NO在血管内皮细胞损伤中的标志作用
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《急诊医学》
作者：杨春华 林水金 杨映波 冯素珍
单位：杨春华，广州军区总医院ICU 510010 广州；林水金、杨映波、冯素珍 第三军医大学创伤科
关键词：内皮素；一氧化氮；血管内皮细胞；标志作用
急诊医学990306
摘要：目的：探讨一氧化氮(NO)在血管内皮细胞(VEC)损伤中的作用。方法：利用创伤失血性休克造成兔VEC损伤，检测创伤前、创伤后6小时及1、3、7天外周血内皮素(ET)及NO含量，并观测VEC超微结构的改变。结果：伤后6小时及第1天，外周血ET、NO含量同步显著升高，而且NO含量高峰较ET提前出现。伤后第3、7天，外周血ET、NO含量同步显著下降。VEC超微结构于伤后6小时无改变，伤后第1天VEC超微结构损伤轻微，伤后第3、7天损伤严重。结论：1.NO与ET早期同步升高，可拮抗ET升高引起的血管痉挛，改善组织血供。2.NO作为VCE损伤标志物较ET更为敏感。
, 百拇医药
The marker Role of nitric oxide in the damage of vascular endothelial cell
Yang Chunhua，Lin Shuijing，Yang Yingbo，et al.Icu of General Hospital，Guangzhou P.L.A repion of China，Guangzhou 510010
Abstact Aim：To explore the marker role of nitric oxide(NO)in the damage of vascular endothelial cell(VEC).Methods：A traumatic low volume shock model of rabbit was made and then examined the concentration of endothelin(ET)and NO in the peripheral blood before and 6 h or 1、3、7 days after trauma.The ultrastructure of VEC of rabbit kidney was also observed at the same time.Results：The concentration of ET and NO in the peripheral blood increased obviously 6 h or 1 day after trauma and decreased rapidly 3 or 7 days after wards.But the peak concentration of NO came up earlier than that of ET.The ultrastructure of VEC did not show any damage 6 hours after trama，but showed slight damage 1 day after wards，and sevese damage 3、7 days after trauma.Conclusion：1.The early synchronous in crease of NO and ET could antagonize the vascular spasm resulting from elevation of ET.2.NO is more sensitive as a marker of VEC than ET.
, 百拇医药
Key words Edothin Nitric oxide Vascular endothelial cell Marker function
ET、NO主要是由VEC合成、分泌的一对重要的调节血管张力的物质。Schaleramp认为ET还是VEC损伤的标志物[1]。但NO可作为VEC损伤的标志物，尚未见文献报告。
1 材料与方法
1.1 实验动物与分组：日本长耳兔40只，体重2.2～3.0Kg，雌雄不拘，随机分为实验组(25只)，对照组(15只)。
1.2 实验方法[2]：本实验MOF动物模型是以盛志勇MOF动物模型及葛庆华挤压伤综合症动物模型为指导而建立的，详见参考文献。
, 百拇医药
1.3 实验时限点与指标：外周血ET、NO含量及VEC超微结构，时限点：伤前，伤后6小时及伤后第1、3、7天。
1.4 ET含量测定[3]：采用ET放射免疫测定试剂盒，按其说明书进行操作。
1.5 外周血NO含量测定[4]：据NO氧化生成硝酸盐及亚硝酸盐，硝酸盐通过镉柱还原成为亚硝酸盐。后者与GREISS试剂生成粉红色化合物的原理，进行比色，通过标准曲线，测定血中的NO2-的浓度，从而间接反映NO水平。
1.6 兔肾VEC超微结构观察：肾VEC超微结构观察：分别于伤前，伤后6小时及第1、3、7天取实验组、对照组动物各一只活杀。取肾组织，切成0.2×0.2×0.2CM3大小置于3%戊二醛中固定，送第三军医大学电镜室包埋，制片及观察，照相。
, 百拇医药
1.7 统计处理：本实验资料均采用t检验。
2 结果
2.1 外周血ET及NO含量。
2.1.1 外周血NO含量：如表1所示：伤后6h及第1天，外周血中NO含量显著高于伤前及对照组(P<0.01)；以伤后6h升高最为显著，并显著高于伤后第1天(P<0.01)；伤后第3、7天外周血NO含量显著低于伤前及对照组(P<0.01)，但它们之间无显著差异(P>0.05)。表1 外周血NO含量 (单位：ug/ml) 分组
伤前
伤后
6h
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1d
3d
7d
实验组
1.12±
0.22
1.96±
0.24△△△
1.69±
0.24△△
0.44±
0.11△
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0.40±
0.12△
对照组
1.10±
0.17
1.15±
0.23
1.15±
0.23
1.12±
0.14
1.20±
0.18
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注：△△△、△△、△代表的均数之间及其与伤前和对照组相比相差非常显著(P<0.01)
2.1.2 外周血ET含量：如表2所示：实验组外周血ET含量于伤后6h及第1天显著高于伤前及对照组(P<0.01)，以伤后6h升高最为显著；伤后3、7天外周血ET含量显著低于伤前及对照组(P<0.01)。
表2 外周血ET含量 单位：(Pg/ml) 分组
伤前
伤 后
6h
1d
3d
7d
, 百拇医药
实验组
92.7±
18.3
239.1±
34.5△△
270.3±
41.8△△△
66.5±
17.1△
50.4±
17.2△
对照组
, 百拇医药
94.2±
19.7
109.1±
18.9
87.3±
15.2
86.1±
11.8
87.3±
13.4
注：△△△、△△、△代表的均数之间相比相差显著(P<0.05)，且均较伤前及对照组相比相差非常显著(P<0.01)
2.2 VEC超微结构改变。见图：伤前、伤后6h及对照组兔肾脏VEC超微结构正常。伤后第1天，兔肾VEC的核周间隙轻度增宽，内质网、线粒体等细胞器肿胀。伤后第3天，VEC核周间隙进一步增宽，核膜皱折形成，内质网及线粒体肿胀加重，核染色质边集。伤后第7天，VEC内质网、线粒体及核空泡化。细胞器数目减少。
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伤后第一天兔肾VEC超微结构 伤后第二天兔肾VEC超微结构 伤后第七天兔肾VEC超微结构
3 讨论
ET、NO主要是由VEC合成分泌的一对重要的调节血管张力的物质。ET是内皮衍生收缩因子(EDCF)主要构成成分，它的主要作用是收缩血管。NO是内皮衍生舒张因子(EDRF)的主要构成成分，它的主要作用是舒张血管。此外ET还是VEC损伤的标志物。NO具有杀伤外来微生物和肿瘤细胞的毒性分子作用[5]及参与GTP→CGMP反应的活化[6]等功能。但NO在VEC损伤中的标志作用尚未见文献报道。
本实验结果显示：伤前6h，VEC超微结构无改变；伤后第1天，VEC超微结构有轻度损伤，伤后3、7天，VEC超微结构损伤严重。外周血ET、NO含量于伤后6h及第1天均显著升高，于伤后第3、7天显著下降。但NO含量高峰较ET提早出现。提示：①NO含量随ET的升高而升高，有拮抗ET的缩血管作用，改善休克缺血。②外周血NO含量高峰较ET提早出现，表明NO含量测定作为VEC损伤的指标较ET更为敏感。
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4 结论
本实验结果表明：①在VEC损伤早期，外周血NO含量随ET升高而升高，并有拮抗ET的作用。②NO作为VEC损伤的标志物较ET更为敏感。
参考文献
1 Schaleramp MA.Renin-angiotension system compotents and endothelial disease.Clin-Investing 1993，(suppl)：3～6
2 杨春华，林水金，杨映波.创伤后大白兔重要脏器的结构及功能损害.广东医学 1996；17(12)；838
3 曾强.内皮素的放射免疫分析.解放军医学杂志，1991，16(6)：403
, 百拇医药
4 Green LC，Wanger DA.Analysis of Nitrate and Nitrite in biological fluids.J and Biochem 1982，126：131
5 Hibbs JB，Taintor RR，Vavrin Z.Macrophage Cytotoxcity.Role for L-arginic deiminase and amino nitrogen oxidation to nitrite.Science 1987，235：473
6 Hibbs R，Olson US.Special transitions of Nitrosyl henes during ligland binding to hemoglobin.J Biol Chem，1979，254：473(收稿：1999-01-01), 百拇医药
单位：杨春华，广州军区总医院ICU 510010 广州；林水金、杨映波、冯素珍 第三军医大学创伤科
关键词：内皮素；一氧化氮；血管内皮细胞；标志作用
急诊医学990306
摘要：目的：探讨一氧化氮(NO)在血管内皮细胞(VEC)损伤中的作用。方法：利用创伤失血性休克造成兔VEC损伤，检测创伤前、创伤后6小时及1、3、7天外周血内皮素(ET)及NO含量，并观测VEC超微结构的改变。结果：伤后6小时及第1天，外周血ET、NO含量同步显著升高，而且NO含量高峰较ET提前出现。伤后第3、7天，外周血ET、NO含量同步显著下降。VEC超微结构于伤后6小时无改变，伤后第1天VEC超微结构损伤轻微，伤后第3、7天损伤严重。结论：1.NO与ET早期同步升高，可拮抗ET升高引起的血管痉挛，改善组织血供。2.NO作为VCE损伤标志物较ET更为敏感。
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The marker Role of nitric oxide in the damage of vascular endothelial cell
Yang Chunhua，Lin Shuijing，Yang Yingbo，et al.Icu of General Hospital，Guangzhou P.L.A repion of China，Guangzhou 510010
Abstact Aim：To explore the marker role of nitric oxide(NO)in the damage of vascular endothelial cell(VEC).Methods：A traumatic low volume shock model of rabbit was made and then examined the concentration of endothelin(ET)and NO in the peripheral blood before and 6 h or 1、3、7 days after trauma.The ultrastructure of VEC of rabbit kidney was also observed at the same time.Results：The concentration of ET and NO in the peripheral blood increased obviously 6 h or 1 day after trauma and decreased rapidly 3 or 7 days after wards.But the peak concentration of NO came up earlier than that of ET.The ultrastructure of VEC did not show any damage 6 hours after trama，but showed slight damage 1 day after wards，and sevese damage 3、7 days after trauma.Conclusion：1.The early synchronous in crease of NO and ET could antagonize the vascular spasm resulting from elevation of ET.2.NO is more sensitive as a marker of VEC than ET.
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Key words Edothin Nitric oxide Vascular endothelial cell Marker function
ET、NO主要是由VEC合成、分泌的一对重要的调节血管张力的物质。Schaleramp认为ET还是VEC损伤的标志物[1]。但NO可作为VEC损伤的标志物，尚未见文献报告。
1 材料与方法
1.1 实验动物与分组：日本长耳兔40只，体重2.2～3.0Kg，雌雄不拘，随机分为实验组(25只)，对照组(15只)。
1.2 实验方法[2]：本实验MOF动物模型是以盛志勇MOF动物模型及葛庆华挤压伤综合症动物模型为指导而建立的，详见参考文献。
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1.3 实验时限点与指标：外周血ET、NO含量及VEC超微结构，时限点：伤前，伤后6小时及伤后第1、3、7天。
1.4 ET含量测定[3]：采用ET放射免疫测定试剂盒，按其说明书进行操作。
1.5 外周血NO含量测定[4]：据NO氧化生成硝酸盐及亚硝酸盐，硝酸盐通过镉柱还原成为亚硝酸盐。后者与GREISS试剂生成粉红色化合物的原理，进行比色，通过标准曲线，测定血中的NO2-的浓度，从而间接反映NO水平。
1.6 兔肾VEC超微结构观察：肾VEC超微结构观察：分别于伤前，伤后6小时及第1、3、7天取实验组、对照组动物各一只活杀。取肾组织，切成0.2×0.2×0.2CM3大小置于3%戊二醛中固定，送第三军医大学电镜室包埋，制片及观察，照相。
, 百拇医药
1.7 统计处理：本实验资料均采用t检验。
2 结果
2.1 外周血ET及NO含量。
2.1.1 外周血NO含量：如表1所示：伤后6h及第1天，外周血中NO含量显著高于伤前及对照组(P<0.01)；以伤后6h升高最为显著，并显著高于伤后第1天(P<0.01)；伤后第3、7天外周血NO含量显著低于伤前及对照组(P<0.01)，但它们之间无显著差异(P>0.05)。表1 外周血NO含量 (单位：ug/ml) 分组
伤前
伤后
6h
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1d
3d
7d
实验组
1.12±
0.22
1.96±
0.24△△△
1.69±
0.24△△
0.44±
0.11△
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0.40±
0.12△
对照组
1.10±
0.17
1.15±
0.23
1.15±
0.23
1.12±
0.14
1.20±
0.18
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注：△△△、△△、△代表的均数之间及其与伤前和对照组相比相差非常显著(P<0.01)
2.1.2 外周血ET含量：如表2所示：实验组外周血ET含量于伤后6h及第1天显著高于伤前及对照组(P<0.01)，以伤后6h升高最为显著；伤后3、7天外周血ET含量显著低于伤前及对照组(P<0.01)。
表2 外周血ET含量 单位：(Pg/ml) 分组
伤前
伤 后
6h
1d
3d
7d
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实验组
92.7±
18.3
239.1±
34.5△△
270.3±
41.8△△△
66.5±
17.1△
50.4±
17.2△
对照组
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94.2±
19.7
109.1±
18.9
87.3±
15.2
86.1±
11.8
87.3±
13.4
注：△△△、△△、△代表的均数之间相比相差显著(P<0.05)，且均较伤前及对照组相比相差非常显著(P<0.01)
2.2 VEC超微结构改变。见图：伤前、伤后6h及对照组兔肾脏VEC超微结构正常。伤后第1天，兔肾VEC的核周间隙轻度增宽，内质网、线粒体等细胞器肿胀。伤后第3天，VEC核周间隙进一步增宽，核膜皱折形成，内质网及线粒体肿胀加重，核染色质边集。伤后第7天，VEC内质网、线粒体及核空泡化。细胞器数目减少。
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伤后第一天兔肾VEC超微结构 伤后第二天兔肾VEC超微结构 伤后第七天兔肾VEC超微结构
3 讨论
ET、NO主要是由VEC合成分泌的一对重要的调节血管张力的物质。ET是内皮衍生收缩因子(EDCF)主要构成成分，它的主要作用是收缩血管。NO是内皮衍生舒张因子(EDRF)的主要构成成分，它的主要作用是舒张血管。此外ET还是VEC损伤的标志物。NO具有杀伤外来微生物和肿瘤细胞的毒性分子作用[5]及参与GTP→CGMP反应的活化[6]等功能。但NO在VEC损伤中的标志作用尚未见文献报道。
本实验结果显示：伤前6h，VEC超微结构无改变；伤后第1天，VEC超微结构有轻度损伤，伤后3、7天，VEC超微结构损伤严重。外周血ET、NO含量于伤后6h及第1天均显著升高，于伤后第3、7天显著下降。但NO含量高峰较ET提早出现。提示：①NO含量随ET的升高而升高，有拮抗ET的缩血管作用，改善休克缺血。②外周血NO含量高峰较ET提早出现，表明NO含量测定作为VEC损伤的指标较ET更为敏感。
, http://www.100md.com
4 结论
本实验结果表明：①在VEC损伤早期，外周血NO含量随ET升高而升高，并有拮抗ET的作用。②NO作为VEC损伤的标志物较ET更为敏感。
参考文献
1 Schaleramp MA.Renin-angiotension system compotents and endothelial disease.Clin-Investing 1993，(suppl)：3～6
2 杨春华，林水金，杨映波.创伤后大白兔重要脏器的结构及功能损害.广东医学 1996；17(12)；838
3 曾强.内皮素的放射免疫分析.解放军医学杂志，1991，16(6)：403
, 百拇医药
4 Green LC，Wanger DA.Analysis of Nitrate and Nitrite in biological fluids.J and Biochem 1982，126：131
5 Hibbs JB，Taintor RR，Vavrin Z.Macrophage Cytotoxcity.Role for L-arginic deiminase and amino nitrogen oxidation to nitrite.Science 1987，235：473
6 Hibbs R，Olson US.Special transitions of Nitrosyl henes during ligland binding to hemoglobin.J Biol Chem，1979，254：473(收稿：1999-01-01), 百拇医药