氦氖激光照射对荷瘤小鼠免疫细胞增殖活性的作用研究
作者：高美华 李武修 冯献启 宫照龙 王海燕 胡涛
单位：256603 山东滨州医学院免疫室
关键词：肿瘤；激光；小鼠
中华物理医学与康复杂志990329 【中图号】 R454.2
氦氖(He-Ne)激光治疗仪是近年来用于临床疾病治疗的新型仪器，取得了显著的治疗效果[1]。 目前对激光的研究主要集中在临床效果的观察，而对激光生物学的作用研究甚少，本研究的主要目的是探讨激光的免疫效应，从细胞及分子水平探讨激光对免疫细胞活性的影响。
1 材 料 和 方 法
1.1 动物分组
取BALB/C小鼠24只，体质量18～20 g，雌雄各半，每只小鼠背部皮下注射SP2/0骨髓瘤细胞3×106，接种瘤细胞前用脱毛剂将小鼠背部毛发脱净。接种瘤细胞后24 h将其分为3组。Ⅰ组：对照组，仅致瘤而不进行激光治疗。Ⅱ组：隔日激光组，接种瘤细胞后24 h，采用上海医用激光仪器厂生产的HNZSQ -Ⅱ型氦氖激光照射器原束照射脾区，输出功率24 mW，能量密度76.43J/cm2，照射距离50 cm，光斑直径0.5 cm，照射时间10 min/次，隔日照射1次。15 d为1个疗程。Ⅲ组：连续激光照射组，激光照射方法、部位、剂量同Ⅱ组，每日照射1次，连续照射15次为1个疗程。实验第16 d处死小鼠，无菌操作取出脾脏及胸腺组织，进行免疫检测。
, 百拇医药
1.2 免疫细胞活性检测
采用MTT还原分析法[2]。将脾脏和胸腺分别制成细胞悬液，用1640营养液洗3次，将细胞配成5×106/ml，取100 μl(含5×105细胞)细胞加入96孔培养板中，每孔加入ConA 20 μl(浓度5 μg/ml)，在37 ℃体积分数为5%的CO2培养箱中培养48 h，收获前5 h掺入MTT50 ug/孔，培养结束时，低温离心1 000 rpm/min，弃上清，加入二甲亚砜150 μl，振荡10 min，490 nm处测OD值，作为脾细胞、胸腺细胞的增殖反应。
1.3 统计学处理
数据以均数±标准差(
±s)表示,组间差异采用t检验。
, 百拇医药
2 结 果
表1显示He-Ne激光照射具有增强荷瘤小鼠胸腺细胞增殖活性的作用。与非激光照射组(Ⅰ)相比P<0.01，差异有显著性。尤其连续激光照射组作用更为显著，由此证明激光具有增强T细胞活性的功能。
表1 He-Ne激光照射对荷瘤小鼠
胸腺细胞增殖反应的影响(±s) 组 别
鼠数
(只)
激光照射
次 数
胸腺细胞增殖
, http://www.100md.com
反应(OD)
Ⅰ
8
0
0.221±0.025
Ⅱ
8
7
0.562±0.021**
Ⅲ
8
14
0.698±0.036**
, 百拇医药
注:与Ⅰ组比较 **P<0.01
表2显示,He-Ne激光照射具有促进脾细胞增殖的作用，Ⅱ、Ⅲ组与Ⅰ组相比,P<0.01，差异有显著性。
表2 He-Ne激光照射对荷瘤小鼠脾
细胞增殖活性的影响(±s) 组别
鼠数
(只)
激光照射
方 法
脾细胞增殖
反应(ODA)
, 百拇医药
Ⅰ
8
0
0.496±0.038
Ⅱ
8
隔日
0.792±0.047**
Ⅲ
8
连续
0.976±0.028**
, http://www.100md.com 注：与Ⅰ组比较 **P<0.01
表3显示,He-Ne激光照射具有促进胸腺及脾细胞增殖的作用。激光组(Ⅱ、Ⅲ) 与非激光组(Ⅰ) 相比P<0.01，P<0.05，差异均有显著性。
表3 He-Ne激光照射对胸腺、脾脏
重量的影响(s) 组 别
胸腺重量
脾脏重量
Ⅰ
0.181±0.002
1.265±0.186
, http://www.100md.com
Ⅱ
0.212±0.004*
1.892±0.145**
Ⅲ
0.234±0.030*
2.182±0.232*
注：与Ⅰ组比较 *P<0.05 **P<0.01
3 讨 论
He-Ne激光照射能增强免疫细胞活性的机理是：He-Ne激光具有光、热、磁、压效应[3]。 免疫细胞具有应激反应受体，当激光的光子作用于免疫细胞的受体时，免疫细胞膜跨膜电位形成，膜磷脂双层分子层膜电特性发生改变，线粒体活性增强，细胞内酶活化，尤其是线粒体脱氢酶活性增强，可分解2,5-二苯基溴化四氮唑蓝(MTT)产生黑色甲
，以颗粒溶解后所呈现的颜色深浅反映胸腺细胞及脾细胞的数量及功能[4]。在He-Ne 激光的热刺激下易产生生物电流，生物电刺激神经系统，使之释放多种神经介质，如β-内啡肽对胸腺细胞及脾细胞亦有调节作用。深入研究He-Ne激光的免疫效应，可提高治疗有关疾病的能力。
, http://www.100md.com
参 考 文 献
1 荆忱，戴成祥，刘瑞云,等.低能量氦氖激光血管内照 射治疗冠心病60例.中华理疗杂志，1997，20：89-90.
2 杨贵贞,主编.免疫生物工程纲要与技术.长春：吉林科学技术出版社，1991.208.
3 Goldman L.The biomedical laser: technology and clinical applications. Springer Verlay New York,1981.229.
4 何金生，李瑞珠，宗庭益.中国免疫学杂志，1996,12:356-358.
(收稿 1998-03-05 修回 1999-04-26), http://www.100md.com
单位：256603 山东滨州医学院免疫室
关键词：肿瘤；激光；小鼠
中华物理医学与康复杂志990329 【中图号】 R454.2
氦氖(He-Ne)激光治疗仪是近年来用于临床疾病治疗的新型仪器，取得了显著的治疗效果[1]。 目前对激光的研究主要集中在临床效果的观察，而对激光生物学的作用研究甚少，本研究的主要目的是探讨激光的免疫效应，从细胞及分子水平探讨激光对免疫细胞活性的影响。
1 材 料 和 方 法
1.1 动物分组
取BALB/C小鼠24只，体质量18～20 g，雌雄各半，每只小鼠背部皮下注射SP2/0骨髓瘤细胞3×106，接种瘤细胞前用脱毛剂将小鼠背部毛发脱净。接种瘤细胞后24 h将其分为3组。Ⅰ组：对照组，仅致瘤而不进行激光治疗。Ⅱ组：隔日激光组，接种瘤细胞后24 h，采用上海医用激光仪器厂生产的HNZSQ -Ⅱ型氦氖激光照射器原束照射脾区，输出功率24 mW，能量密度76.43J/cm2，照射距离50 cm，光斑直径0.5 cm，照射时间10 min/次，隔日照射1次。15 d为1个疗程。Ⅲ组：连续激光照射组，激光照射方法、部位、剂量同Ⅱ组，每日照射1次，连续照射15次为1个疗程。实验第16 d处死小鼠，无菌操作取出脾脏及胸腺组织，进行免疫检测。
, 百拇医药
1.2 免疫细胞活性检测
采用MTT还原分析法[2]。将脾脏和胸腺分别制成细胞悬液，用1640营养液洗3次，将细胞配成5×106/ml，取100 μl(含5×105细胞)细胞加入96孔培养板中，每孔加入ConA 20 μl(浓度5 μg/ml)，在37 ℃体积分数为5%的CO2培养箱中培养48 h，收获前5 h掺入MTT50 ug/孔，培养结束时，低温离心1 000 rpm/min，弃上清，加入二甲亚砜150 μl，振荡10 min，490 nm处测OD值，作为脾细胞、胸腺细胞的增殖反应。
1.3 统计学处理
数据以均数±标准差(
±s)表示,组间差异采用t检验。, 百拇医药
2 结 果
表1显示He-Ne激光照射具有增强荷瘤小鼠胸腺细胞增殖活性的作用。与非激光照射组(Ⅰ)相比P<0.01，差异有显著性。尤其连续激光照射组作用更为显著，由此证明激光具有增强T细胞活性的功能。
表1 He-Ne激光照射对荷瘤小鼠
胸腺细胞增殖反应的影响(
±s) 组 别鼠数
(只)
激光照射
次 数
胸腺细胞增殖
, http://www.100md.com
反应(OD)
Ⅰ
8
0
0.221±0.025
Ⅱ
8
7
0.562±0.021**
Ⅲ
8
14
0.698±0.036**
, 百拇医药
注:与Ⅰ组比较 **P<0.01
表2显示,He-Ne激光照射具有促进脾细胞增殖的作用，Ⅱ、Ⅲ组与Ⅰ组相比,P<0.01，差异有显著性。
表2 He-Ne激光照射对荷瘤小鼠脾
细胞增殖活性的影响(
±s) 组别鼠数
(只)
激光照射
方 法
脾细胞增殖
反应(ODA)
, 百拇医药
Ⅰ
8
0
0.496±0.038
Ⅱ
8
隔日
0.792±0.047**
Ⅲ
8
连续
0.976±0.028**
, http://www.100md.com 注：与Ⅰ组比较 **P<0.01
表3显示,He-Ne激光照射具有促进胸腺及脾细胞增殖的作用。激光组(Ⅱ、Ⅲ) 与非激光组(Ⅰ) 相比P<0.01，P<0.05，差异均有显著性。
表3 He-Ne激光照射对胸腺、脾脏
重量的影响(
s) 组 别胸腺重量
脾脏重量
Ⅰ
0.181±0.002
1.265±0.186
, http://www.100md.com
Ⅱ
0.212±0.004*
1.892±0.145**
Ⅲ
0.234±0.030*
2.182±0.232*
注：与Ⅰ组比较 *P<0.05 **P<0.01
3 讨 论
He-Ne激光照射能增强免疫细胞活性的机理是：He-Ne激光具有光、热、磁、压效应[3]。 免疫细胞具有应激反应受体，当激光的光子作用于免疫细胞的受体时，免疫细胞膜跨膜电位形成，膜磷脂双层分子层膜电特性发生改变，线粒体活性增强，细胞内酶活化，尤其是线粒体脱氢酶活性增强，可分解2,5-二苯基溴化四氮唑蓝(MTT)产生黑色甲
，以颗粒溶解后所呈现的颜色深浅反映胸腺细胞及脾细胞的数量及功能[4]。在He-Ne 激光的热刺激下易产生生物电流，生物电刺激神经系统，使之释放多种神经介质，如β-内啡肽对胸腺细胞及脾细胞亦有调节作用。深入研究He-Ne激光的免疫效应，可提高治疗有关疾病的能力。, http://www.100md.com
参 考 文 献
1 荆忱，戴成祥，刘瑞云,等.低能量氦氖激光血管内照 射治疗冠心病60例.中华理疗杂志，1997，20：89-90.
2 杨贵贞,主编.免疫生物工程纲要与技术.长春：吉林科学技术出版社，1991.208.
3 Goldman L.The biomedical laser: technology and clinical applications. Springer Verlay New York,1981.229.
4 何金生，李瑞珠，宗庭益.中国免疫学杂志，1996,12:356-358.
(收稿 1998-03-05 修回 1999-04-26), http://www.100md.com