim Acta.1979,92:337
3 兰开蔚，等.超氧化物岐化酶活力测定，Pyuogallol-NBT比色法与化学发光法比较.生物化学与物质物理进展，1988，15(2)：138
4 Satoh K,et al.Serum lipid peroxide in cerebrovascular disorders by a new colorimetric method,Clin Chim Acta.1978,90:37
5 曹伟标，曾正陪，朱元珏，等.一氧化氮合成抑制剂对犬体内外内皮素-1分泌的影响.中华医学杂志，1995，75：164
6 吴振庚.老年学杂志，1981，1(1)：37
7 内山照雄.肺止过酸化脂质.日本胸部临床，1984，43：903
8 张琳.自由基与肺抗氧化系统.国外医学呼吸系统分册，1988(3)：118, 百拇医药
单位：福建医科大学附属第一医院呼吸内科，福州市，350005
关键词：肺心病；一氧化氮；超氧化物岐化酶；过氧化脂质；自由基
心血管康复医学杂志/990304
摘要 目的：为了探讨一氧化氮(NO)和超氧化物岐化酶(SOD)、过氧化脂质(LPO)在慢性肺心病急性期患者血液中含量变化关系及其意义。方法：应用比色法测定32例老年慢性肺心病患者血液中NO及SOD、LPO水平。结果：老年肺心病急性期血清NO和SOD含量明显降低，血浆LPO含量明显增高，与正常对照组比较均有显著性差异(P<0.01)。结论：慢性肺心病急性期患者血清NO含量与氧自由基损伤程度有密切关系。一氧化氮减少可能是慢性肺心病急性期形成肺动脉高压的主要因素之一。而氧自由基可能参与慢性肺心病急性期的病理生理过程。
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Clinical significance of determination of serum NO、SOD and LPO in old patients with Cor pulmonale of acute onset
CHEN Meiyun,LIN Qichang,HUANG Zhihua,et al.//Chinese Journal of Cardiovascular Rehabilitation Medicine,1999,8(3):8
Abstract Objective:To study the changes and significance of serum NO,SOD and plasma LPO in patients with Cor pulmonale of acute onset.Methods:The blood samples of 32 cases of Cor pulmonale were determined by colorimetry.Results:The results indicated that the contents of serum NO and SOD in cases with Cor pulmonale of acute onset remarkably decreased while plasma LPO increased，it is in significant differnce(P<0.01) from normal controls.Conclusion:These results suggest that the contents of serum NO in cases with Cor pulmonale of acute onset is closely related to the oxygen-free radical injury.The NO may be one of the main factors in the development of pulmonary arterial hypertension.The oxygen-free radical may be involved in the pathophysiological process of acute phase of Cor pulmonale.
, 百拇医药
Author′s address Departement of Internal Medicine,First Affiliated Hospital of Fujian Medical College,Fuzhou,350003
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近年研究表明，一氧化氮(NO)在调节心血管、神经系统和免疫功能方面起着重要作用。一氧化氮能抑制缺氧性肺血管收缩[1]。为了探讨血液中NO和超氧化物岐化酶(SOD)、过氧化脂质(LPO)在慢性肺心病中的作用，我们测定了32例老年人慢性肺心病急性期患者血液中的NO与SOD、LPO含量，现报告如下：
1 对象与方法
, http://www.100md.com
1.1 对象
1.1.1 慢性肺心病急性期患者32例，均符合全国肺心病专业会议制订的诊断标准，男性18例，女性14例，年龄60～73岁，平均67.6岁。
1.1.2 正常对照组：健康献血人员32例，男性21例，女性11例，年龄23～42岁，平均39.4岁。均经体检确诊为无心、肺、肝、肾等疾病的健康人。所有病例在抽血检查前均未用过维生素C、维生素E。
1.2 方法
1.2.1 NO测定方法：住院翌日晨采静脉血1ml于肝素抗凝管中，待测NO水平。取血样0.3ml血清加5%NaOH溶液0.2ml及5%ZnSO4 1ml，混匀，静置30分钟后，10000rpm离心15分钟，上清液供NO-2/NO-3测定。取镉颗粒用重蒸水洗涤3次，加5mmol/L CuSO4溶液(按1g镉4ml CuSO4溶液的比例)反应5分钟，弃去 CuSO4溶液，用重蒸水洗涤3次后，用滤纸吸干水分，即为镀铜镉。取去蛋白上清液及试剂空白液各1ml于试管中，分别加入甘氨酸-NaOH缓冲液1.4ml，各管分别加入新镀铜镉颗粒3g，塞上橡皮塞，固定于恒温震荡器上，振荡2.5h，将标本中的NO-3还原为NO-2。吸取还原液2ml分别加入Griess试剂2ml产生显色反应，在波长546nm下，测定吸光度，其值通过查NaNO2标准曲线，再乘上稀释倍数(6倍)即得血清中的NO-2与NO-3。的总浓度(NO-2/NO-3)。以浓度0～60μmol/L的亚硝酸标准液系列制作标准曲线。
, 百拇医药
1.2.2 SOD采用Pyrogallol-MBT比色法[2，3]，结果以U/gHb表示。
1.2.3 LPO采用Satoh等TBA比色法[4]，结果以血清nmol/ml表示。
1.2.4 统计学处理：采用配对t检验，数据以
±s表示。2 结果
慢性肺心病急性期患者正常对照组的NO、SOD、LPO含量，见表1。
表1 两组血NO、SOD、LPO的测定结果(
±s) 组 别, 百拇医药
例数
NO
(μmol/L)
SOD
(U/g Hb)
LPO
(nmol/L)
对照组
32
38±14.2
1103.75±94.89
3.44±0.99
, 百拇医药 肺心病组
32
21.75±2.32
996.78±17.87
5.37±0.19
与正常对照组比较，*P<0.01
表1的结果显示肺心病急性期患者血清NO和SOD含量明显降低，血浆LPO含量明显增高，与正常对照组比较均有显著性差异(P<0.01)。
3 讨论
据文献报道，慢性缺氧可能损害NO的产生，由于NO产生减少，从而会加重肺动脉高压[5]。本研究结果显示，慢性肺心病急性期患者血清NO的含量水平明显低于正常对照组(P<0.01)。由于内源性NO合成减少，可明显增强急性缺氧性的肺血管收缩，这可能是慢性肺心病急性期形成肺动脉高压的主要因素之一。另外，本研究结果还表明肺心病急性期患者血浆中LPO明显增高，与文献报道一致[6]。其原因为本研究组的病人均系因急性呼吸道感染及肺内感染入院，肺内吞噬细胞及中性粒细胞因感染而被活化，可产生过多的自由基，使脂质过氧化作用增强，自由基产生与清除失衡，导致肺心病急性期时LPO明显升高。因而，LPO是反映机体受氧自由基损伤情况的良好指标。
, 百拇医药
据内山照雄报道[7]，自由基与肺损伤关系密切，诸如氧自由基可引起α-抗胰蛋白酶失活和弹性蛋白酶氧化分解作用增强，是肺气肿发病的主要环节[8]；超氧阴离子(O-2)可损伤内皮细胞造成肺代谢功能异常；自由基可与5-羟色胺、花生四烯酸及蛋白酶等起协同作用，促进肺血管痉挛及肺组织破坏加重。由于肺血管壁的脂质过氧化物的产生，引起肺小动脉纤维化及动脉硬化，可导致肺动脉高压，对肺心病的发生、发展具有促进作用。故在肺心病的防治中需高度重视自由基致伤作用，积极采用各种措施，减少自由基生成。
以上表明慢性肺心病急性期患者血清NO含量与氧自由基损伤程度有密切关系。因此，积极寻找一种能使一氧化氮释放量增加的药物和方法，同时增加抗氧化剂的使用是治疗慢性肺心病，降低肺动脉高压药的一种新途径。
4 参考文献
1 Pepke-zaba J,Higenbottam TW,Dinh-xuan AT,et al.Inhaled nitric oxide as a cause of selective pulmonary vasodilatation in pulmonary hypertension.Lancet.1991,388:1173
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2 Minami M,et al.A simplified assay method of superoxide dismutase activity for clinical use.Clin Chim Acta.1979,92:337
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6 吴振庚.老年学杂志，1981，1(1)：37
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