冷冻切片常见问题分析与预防
作者：骆新兰
单位：骆新兰(广东省人民医院病理科，广州 510080)
关键词：冷冻超微组织切片术
临床与实验病理学杂志990431
分类号 R446； R361.2 文献标识码 A
文章编号 1001-7399(1999)04-0356-02
冷冻切片是借助低温使组织冻结达到一定的硬度进行切片的一种方法。它是术中诊断的一种重要方法。但由于各种原因，影响冷冻切片的质量，拖延病理报告发出的时间，直接影响着病理诊断的及时性、准确性，间接影响着病人的预后。归结起来有以下几方面。
1 切片不全或不能切片
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切片不全是指切出的切片组织切面不完整、有缺损现象；不能切片是指组织块的温度过高或过低不能制作一张完整的切片。切片不全直接影响着冷冻报告切片的准确性。导致切片不全或不能切片的常见的原因有几下几方面。
1.1 组织内含过多的脂肪或坏死组织 脂肪或坏死组织较一般的组织冷冻的温度要低些，当活组织达到所需的温度时，其还比较软，从而影响切片的完整性和拖延冷冻报告发出的时间。
1.2 组织块过冷 组织冷冻过度易致切片破碎或呈粉沫状，不能制作一张完整的切片。
1.3 组织块冷冻不均匀 在配合使用液氮时，组织块放入液氮时不能保持水平状态且液氮量不足的情况下，可产生此现象。
1.4 冻头的温度不足 冷冻切片时要求冻头的温度保持在-25℃～-30℃左右，冻头的温度达不到要求时，组织很快回软，也不能保证切片的完整。
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1.5 组织块过大 预防与处理：①注意组织的性质。冷冻切片的组织除了要保持新鲜外，还应注意避免组织内含过多的脂肪(脂肪组织除外)及坏死组织。②组织大小要适中。冷冻切片机内切片刀移动的范围有一定的限制，超出其范围时，易致切片不全。一般情况下，冷冻切片的组织块大小1 cm×1 cm×0.3cm，但卵巢肿瘤及脂肪组织可稍为大些。另外，包埋时，应将组织平放在冻头的中央。③掌握好冷冻时间。根据组织块的大小、性质，确定冷冻时间，一般13～17 s(使用液氮者)，若组织较大或脂肪组织时间可适当长些，而甲状腺、脑组织和淋巴结等冷冻的时间相对要短些。④保持冻箱的温度。做到每次做完冷冻切片应关好冷冻箱的盖子。
2 切片皱缩或卷缩
这也是影响切片质量的重要因素之一。常见的原因有：(1)刀锋变钝。(2)防卷板粘有异物，防卷板的作用是防止切片卷缩，但若粘有异物，切片时组织会被挤压而缩在一起。(3)防卷板与刀锋的位置不平行、不协调。(4)组织块包埋不完全，缺乏支撑作用。预防与处理的方法：①注意检查刀具，及时更换刀口，定期磨刀。②保持防卷板的清洁，每做一例冷冻切片，均应将刀口及防卷板拭擦干净，防止切片的污染和切片皱缩。③调整刀、防卷板的位置，保证两者平行，且防卷板比刀锋前0.2 mm左右。④包埋组织应完全，没法切片者再滴加包埋胶。
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3 切片脱落
冷冻切片是利用温度差(即玻片与组织切片的温度差)将切片粘贴在玻片上，然后进行固定、染色。下面几种情况下可影响切片粘贴的牢固程度，而导致切片脱落：(1)组织内含过多的坏死组织。组织细胞坏死崩解后，局部的渗透压升高，吸收水分，切片一经固定，水分逸出，坏死组织失去支撑作用，染色时组织容易脱落。(2)固定液浓度过低，这是最常见的原因。(3)载玻片不干净。(4)切片太厚。预防及处理方法：①避免组织内带有坏死组织，条件允许者重新取材；若没有组织可代替，切片固定时间长些，经95%乙醇双重固定后，用电吹风将切片吹干(温度不能过高，以防破坏组织结构)然后再行染色且动作应轻柔。②定期更换固定液。一般每周更换一次，例数较多者，适当增加次数；另外，每次做完冷冻，应及时将盛固定液的瓶盖盖好，以防固定液挥发而降低其浓度。③保持载玻片干净，平时应将玻片盖好，防止灰尘或其它异物的污染。若新购买的玻片较脏，洗涤过后才使用。④调好切片的厚度，切片厚度以5～7 μm较为合适(脂肪组织可稍为厚些)。
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4 “结晶水”现象
它是由于组织细胞在冷冻过程中，冷冻时间过长，其蛋白质与水所形成的胶体状态受到破坏，水分从胶体状态的蛋白质中分离出来所造成。“结晶水”的出现易导致误诊。为防止这一现象的发生，宜做到：①配合使用液氮冷冻组织。因为细胞的保存与致冷的时间有着密切的关系，致冷所需的时间越长，细胞的形态改变越大。普通的恒冷切片机组织冻台的温度大约-30℃～-35℃，凝固组织所需时间约3～4 min，而液氮的温度约为-198℃，冷冻组织时间大约13～17 s，大大地缩短了冷冻组织的时间，可杜绝“结晶水”现象。②操作者的动作应迅速。笔者曾在动作迅速程度上做过试验，得出的结论是“结晶水”现象的发生率与动作的迅速程度成反比。
5 组织块脱落
冷冻切片一般要求在30 min内发出病理报告，以便手术医生能尽快选择手术方式。但若组织块脱落，会拖延病理报告发出的时间，而耽误病人的手术时间。常见原因有：(1)冻头在冷冻机内放置时间过长，致使包埋胶还来不及渗到冻头的底部便凝固了，导致包埋胶与冻头粘连不紧，稍受外力的作用便脱落；(2)冻头上的包埋胶冲洗不干净。
总之，要制作一张优质的冷冻切片，除了要求医生要注意取材外，技术人员必须加强责任心，做好日常的检查工作和预防工作，力争做到防患于未然。
作者简介：骆新兰，男，30岁，技师
收稿日期：1998-03-30, http://www.100md.com
单位：骆新兰(广东省人民医院病理科，广州 510080)
关键词：冷冻超微组织切片术
临床与实验病理学杂志990431
分类号 R446； R361.2 文献标识码 A
文章编号 1001-7399(1999)04-0356-02
冷冻切片是借助低温使组织冻结达到一定的硬度进行切片的一种方法。它是术中诊断的一种重要方法。但由于各种原因，影响冷冻切片的质量，拖延病理报告发出的时间，直接影响着病理诊断的及时性、准确性，间接影响着病人的预后。归结起来有以下几方面。
1 切片不全或不能切片
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切片不全是指切出的切片组织切面不完整、有缺损现象；不能切片是指组织块的温度过高或过低不能制作一张完整的切片。切片不全直接影响着冷冻报告切片的准确性。导致切片不全或不能切片的常见的原因有几下几方面。
1.1 组织内含过多的脂肪或坏死组织 脂肪或坏死组织较一般的组织冷冻的温度要低些，当活组织达到所需的温度时，其还比较软，从而影响切片的完整性和拖延冷冻报告发出的时间。
1.2 组织块过冷 组织冷冻过度易致切片破碎或呈粉沫状，不能制作一张完整的切片。
1.3 组织块冷冻不均匀 在配合使用液氮时，组织块放入液氮时不能保持水平状态且液氮量不足的情况下，可产生此现象。
1.4 冻头的温度不足 冷冻切片时要求冻头的温度保持在-25℃～-30℃左右，冻头的温度达不到要求时，组织很快回软，也不能保证切片的完整。
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1.5 组织块过大 预防与处理：①注意组织的性质。冷冻切片的组织除了要保持新鲜外，还应注意避免组织内含过多的脂肪(脂肪组织除外)及坏死组织。②组织大小要适中。冷冻切片机内切片刀移动的范围有一定的限制，超出其范围时，易致切片不全。一般情况下，冷冻切片的组织块大小1 cm×1 cm×0.3cm，但卵巢肿瘤及脂肪组织可稍为大些。另外，包埋时，应将组织平放在冻头的中央。③掌握好冷冻时间。根据组织块的大小、性质，确定冷冻时间，一般13～17 s(使用液氮者)，若组织较大或脂肪组织时间可适当长些，而甲状腺、脑组织和淋巴结等冷冻的时间相对要短些。④保持冻箱的温度。做到每次做完冷冻切片应关好冷冻箱的盖子。
2 切片皱缩或卷缩
这也是影响切片质量的重要因素之一。常见的原因有：(1)刀锋变钝。(2)防卷板粘有异物，防卷板的作用是防止切片卷缩，但若粘有异物，切片时组织会被挤压而缩在一起。(3)防卷板与刀锋的位置不平行、不协调。(4)组织块包埋不完全，缺乏支撑作用。预防与处理的方法：①注意检查刀具，及时更换刀口，定期磨刀。②保持防卷板的清洁，每做一例冷冻切片，均应将刀口及防卷板拭擦干净，防止切片的污染和切片皱缩。③调整刀、防卷板的位置，保证两者平行，且防卷板比刀锋前0.2 mm左右。④包埋组织应完全，没法切片者再滴加包埋胶。
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3 切片脱落
冷冻切片是利用温度差(即玻片与组织切片的温度差)将切片粘贴在玻片上，然后进行固定、染色。下面几种情况下可影响切片粘贴的牢固程度，而导致切片脱落：(1)组织内含过多的坏死组织。组织细胞坏死崩解后，局部的渗透压升高，吸收水分，切片一经固定，水分逸出，坏死组织失去支撑作用，染色时组织容易脱落。(2)固定液浓度过低，这是最常见的原因。(3)载玻片不干净。(4)切片太厚。预防及处理方法：①避免组织内带有坏死组织，条件允许者重新取材；若没有组织可代替，切片固定时间长些，经95%乙醇双重固定后，用电吹风将切片吹干(温度不能过高，以防破坏组织结构)然后再行染色且动作应轻柔。②定期更换固定液。一般每周更换一次，例数较多者，适当增加次数；另外，每次做完冷冻，应及时将盛固定液的瓶盖盖好，以防固定液挥发而降低其浓度。③保持载玻片干净，平时应将玻片盖好，防止灰尘或其它异物的污染。若新购买的玻片较脏，洗涤过后才使用。④调好切片的厚度，切片厚度以5～7 μm较为合适(脂肪组织可稍为厚些)。
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4 “结晶水”现象
它是由于组织细胞在冷冻过程中，冷冻时间过长，其蛋白质与水所形成的胶体状态受到破坏，水分从胶体状态的蛋白质中分离出来所造成。“结晶水”的出现易导致误诊。为防止这一现象的发生，宜做到：①配合使用液氮冷冻组织。因为细胞的保存与致冷的时间有着密切的关系，致冷所需的时间越长，细胞的形态改变越大。普通的恒冷切片机组织冻台的温度大约-30℃～-35℃，凝固组织所需时间约3～4 min，而液氮的温度约为-198℃，冷冻组织时间大约13～17 s，大大地缩短了冷冻组织的时间，可杜绝“结晶水”现象。②操作者的动作应迅速。笔者曾在动作迅速程度上做过试验，得出的结论是“结晶水”现象的发生率与动作的迅速程度成反比。
5 组织块脱落
冷冻切片一般要求在30 min内发出病理报告，以便手术医生能尽快选择手术方式。但若组织块脱落，会拖延病理报告发出的时间，而耽误病人的手术时间。常见原因有：(1)冻头在冷冻机内放置时间过长，致使包埋胶还来不及渗到冻头的底部便凝固了，导致包埋胶与冻头粘连不紧，稍受外力的作用便脱落；(2)冻头上的包埋胶冲洗不干净。
总之，要制作一张优质的冷冻切片，除了要求医生要注意取材外，技术人员必须加强责任心，做好日常的检查工作和预防工作，力争做到防患于未然。
作者简介：骆新兰，男，30岁，技师
收稿日期：1998-03-30, http://www.100md.com