血液一氧化氮浓度变化与脑梗塞的关系
作者：郭英华 刘广志 赵慧元 张少静
单位：青岛医学院附属医院(266003)
关键词：
实用医学杂志990414 一氧化氮(NO)是由血管内皮细胞释放的一种化学性质不稳定，生物半衰期仅5秒左右，可被氧自由基、血红蛋白及氢醌等灭活，在有氧条件下，分解为硝酸、亚硝酸的无机化合物，NO广泛分布于中枢神经系统(CNS)、周围神经系统中，它代表一种新型的生物信息递质，在细胞信号传递中起重要作用[1]。因此，近年来NO成为医学研究的热点，其扩张脑血管，调节脑血流和神经传导功能及细胞毒性作用越来越被人们重视。本文测定了不同病灶脑梗塞患者血清中NO的分解产物亚硝酸盐、硝酸盐的浓度，并分期进行观察，说明在脑梗塞过程中NO浓度变化是引起脑梗塞的特异性改变，其病理生理作用具有双重机制。因此，对NO浓度检测不仅可作为一种客观生化，判断病情的有用指标，也可对脑梗塞的治疗提供有力帮助。
, 百拇医药
1 资料与方法
1.1 一般资料 病人组：急性期脑梗塞患者32例，均系1996年6月～12月本院急症科及神经内科住院患者，男21例，女11例，年龄45～83岁，平均62.68±13.43岁，全部为首次发病，其中发病6小时后入院10例，发病24小时后入院22例，诊断均符合全国第二届脑血管病会议制定的评分标准，均经头颅CT或磁共振(MRI)证实。分为两个亚组，其中皮层支动脉闭塞型(CAO亚组)为12例，深穿支动脉闭塞型(PAO亚组)为20例，全部病人中合并高血压病10例，合并糖尿病5例。对照组：共20例，男13例，女7例，年龄45～72岁，平均57.1±8.3岁，均排除肝、肾代谢系统疾病，与病人组的年龄和性别经统计无显著性差异。
1.2 标本采集 病人入院后分别于7小时，24小时，3天，5天，7天后从其肘部抽取静脉血3 ml，放入干燥试管中，室温放置30～60分钟后，以3 000 r/min离心10分钟，将分离血清放入-30℃冰箱保存待测。对照组只取1次，方法同上。
, 百拇医药
1.3 测定方法
1.3.1 制作标准曲线 当日配制1.0 mM亚硝酸钠6.9 mg，加双蒸水定容到100 ml。按下列浓度制作标准曲线，每浓度取0.1 ml，在721型分光光度计上比色，读取OD值，绘制标准曲线，见表1。
表1 制作标准曲线所取的系列浓度 NO(μmol/L)
0
4
8
12
16
20
1mM亚硝酸钠(ul)
, 百拇医药
0
2
4
6
8
10
双蒸馏水(ul)
1000
998
996
994
992
990
, 百拇医药 1.3.2 NO测定步骤 取血清0.1 ml 加0.15%硫酸锌0.6 ml混匀，加双蒸水0.4 ml混匀，再加4%NaOH溶液0.1 ml，冰上孵育60分钟，12 000 r/min，离心2分钟，取上清液0.6 ml加双蒸水0.4 ml及0.3%磺胺试剂0.1 ml，冰上孵育15分钟后加6 mM苯乙烯二胺盐酸盐0.1 ml ，室温放置1小时，在721型分光光度计上545 nm处比色，读OD值，根据标准曲线，计算NO浓度。
1.4 统计学方法 所有结果均采用平均数±标准差(
±s)，方差分析，组间比较t检验，直线相关分析。
2 结果
2.1 不同组血中NO浓度变化的比较，见表2。脑梗塞组NO的浓度于7小时后开始升高(P<0.05)，24小时后明显升高(P<0.01)，3天后下降(P<0.05)，5～7天后虽高于对照组，但差异无显著意义(P>0.05)。
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表2 脑梗塞及对照组血NO浓度比较(±s) 组别
例数
NO浓度(μmol/L)
对照组
20
3.31±1.03
脑梗塞组 7小时
10
4.23±1.32*
24小时
32
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5.49±1.93**
3天
20
4.58±1.41*
5天
18
3.92±1.11
7天
12
3.62±1.51
与对照组比较 * P<0.05，** P<0.01
2.2 PAO亚组与CAO组血中NO浓度变化的比较，见表3。CAO组NO的浓度虽高于PAO亚组，但差异无显著意义(P>0.05)。
, 百拇医药
表3 PAO及CAO亚组血NO浓度变化(±s) 类别
PAO亚组
CAO亚组
例数
NO(μmol/L)
例数
NO(μmol/L)
7小时
6
4.00±1.17
4
, 百拇医药
4.58±1.63*
24小时
20
5.31±2.07**
12
5.79±1.71**
3天
12
4.43±1.50*
8
4.73±1.35*
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5天
10
3.75±1.23
8
4.12±1.16
7天
8
3.63±1.74
4
3.63±1.11
与对照组比较 * P<0.05，** P<0.01
2.3 脑梗塞组合并高血压或糖尿病患者血中NO浓度虽然略高于无并发症患者，但差异无显著意义(P>0.05)。
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2.4 将脑梗塞组血中NO浓度与梗塞灶直径，神经功能评分，分别进行直线相关分析。结果表明，发病24小时后NO水平与神经功能评分呈显著正相关(r=0.6，P<0.01)与梗塞灶直径无显著相关性(r=0.09，P>0.05)。
3 讨论
本文结果表明，脑梗塞患者血中NO水平在发病早期即显著升高，并可持续数天，而后随病程的延续和病情的恢复而逐渐恢复正常，脑缺血时NO含量的改变与NOS(一氧化氮合酶)的表达有关。
本文观察的32例患者，半数以上在脑梗塞以前已患动脉硬化或原发性高血压，文献报道动脉硬化或原发性高血压患者的动脉存在NO生成缺陷[2]。本文中急性脑梗塞患者血中NO水平已达其正常上限，这表明患者此时NO水平较梗塞前增高，从而进一步表明NO可能参与脑组织损伤，但与动物实验结果是否一致，需作进一步研究。
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经过直线相关分析，发现血中NO浓度与神经功能评分呈显著正相关(r=0.06，P<0.01)，与梗塞灶直径无显著相关性(r=0.09，P>0.05)。说明急性期脑梗塞病人血中NO浓度变化在一定程度上可作为判断病情严重程度的指标，而由于NO在病理条件下产生机制的复杂性，可能导致梗塞灶的直径大小对其影响不显著，对此应进一步研究。
以上说明，脑梗塞过程中NO水平变化是脑损害引起的特异性改变，其病理生理作用既可表现为保护机制，又可表现为损伤机制，因而不仅可作为一种客观生化指标判断病情，而且亦为脑梗塞的治疗方面提供帮助。
4 参考文献
1 陈海伦，哲 生. 一氧化氮和呼吸道炎症. 国外医学临床生物化学与检验学分册，1996，17(特刊)：1.
2 Panza JA，Casin PR,Badar DM,et al. Effect of increased availability of endothelium-derived nitric oxide precursor on endothelium-dependent vascular relaxation in normal subjects and in patients with essential hypertension. Circulation，1993，87：1468～1471., 百拇医药
单位：青岛医学院附属医院(266003)
关键词：
实用医学杂志990414 一氧化氮(NO)是由血管内皮细胞释放的一种化学性质不稳定，生物半衰期仅5秒左右，可被氧自由基、血红蛋白及氢醌等灭活，在有氧条件下，分解为硝酸、亚硝酸的无机化合物，NO广泛分布于中枢神经系统(CNS)、周围神经系统中，它代表一种新型的生物信息递质，在细胞信号传递中起重要作用[1]。因此，近年来NO成为医学研究的热点，其扩张脑血管，调节脑血流和神经传导功能及细胞毒性作用越来越被人们重视。本文测定了不同病灶脑梗塞患者血清中NO的分解产物亚硝酸盐、硝酸盐的浓度，并分期进行观察，说明在脑梗塞过程中NO浓度变化是引起脑梗塞的特异性改变，其病理生理作用具有双重机制。因此，对NO浓度检测不仅可作为一种客观生化，判断病情的有用指标，也可对脑梗塞的治疗提供有力帮助。
, 百拇医药
1 资料与方法
1.1 一般资料 病人组：急性期脑梗塞患者32例，均系1996年6月～12月本院急症科及神经内科住院患者，男21例，女11例，年龄45～83岁，平均62.68±13.43岁，全部为首次发病，其中发病6小时后入院10例，发病24小时后入院22例，诊断均符合全国第二届脑血管病会议制定的评分标准，均经头颅CT或磁共振(MRI)证实。分为两个亚组，其中皮层支动脉闭塞型(CAO亚组)为12例，深穿支动脉闭塞型(PAO亚组)为20例，全部病人中合并高血压病10例，合并糖尿病5例。对照组：共20例，男13例，女7例，年龄45～72岁，平均57.1±8.3岁，均排除肝、肾代谢系统疾病，与病人组的年龄和性别经统计无显著性差异。
1.2 标本采集 病人入院后分别于7小时，24小时，3天，5天，7天后从其肘部抽取静脉血3 ml，放入干燥试管中，室温放置30～60分钟后，以3 000 r/min离心10分钟，将分离血清放入-30℃冰箱保存待测。对照组只取1次，方法同上。
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1.3 测定方法
1.3.1 制作标准曲线 当日配制1.0 mM亚硝酸钠6.9 mg，加双蒸水定容到100 ml。按下列浓度制作标准曲线，每浓度取0.1 ml，在721型分光光度计上比色，读取OD值，绘制标准曲线，见表1。
表1 制作标准曲线所取的系列浓度 NO(μmol/L)
0
4
8
12
16
20
1mM亚硝酸钠(ul)
, 百拇医药
0
2
4
6
8
10
双蒸馏水(ul)
1000
998
996
994
992
990
, 百拇医药 1.3.2 NO测定步骤 取血清0.1 ml 加0.15%硫酸锌0.6 ml混匀，加双蒸水0.4 ml混匀，再加4%NaOH溶液0.1 ml，冰上孵育60分钟，12 000 r/min，离心2分钟，取上清液0.6 ml加双蒸水0.4 ml及0.3%磺胺试剂0.1 ml，冰上孵育15分钟后加6 mM苯乙烯二胺盐酸盐0.1 ml ，室温放置1小时，在721型分光光度计上545 nm处比色，读OD值，根据标准曲线，计算NO浓度。
1.4 统计学方法 所有结果均采用平均数±标准差(
±s)，方差分析，组间比较t检验，直线相关分析。2 结果
2.1 不同组血中NO浓度变化的比较，见表2。脑梗塞组NO的浓度于7小时后开始升高(P<0.05)，24小时后明显升高(P<0.01)，3天后下降(P<0.05)，5～7天后虽高于对照组，但差异无显著意义(P>0.05)。
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表2 脑梗塞及对照组血NO浓度比较(
±s) 组别例数
NO浓度(μmol/L)
对照组
20
3.31±1.03
脑梗塞组 7小时
10
4.23±1.32*
24小时
32
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5.49±1.93**
3天
20
4.58±1.41*
5天
18
3.92±1.11
7天
12
3.62±1.51
与对照组比较 * P<0.05，** P<0.01
2.2 PAO亚组与CAO组血中NO浓度变化的比较，见表3。CAO组NO的浓度虽高于PAO亚组，但差异无显著意义(P>0.05)。
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表3 PAO及CAO亚组血NO浓度变化(
±s) 类别PAO亚组
CAO亚组
例数
NO(μmol/L)
例数
NO(μmol/L)
7小时
6
4.00±1.17
4
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4.58±1.63*
24小时
20
5.31±2.07**
12
5.79±1.71**
3天
12
4.43±1.50*
8
4.73±1.35*
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5天
10
3.75±1.23
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4.12±1.16
7天
8
3.63±1.74
4
3.63±1.11
与对照组比较 * P<0.05，** P<0.01
2.3 脑梗塞组合并高血压或糖尿病患者血中NO浓度虽然略高于无并发症患者，但差异无显著意义(P>0.05)。
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2.4 将脑梗塞组血中NO浓度与梗塞灶直径，神经功能评分，分别进行直线相关分析。结果表明，发病24小时后NO水平与神经功能评分呈显著正相关(r=0.6，P<0.01)与梗塞灶直径无显著相关性(r=0.09，P>0.05)。
3 讨论
本文结果表明，脑梗塞患者血中NO水平在发病早期即显著升高，并可持续数天，而后随病程的延续和病情的恢复而逐渐恢复正常，脑缺血时NO含量的改变与NOS(一氧化氮合酶)的表达有关。
本文观察的32例患者，半数以上在脑梗塞以前已患动脉硬化或原发性高血压，文献报道动脉硬化或原发性高血压患者的动脉存在NO生成缺陷[2]。本文中急性脑梗塞患者血中NO水平已达其正常上限，这表明患者此时NO水平较梗塞前增高，从而进一步表明NO可能参与脑组织损伤，但与动物实验结果是否一致，需作进一步研究。
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经过直线相关分析，发现血中NO浓度与神经功能评分呈显著正相关(r=0.06，P<0.01)，与梗塞灶直径无显著相关性(r=0.09，P>0.05)。说明急性期脑梗塞病人血中NO浓度变化在一定程度上可作为判断病情严重程度的指标，而由于NO在病理条件下产生机制的复杂性，可能导致梗塞灶的直径大小对其影响不显著，对此应进一步研究。
以上说明，脑梗塞过程中NO水平变化是脑损害引起的特异性改变，其病理生理作用既可表现为保护机制，又可表现为损伤机制，因而不仅可作为一种客观生化指标判断病情，而且亦为脑梗塞的治疗方面提供帮助。
4 参考文献
1 陈海伦，哲 生. 一氧化氮和呼吸道炎症. 国外医学临床生物化学与检验学分册，1996，17(特刊)：1.
2 Panza JA，Casin PR,Badar DM,et al. Effect of increased availability of endothelium-derived nitric oxide precursor on endothelium-dependent vascular relaxation in normal subjects and in patients with essential hypertension. Circulation，1993，87：1468～1471., 百拇医药